한국산 장류콩 종자로부터 최종적으로 Sephadex G-100상에서 분리한 lectin의 분자량, 적혈구 응집력, 온도, 열 안정성, 및 pH의 생화학적 특성을 조사하였다. 분리된 lectin을 SDS-PAGE한 결과, 분자량이 32 kDa와 22 kDa인 2개의 band가 나타났으며, Native PAGE에 의해서 108 kDa의 tetramer임을 알 수 있었다. Lectin은 trypsin을 처리한 사람의 A, B, AB, O 혈액과 쥐 혈액에서 혈구응집 반응이 일어나지 않았으나 토끼에서는 응집 반응이 일어났으며, trypsin을 처리하지 않은 모든 혈액에서는 응집반응이 일어나지 않았다. 이 lectin은 최적온도가 20-$50^{\circ}C$이며, 10-$60^{\circ}C$ 에서 열 안정성을 보였다. 최적 pH는 7.2로서 6.2 이하와 8.0 이상에서는 활성이 상설되었다.
대두(Glycine max L.) 종자로부터 분리된 렉틴을 토끼에 면역화시켜 렉틴항혈청을 얻었다. 이를 이용한 면역화학적 방법을 사용하여 대두렉팅의 면역화학적 특성과 6개 대두 품종의 종자에서 렉틴의 존재를 조사하였다. Crossed immunoeiectrophoresis한 결과 종자는 4종의 침강선을 보임으로서 렉틴에 4종의 항원성분이 존재함을 보여 주었다. 1% agarose gel을 이용하여 Immunodouble diffusion test한 결과 6개 대두 공시품종 모두 렉틴항체에 대하여 침강선을 나타내었고 푸종간 침강선은 모두 유사한 양상을 보였다. ELISA 방법에 의하여 6개 대두 품종간의 렉틴함량을 조사, 비교한 결과 렉틴함량은 장엽콩>광교>황금콩>백운콩>장백콩=팔달콩 순으로 나타났다. 공시품종의 조자로부터 분리한 렉틴은 모두 토끼 적혈구는 응집시켰으나 Fusarium sp., Alternaria sp., Cuvalaria sp. 등의 곰팡이 포자는 응집시키지 못하였다.
In the present study, the author investigated to the cytotoxocity in cultured rat hepatocytes of Viscum album lectin. The cytotoxcity effect in Viscum album lectin on the activity of LDH was also investigated. Viscum album lectin significantly increased LDH leakage into medium of hepatocytes treated or untreated with $CCl_4$ (p<0.001). However, Viscum album lectin significantly increased LDH leakage from $CCl_4$-induced hepatocyte (p<0.001). There was a significant increase in LDH levels relative to the control group. Histological observation basically supported the result obtained from LDH assay. The livers of rats challenged with $CCl_4$ produced a marked increased cytoplasmic vacuoles and inflammatory cells in number, while the number of necrotic cells and swollen hepatocytes did not change significnatly. Rats administered DMSO alone did not alter the normal hepatic architecture. Histological observation of liver section in rat treated 72 hrs with either Viscum album lectin $CCl_4$-induced liver damage showed number of cytoplasmic vaculoe and necrotic cell. The number of inflammatory cell increased markedly. This results suggest to the conclusion that Viscum album lectin has a effect of hepatotoxicity activator.
Park, Won-Bong;Han, Seon-Kyu;Lee, Myung-Hwang;Han, Kwang-Ho
Archives of Pharmacal Research
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제20권4호
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pp.306-312
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1997
We attempted to isolate and characterize the lectins from stem and leaves of Korean mistletoe (Viscum album var. coloratum) by affinity chromatography. Lectin I was isolated only from stem. Lectin II was not isolated from Korean mistletoe, whereas lectin III was isolated from the stem and leaves. The hemagglutinating activity of lectin I was 16HU and inhibited by D-galactose, lactose, and N-acetyl-D-galactosamine. The lectin I has molecular weight of 60, 000D being composed of two basic subunits with molecular weights of 32, 000D and 28, 000D which are linked by a disufide bond. The lectin III from stem has molecular weight of 66, 000D being two basic subunits which have molecular weights of 34, 000D and 29, 000D and are linked by a disufide bond. The activity of lectin I was stable at the pH range of 4.00-8.50 and at a wide range of temperature (0-42.deg. C). The lectin I showed more potent mitogenic activity to murine lymphocytes than concanavalin A.
토마토의 locular fluid로부터 최종적으로 Sephadex G-200 affinity chromatography에 의해 lectin을 분리한 다음, 이들의 분자량, 적혈구 응집력, 혈액특이성, 열 안정성, 최적 온도 및 pH 안정성의 생화학적 성질을 연구하였다. SBS-PAGE의 결과, 분자량이 39 kDa와 23 kDa로서 각각 2개의 subunit로 구성된 124 kDa의 분자량을 가지는 tetramer이다. 트립신으로 처리된 사람의 A, B, O, AB형의 혈액을 사용하여 각각의 혈구응집반응을 확인한 결과, A, B, O, AB형 모두에서 응집반응이 일어났으며, 이 중 B형 혈액에서 가장 높은 활성을 나타냈으며, A와 O형은 중간, AB형은 가장 낮은 활성을 보였다. 분리된 토마토 locular fluid의 최적반응 온도는 $50^{\circ}C$로서, 가장 높은 $70^{\circ}C$를 포함하는 $40-80^{\circ}C$에서 열 안정성을 보였으며, 이의 최적 pH는 7.0이다.
Lectin from mistletoe(Viscum coloratum) fermented by Lactobacillus plantarum for 1,2,3 days were obtained by salt fractionation, gel filtration, anion exchange chromatography and SDS-PAGE, and compared with the lectin from unfermented mistletoe. The new lectin of molecular weight of about 18,500D from fermented mistletoe was identified.
