• 미생물학회지
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• 제28권1호
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• pp.55-64
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• 1990

원형질체 융합을 통하여 killer 효모의 유전형질을 기존의 ethanol 발효효묘에 도입하므로서 야생의 killer 효모에 저항성을 가지고, 오염효모를 치사시킬 수 있으며, ethanol 발효능도 유지하는 새로운 효모균주를 개발하였다. 먼저 융합주의 생리적인 특성을 검토한 바, 융합주는 양천주에 비하여 세 적이 크고, DNA 함량이 높았으며, 증식도는 친주와 유사한 경향이었다. 또 융합주를 최소배지에서 보존하는 것이 안정성을 높이는 방법이었고, 7일 간격으로 7회 계대배양하므로서 유전적으로 안정화시킨 융합주를 6개월 간 계속 사용한 결과 segregant가 전혀 나타나지 않았으므로 매우 안정하였다. 또한 융합주는 핵 및 포자를 형성함을 관찰 할 수 있었고, TTC 정색반응에서 적색 및 pink 색을 띄었으며, 탄소원의 자화성 및 발효능은 천주와 유사하였는데, KCI, NaCl, sodium propionate alc cycloheximide 등에 대한 내성도 양친주의 한쪽을 따랐다. 그리고, 융합주를 20% glucose와 sucrose에서 72시간 및 60시간 배양했을 때, FWKS 260의 경우 각각 9.6v/v% 및 9.8v/v%의 ethanol을 생성하였고, 감수성주와 혼합배양한 결과 FWKS260의 경우 48시간 이후에는 감수성주를 거의 발견할 수 없었으며, 전주 및 융합주의 dsRNA plasmid를 추출하여 전기 2.5kb의 L 및 M dsRNA plasmidsms는 서로 연관성이 있으며, killer toxin 분비 및 저항성을 나타내는 유전자를 지배하는 것은 M dsRNA plasmid임을 확인할 수 있었다. 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제36권4호
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• pp.314-319
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• 2008

Penicillin G amidase(PGA, benzylpenicillinamidohydrolase, EC 3.5.1.11)는 penicillin G를 phenylacetic acid(PAA)와 6-aminopenicillanic acid(6-APA)로 분해하는 효소이다. Escherichia coli(E. coli) ATCC 11105의 PGA는 24 kDa의 small subunit과 65 kDa의 large subunit으로 구성되어 있고, precursor polypeptide에서 signal peptide와 spacer peptide가 절단되어 활성을 가진 heterodimer가 형성된다. 본 연구에서는 E. coli ATCC 11105에서 PCR(polymerase chain reaction)을 통해 증폭한 pga gene을 expression vector에 넣어 pET-pga plasmid를 제작하였고, 이것을 E. coli BL21 (DE3) 균주에 형질 전환하여 PGA를 발현하고 그 활성을 분석하였다. E. coli BL21(DE3)/pET-pga 균주의 고밀도 배양액을 SDS-PAGE로 분석 했을 때, PGA의 precursor, large subunit, 그리고 small subunit으로 보이는 protein band가 나타났으며, PGA가 soluble form의 precursor로 발현되어 processing을 거쳐서 large subunit과 small subunit으로 절단되기도 하고, 일부는 insoluble form의 precursor로 발현되기도 하는 것으로 생각된다. 유가배양시 온도변화 전략을 사용하여 고농도 배양에서 발현을 유도하였다. 온도변화 전략은 $37^{\circ}C$에서 $28^{\circ}C$를 거쳐 $22^{\circ}C$로 3단계로 변화시켰다. 이러한 전략으로 PGA활성은 19.6 U/mL이며 균체량은 600 nm에서 흡광도가 62까지 도달하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권6호
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• pp.784-788
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• 1995

The lambda Integrase (Int) carries out site-specific recombination between the two partner DNA sequences, attachment P (attP) and attachment B (attB). In order to study the recombination mechanism, a large quantity of pure integrase is required. Then, we constructed an int gene inserted recombinant plasmid (pNYL3) by using the pQE31 HIS-Tag vector, and produced the fusion protein, 6xHIS-Int from the E. coli TG1 strain carrying the pNYL3 plasmid. The recombinant protein produced was purified by phosphocellulose and Ni$^{++}$-NTA affinity column chromatographies. The result of the in vitro recombination assay using the standard reaction mixture containing 6xHIS-Int and partially purified integration host factor (IHF) showed that the 6xHIS-Int tagged recombination Integrase had the full recombination activity.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제4권4호
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• pp.278-284
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• 1994

