흰굳음병균(B. basiana)을 이용하여 백강잠의 대량생산과 효과적인 사상균 살충제 개발을 위해, 사상균의 대량배양 체계에 있어서 접종원인 단균사의 대량 확보에 필수적인 1차 액제배지를 개발하였다. 농가부산물인 저가의 밀기울을 탄소원으로, 질소원으로는 대두박을 선발하고, 이들의 조성비와 농도에 따른 밀기울·대두박 배지에서 단균사의 성장을 조사한 결과, 밀기울과 대두박을 3:2의 비율로 최종배지 농도가 5%되게 조성하였을 때, 배양 4일째 배지 ml당 약 7.6X108개의 단균사를 얻을 수 있어, 단균사의 성장과 경제성면에서 가장 효과적이었다.
This study was performed to get the basic information concerned to the optimum culture condition of Inonotus obliquus. Several solid media, PDA, MEA and Czapek-Dox, and three liquid media were adopted for the in vitro cultivation. Some main features of the fungal morphological characteristics under cultivation conditions were observed and described. Preliminary results showed that appearance of the mycelial mat, hyphal size and substrate pigmentation differed according to the media. The PDA medium was the most favorable substrate for the growth on solid culture, followed by MEA and Czapek-Dox media. Concerned to the addition of amino acids, 5 amino acids, such as alanine, alginine, isoleucine, leucine and threonine, enhanced to the mycelial growth. Isoleucine was shown the best fungal growth. An important morphological hyphal structure for the fungus, the setae, was found in abundance and diverse its shape and size. In liquid culture, fresh potato broth was the best growth stimulant of the fungus, followed by Malt extract and potato broth. Addition of yeast extract to the liquid media had improved the biomass, but not laccase production.
The rate of growth of Leptospires were studied by culturing in Korthof's media and Cox's liquid media which were treated at four different temperatures. The effect of thiamine hydrochloride in the culture of leptospires were also studied. The results obtained were summerized as followings: 1. The best growth of Leptospira icterohaemorrhagiae and Leptospira canicola was observed in Korthof's media with the rabbit serum heated for 60 minutes at $56^{\circ}C$. 2. A good degree of growth of Leptospira icterohaemorrhagiae and Leptospira canicola was observed in both Cox's liquid media with rabbit serum heated for 30 minutes at $100^{\circ}C$ and with fresh rabbit serum. 3. The growth of Leptospira was enhanced by adding small amount of thiamine to the both media which were shown to be unsatisfactory for the growth of the organisms. 4. Culture of leptospires were attained by simply heating for 30 minutes at $100^{\circ}C$ both Korthof's media and Cox's liquid media containing rabbit serum obtained without aspetic procedures.
An in vitro liquid culture media for the cultivation of entomopathogenic nematode Steinernema carpocapsae was developed. Supplementation of whole milk powder with basal liquid culture media showed a remarkable increase in productivity compared to that without whole milk powder and the maximum nematode concentration reached about $1.5{\times}10^5/mL$ within 20 days. Five to twenty gram per liter of liver extract addition revealed highest pathogenicity against 3rd instar of Galleria mellonella which was above about 90% mortality after 48 hr.
In this study, we investigated the culture conditions of four ectomycorrhizal fungi, namely, Amanita spissacea NIFoS 2719, Pisolithus arhizus NIFoS 2784, Suillus spraguei NIFoS 2848, and Xanthoconium affine NIFoS 2716, in solid and liquid culture media. In addition, we attempted to induce in vitro mycorrhization of the fungi with Pinus densiflora. Prior to liquid culture, we determined the optimal culture conditions for each species in solid media. The results revealed that all species examined are capable of growth in potato dextrose agar (PDA), malt extract agar (MEA), and modified Melin-Norkran's medium (MMN), although their preferred growth media were different. Liquid culture experiments showed that inorganic nitrogen did not enhance the mycelial growth of all four species. Therefore, we used MMN-based liquid inocula to promote the growth of ectomycorrhizal fungi in our symbiosis culture system. Mycorrhization was observed in Xanthoconium affine NIFoS 2716. Morphological analysis revealed that fungi-inoculated roots of P. densiflora form simple and dichotomous lateral roots with dense mycelia. In addition, inoculation with X. affine NIFoS 2716 promoted root and shoot developments.
For cultivation on sawdust-bed of oak-mushroom until present time, inoculation of spawn on sawdust bed has been performed by sawdust spawn. But, liquid spawn may have advantages for rapid mass production of spawn, and now, sawdust-cultivation by liquid spawn inoculation should be applied instead of sawdust spawn. Therefore, investigations were performed to evaluate the effect of sawdust-cultivation by liquid spawn inoculation. The results were as follows: 1. When 11 kinds of liquid media were applied, the oak-mushroom culture medium was the most excellent in growth. Most suitable temperature at PDA was $25^{\circ}C$, and $22.5\sim27.5^{\circ}C$ in range were optimal for liquid culture. In liquid culture, amount of mycelial growth increases rapidly up to 40 days of cultivation. Incubation at fermentor brought yield of 106mg dry mycelia per 40ml media after 17 days. 2. In 1l-spawn bottle, growth of mycelium by inoculation of 20ml-liquid spawns were faster than 6g-sawdust spawn in spread of mycelia. On 2kg-bag culture, inoculations of 10ml-, 20ml- and 30ml-liquid spawns were all slower than 20g-sawdust spawn in mycelial spread. So, amount increasement in ampunt of liquid spawn should be discussed. Yields of mushrooms until third sproutings of 2kg-bag culture were 580g in 30ml-liquid spawn inoculation, but 510g, 486g and 470g from 20g-sawdust spawn, 20ml-liquid spawn and 10ml-liquid spawn, respectively. Thus, 30ml-liquid spawn inoculation was highest in yield.