대두(大豆)-근류균(根瘤菌)의 공생(共生)에서 숙주식물(宿主植物)의 Root Exudate에 대한 근류균(根瘤菌)의 화학주성(化學走性)이 근류형성(根瘤形性)(숙주식물(宿主植物))에 미치는 영향(影響)을 밝히기 위해 연구(硏究)한 결과(結果)는 다음과 같다. 대두(大豆) Seed Lectin은 품종간(品種間) 차이(差異)가 없었으며 분자량(分子量) 120,000정도(程度)의 4개(個)의 동일(同一)한 subunit를 가지는 물질(物質)이며, Pea Seed Lectin은 분자량(分子量) 44,000정도(程度)이며 15,000과 7,000정도(程度)의 두 종류(種類)의 subunit를 가지는 물질(物質)이며 대두(大豆) lectin은 표준 lectin 항체와 침강선을 형성하였다. 그러나 완두의 lectin은 표준 lectin과 항원-항체반응이 없었으므로 두 lectin은 동일 항원이 되지 않아 서로 다른 물질이었다. 팔달의 Crude Root Exudate에 대(對)한 근류균(根瘤菌)의 화학주성(化學走性) 비(比)는 KCTC 2422는 각각(各各) 3.5이고 LPN-100은 1.4이며 LCR-101은 각각(各各) 1.4이었다. 뿌리분비물의 각 fraction에 대한 근류균의 화학주성은 중성분획이 가장 높고 양성분획이 그다음이며 음성분획이 가장 낮은 화학주성을 나타내어 각물질에 대한 근류균의 친화도에 차이가 있었다. 근류형성(根瘤形性)의 정도(程度)는 KCTC 2422의 경우(境遇)는 접종(接種)후 7日경부터 Nitrogenase Activity가 나타났으며 LCR-101는 15일 이후(以後)에 Nitrogenase Activity를 나타내었다. LPN-100은 Nitrogenase Activity가 전혀 나타나지 않아 근류균(根瘤菌)의 화학주성(化學走性)이 숙주인식과정(宿主認識過程)에 영향(影響)을 미쳤음을 확인(確認)할 수 있었다.
We previously reported the isolation of a sialic acid-specific lectin eluted from the bark of Maackia fauriei using alkaline buffer on a fetuin-affinity column. Application of a borate-based elution buffer in the present study increased the specific activity of purified lectin from crude protein extract by 2.6-fold, whilst only slightly decreasing the recovery by 1.13%. The biological properties of the lectin eluted with borate buffer were the same as those of the lectin eluted with alkaline buffer such as in terms of the hemagglutination activity, hemagglutination inhibition activity, molecular mass, purity, and cytotoxicity to human breast cancer cells. A prepared biotin-labeled lectin conjugate was used to investigate the binding to various glycoproteins. Our results indicate that eluting with borate buffer is more efficient than using alkaline buffer to isolate the lectin adsorbed in a fetuin-affinity column.
This study was carried out to investigate effect of lipid metabolism in Viscum album lectin on rats. The lectin was purified by sepharose 4B affinity chromatography and gel filtration using sephadex G-150 with plant material from Viscum album collected in Mt. Duk Yui. After 72 h of $CCl_4$ injection (in olive oil, 1:1, 2 mg/kg) there was a significant increase in serum total cholesterol and triglycerige levels relative to the control group. However, treatment of both Viscum album and purified lectin were significantly decreased lipid parameters against the $CCl_4$-induced. Histological observation basically supported the result obtained from serum lipid assay. The livers of rats challenged with $CCl_4$ produced a marked increase of cytoplasmic vacuoles in number, while the number of necrotic cells and swollen hepatocytes did not change significnatly. Rats administered olive oil alone did not alter the normal hepatic architecture. Histological observation of the liver section in rats treated 72 h with either Viscum album purified lectin or $CCl_4$-induced liver lipogenesis showed decreased numbers of cytoplasmic vaculoes and necrotic cells. The normal hepatic architectural pattern was observed in Hematoxylin-eosin stain. These results suggest that Viscum album lectin has a possible protective effect of lipid metabolim in rats.
e-Lectin은 당 결합 단백질과 세포 응집 단백질로서, 식물방어의 역할도 하는데 방울토마토 열매의 locular fluid에는 곰팡이로부터 식물의 보호 기능을 하는 것으로 생각되는 chitin 결합 lectin이 들어 있다. 이에 본 연구에서는 방울토마토의 locular fluid로부터 최종적으로 Sephadex G-200을 통과시켜 lectin을 분리한 다음, 이의 항균성과 분자량, 적혈구 응집력, 혈액특이성, 최적 온도, 열 안정성 및 최적 pH 등의 생화학적 특성을 연구하였다. 식물성 병원균인 4개의 균주 중 Cladosporium cucumerinum과 Monosporascus cannonballus에 대해서는 항균 활성을 나타내었으나, Fusarium oxysporum과 Rhizoctonia solani에 대해서는 항균 활성을 나타내지 않았다. SDS-PAGE의 결과, 2개의 band로 나타났으며, 이의 분자량을 표준 단백질을 이용 측정하여 87 kDa와 47 kDa로 계산되었다. 사람의 A, B, O, AB형의 혈액을 사용하여 각각의 혈구응집반응을 확인한 결과, A, B, O, AB형 모두에서 응집반응이 일어났으며, 이 중 B형 혈액에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 분리된 방울토마토 locular fluid lectin의 최적 반응 온도는 $30^{\circ}C$이며, 가장 높은 $30^{\circ}C$를 포함하는 $20-80^{\circ}C$ 범위에서 열 안정성을 보였고, 최적 pH는 7.0이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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