Streptomyces spp. purchased from American Type Culture Collection and Institute for Fermentation in Osaka, and donated from Northem Regional Research Laboratory, and those isolated from soil samples were assayed to isolate many plasmids harboring streptomycetes. Among these qrganisms, 5 small size-plasmid carrying organisms SNUS 8810-597A, 8810-600, 8810-754, 8811-344, and 8811-347 were characterized and their plasmids pSJ597, pSJ600, pSJ754, pSJ344, and pSJ347 were isolated in a large scale. The plasmid harboring organisms were sensitive to neomycin, kanamycin, gentamicin, and thiostreptone, but some of them showed weak or strong resistance against streptomycin, chloramphenicol, ampicillin, and tetracycline. It was confirmed that pSJ597 and pSJ600 do not carry antibiotic biosynthetic genes. pSJ600 showed a pock-forming character.

• Journal of Yeungnam Medical Science
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• 제1권1호
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• pp.41-48
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• 1984

한국형 Agrobacterium tumefaciens의 분리 및 tumor inducing ($T_1$) plasmid의 유전적 특성을 비교 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다. Agrobacterium군은 사과나무($A_1-A_3$), 미류나무($W_1{\sim}W_6$), 은사씨나무($P_1-P_3$) 및 장미($R_1$)의 crown gall tumor에서 도합 13종을 분리하였으며 각 군의 plasmid를 관찰한 결과 ATCC 15955보다 $P_1$ 및 $A_2$가 크기가 컸으며 $W_2$, $W_3$, $W_6$ 및 $P_3$는 작았으며 각균의 tumor 유도는 해바라기에 ATCC 15955와 Korean type $W_2$ ($KW_2$)을 접종한 것에서만 각각 접종 4주 및 6주만에 crown gall을 관찰하였다. 아울러 두균종의 $T_1$ plasmid($pT_1$)를 정제하여 몇종의 게한효소를 처리 하였으며 $pT_i$ ATCC 15955와 $pT_1KW_2$는 EcoR I 처리로 25개 및 27개의 band를, Hind III로 23개와 21개, BamH I으로 각각 20개 및 Hpa I으로 12개 및 27개의 band를 관찰하였으며 크기는 $pT_i$ ATCC 15955가 200 kbases(kb)로 $pT_1KW_2$가 87 kb로 관찰 되었다. 아울러 cctopine은 $W_1-W_6$ 및 $P_1-P_3$균에 의한 tumor조직에서 관찰 되었고 이들균을 octopine type균으로 사료 되었다.

• KSBB Journal
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• 제7권3호
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• pp.191-200
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• 1992

토양 시료로부터A. tumefaciens를 분리 동정하고 이를 옥수수의 형질전환에 이용하기 위하여 binary vector를 이용하여 형질전환시킨 후 옥수수의 중배축 조직과 공존배양을 실시하였다. Schroth의 선택배지에서 선별된 colony들은 단일 형태를 나타내었다. 분리 균주는 해바라기 유식물의 잎조직에 종양을 형성하였으며, 거대 plasmid를 가지고 있었는데 이는 대조균주인 C58이나 Ach5의 plasmid와는 다른 종류였다. 분리균주들에 의해 형성된 tumor의 형태 및 균주의 생리, 생화학적 특성들에 의하여 공시균주를 A. tumefaciens biovar 1으로 동정하였으며 nopaline 형으로 추정하였다. 분리 균주중 AK204를 사용하여 옥수수 조직을 형질전환시키기 위하여 선택maker를 가지고 있는 binary vector(pGA642)를 균주내로 전이 시켰다. 이로 인하여 형질전환된 AK204를 옥수수 중배축 조직과 공존배양하므로서 옥수수 조직세포를 형질전환 시킨 결과, 1차적으로 Km에 저항성을 띠는 형질전환체를 선발할 수 있었으며, 그들의 가용성 단백질의 PAGE pattern이 변화되었음을 확인하였다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제5권2호
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• pp.106-109
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• 2000