본 연구에서는 객담 내 결핵균의 배양시험과 약제 감수성 시험 방법으로서 BacT/Alert 액체 배지, Ogawa 배지 및 $L\ddot{o}wenstein$-Jensen 배지 배양법을 비교하였다. 신속 액체배양시스템은 기존의 Egg-based media (Ogawa, $L\ddot{o}wenstein$-Jensen 배지)에 비해 높은 민감도와 빠른 배양으로 결핵환자의 초기 객담 검사와 약제 감수성 시험에 널리 사용되어 왔다. 객담은 N-Acetyl-L-cystine과 4% NaOH로 처리한 후 BacT/Alert 액체 배지 시스템과 Ogawa 배지에 접종하고 배양하여 비교하였다. 결핵환자 객담 검체 135개 중 도말검사결과 양성은 95개였고, Ogawa 배지 배양결과 양성으로 확인된 수는 89개(65.9%)였으며, BacT/Alert 액체 배지에서는 97개(71.9%)가 양성으로 확인되었다. 결핵균 배양 양성 검체의 평균배양일은 Ogawa 배지에서 22.4일, BacT/Alert 액체 배지는 11.3일로 단축되는 것을 확인하였다. 약제 감수성 시험에는 32개 결핵균주를 이용하였으며, isoniazid를 첨가한 BacT/Alert 액체 배지와 $L\ddot{o}wenstein$-Jensen 배지에서의 약제 감수성 시험 검사결과 일치률은 87.5%를 보였고, rifampicin에서의 일치률은 90.6%로 나타났다.
Background: The isolation of non-tuberculous mycobacteria (NTM) has been increasing in South Korea. To date, however, the cause of this increase has not been determined, and it remains unclear whether the use of liquid media has contributed to this increase. The aim of this study was to evaluate the factors associated with NTM isolation and the impact of liquid media on NTM culture. Methods: Mycobacterial smear/culture results of respiratory specimens (sputum and bronchial aspirates), obtained during the years 2002, 2005, and 2010, were retrieved and analyzed retrospectively. Results: During the years 2002, 2005, and 2010, 83,096 sputum specimens were collected from 31,104 patients, and were cultured for mycobacteria, using solid media only in the 2002 and 2005 specimens and both solid and liquid media in the 2010. Of these, 3,516 (4.2%) specimens were smear-positive for acid-fast bacilli (AFB). The annual rate of NTM among positive culture specimens increased from 21% in 2002 to 57.8% in 2010 (p<0.001), as did the proportion of NTM, among AFB smear- and culture-positive specimens, from 12.2% in 2002 to 45.2% in 2010 (p<0.001). In 2010, the NTM culture rate was higher in the liquid than in the solid media (13.9% vs. 8.4%, p<0.001). The NTM rate among AFB-positive specimens was higher in patients aged >50 than ${\leq}$50 years. Conclusion: The rate of NTM isolation has steadily been increasing at the hospital in South Korea, likely due in part to the use of liquid media for the culture.
세포들간의 응집 및 배양용기 표면에의 부착은 야생 점액 세균의 액체배양에 큰 장애물로 작용한다. 이러한 장애를 해결하기 위한 한 방안으로 야생 점액세균으로부터 자연적 분산 돌연변이 균주를 얻는 방법을 시도해 보았다. 실험 대상으로 사용한 균주 M. stipitatus KYC1001은 충남 계룡산의 토양에서 분리된 점액세균으로, 다른 점액세균들과 마찬가지로 액체배지 내에서 대부분의 세포들이 응집체를 형성하거나, 배양용기의 표면에 달라붙는다. 본 연구에서는 야생형 균주들이 세포응집체를 형성하거나 배양용기의 표면에 달라붙게 되는 반면 분산 돌연변이 세포들은 배지 내에 자유로이 떠돌아다니게 될 것이라는 특성을 이용하여, 배양액의 상등액만을 30일에 걸쳐 10회 계대 배양함으로서 분산되어 상등액에 존재할 자연적 분산 돌연변이 세포들을 농화 배양하였다. 그 결과, 액체배지에서 완전히 분산되어 성장하는 한 균주, KYC2001과 부분적으로 분산하여 성장하는 세 균주, KYC2002, 2003, 2004를 얻을 수 있었다.
1차 액체배양액과 2차 pellet 배지로 이루어지는 대량배양체계의 다른 곤충병원성 곰팡이인 Beauveria bassiana, Beauveria brongniartii, Metarhizum anisopliae, Verticillium lecanii 등에 대한 효용성을 조사하기 위하여 단균사 및 분생포자의 성장율을 비교하였다. 그 결과, 액체배양액에서 단균사의 성장율은 접종 후 72시간에 그 수가 최초 접종수에 비해 103-104배까지 증가함을 확인할 수 있었으며, pellet 배지에서 분생자의 수는 접종 후 3주 째에 103배까지 증가됨을 확인할 수 있었다. 본 실험의 결과 진균의 대량배양을 위해 선발된 1차 액체배양액과 2차 pellet 배지는 여러 곤충병원성 진균의 성장에 효율적인 체계임을 확인할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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