Vascular endothelial cells (EGs) are usually difficult to culture to culture in a large scale because of their complicated requirements for cell growth. As the vascular endothelial growth factor (VEGF) is a key growth factor in the EC culture, we transfected human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) using a plasmid containing VEGF gene and let them grow in a culture medium eliminated an important supplement, endothelail cell growth supplement(ECGS). The expression of VEGF by HUVEC tansfected with Vegf GENE was not enough to stimulate the growth of HUVEC, only 40% of maximum cell density obtainable in the presence of ECGS. However, when the culture medium was supplied with 2.5 ng/ml of basic fibroblast growth factor (bFGF), a synergistic effect effect of VEGE and bFGF was observed. In this case, the final cell density was recovered was recovered up to about 78% of maxium value.

• 미생물학회지
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• 제27권4호
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• pp.323-333
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• 1989

Transposon Tn5의 단백질 합성을 E. coli 내에서 증폭 합성시키기 위하여 Bacteriophage의 Pt 촉진유전자가 Tn5의 두 개 module인 IS50L 과 IS50R을 전사시킬 수 있도록 plasmid를 재구성하였다. P1 촉진유전자로부터의 전사를 탈억제시켰을 경우, IS50R으로부터 합성되는 두 개의 단백질은 모두 그 세포내 축적량이 SDS-polyacrylamid gel에서 확인 될 정도로 증폭합성되었으나 IS501L의 두 개 단백질들은 동일 gel 상에서 확인되지 않았다. Minicell system에서 합성양상과 각 단백질들의 안정성을 조사한 결과, IS50R 단백질은 모두 안정하게 유지되었으나 IS501, 단백질은 모두 불안정하여 생분해 되어 진다는 사실을 밝혔다. 이러한 Is50L 단백질의 불안정성은 IS50L이 transposition에 있어서 불활성을 나타내는 원인이라 추정된다. 또한 IS50L고 IS50R의 단백질은 모두 동일한 open reading frame에 의하여 합성되어짐을 tryptic peptide 양상을 통하여 알 수 있었다.

• Genomics & Informatics
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• 제4권2호
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• pp.80-86
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• 2006

It is clear that the construction of large insert DNA libraries is important for map-based gene cloning, the assembly of physical maps, and simple screening for specific genomic sequences. The bacterial artificial chromosome (BAC) system is likely to be an important tool for map-based cloning of genes since BAC libraries can be constructed simply and analyzed more efficiently than yeast artificial chromosome (YAC) libraries. BACs have significantly expanded the size of fragments from eukaryotic genomes that can be cloned in Escherichia coli as plasmid molecules. To facilitate the isolation of molecular-biologically important genes in Ashbya gossypii, we constructed Ashbya chromosome-specific BAC libraries using pBeloBAC11 and pBACwich vectors with an average insert size of 100 kb, which is equivalent to 19.8X genomic coverage. pBACwich was developed to streamline map-based cloning by providing a tool to integrate large DNA fragments into specific sites in chromosomes. These chromosome-specific libraries have provided a useful tool for the further characterization of the Ashbya genome including positional cloning and genome sequencing.

• 한국응용곤충학회지
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• 제32권3호
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• pp.300-306
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• 1993

Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-1으로부터 생산된 살충성 내독소 단백질을 coding하는 CryIIA 유전자를 클로닝하고 염기서열을 조사하였다. HD-1 균주의 12개 plasmid 중 225kb plasmid를 분리하여 CryIIA 유전자를 포함하는 5kb HindIII 절편을 hybridization하여 찾아냈다. 이 절편을 plasmid pUC19에 ligation하여 E. coli에 형질 전환하였다. 이 독소 유전자를 포함하는 4kb BamHI-HindIII 절편은 vector pT7-5에 ligation하여 pSKIIA라하였다. pSKIIA는 3개의 open reading frames(orf1, orf2, orf3)로 구성되어 있으며 염기서열은 3,952base로 되어 있었다. 이러한 3개의 orf 각각의 발현 여부를 확인하기 위하여 생물검정을 하였다. 그러나 orf1 또는 orf2에 의한 형질 전환체는 독성이 없는 것으로 나타났다. orf3를 포함하는 형질 전환체는 3종의 나비목 곤충(배추점나방, 담배거세미나방, 담배나방) 및 1종의 파리목 곤충(집모기) 유충에 대하여 독성을 나타내었다.