• 한국동물학회지
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• 제38권3호
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• pp.426-432
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• 1995

유선 조직에서 베타-락토글로불린 유전자의 발현은 프롤락틴, 글루코코르티코이드 및 인슐린등의 유촉진 호르몬들에 의해서 강력하게 유도된다. 이와 같은 호르몬 유도의 조절 기작을 규명하기 위하여, 배양 유선 세포인 HC11 세포에서 염소 베타-락토글로불린 유전자 프로모터의 유촉진 호르몬에 대한 반응을 분석하였다. 베타-락토글로불린 프로모터의 5'- 조절 부위를 연쇄적으로 제거한 발현 실험에서 호르몬 유도를 크게 변화 시키는 두 지역이 관찰되었다. 조절 부위의 -1692의 상류지역은 하류 프로모터를 강력하게 활성화 시키는 부위로, 주로 글루코코르티코이드 유도체인 덱사메타손의 작용을 매개하였다. 그러나 두번째 지역의 유도 작용은 인슐린 처리를 병행하지 않을 경우 상류 조절부위에 의해 억제되었다. 이러한 결과는, 유선세포에서 유촉진 호르몬들에 의한 베타-락토글로불린 프로모터 활성 유도가 인슐린에 의한 탈 억제화와 글루코코르티코이드 및 프롤락틴에 의한 활성화의 복합 조절에 의해서 이루어질 것이라는 점을 시사한다. 두번째 지역에 의한 덱사메타손 유도는 -700 부근의 글루코코르티코이드 수용체 결합 부위에 의해서 매개되는 것으로 추정된다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제4권2호
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• pp.221-229
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• 2000

유선에서 젖의 생산은 뇌하수체 호르몬인 성장 호르몬과 프롤락틴을 포함한 여러 가지 호르몬의 조절을 받는다. 최근의 연구에 따르면 이 호르몬들 중에서 성장호르몬과 프롤락틴은 유선에서도 그 유전자 전사체가 발견된다 본 연구에서는 유선에서 발현되는 성장호르몬이 유선 특이 발현 유전자의 발현에 미치는 영향을 조사하고자 유선 특이 발현 유전자인 베타-락토글로불린($\beta$-lactoglobulin :BLG)의 프로모터를 모델 시스템으로 하여 소와 사람의 성장 호르몬이 유선의 유전자 발현에 끼치는 영향을 조사하였다. 성장 호르몬은 단독으로 처리하였을 패 베타-락토글로불린 유전자 프로모터 활성을 억제하였다. 그러나 젖 분비 호르몬들인 인슐린, 프롤락틴, 글루코코르티코이드와 함께 처리하였을 때는 농도 의존적으로 BLG 프로모터 활성을 상승시키는 효과를 보였다. 성장 호르몬을 유선 세포내에서 발현시켰을때는 적정농도에서 세포 증식과 유선 프로모터 활성을 크게 증진시켰다. 반면 소의 성장 호르몬 유전자 프로모터는 유선 세포에서 뚜렷한 활성을 나타내지 않았다. 이상의 결과는 유선에서 발현되는 뇌하수체 호르몬들은 조절 누수에 의한 유전자 발현이 아니라 생리적 기능을 가지고 있음을 의미한다. 또 인위적으로 성장호르몬의 발현을 조절하여 적정한 양이 발현되도록 하면 젖의 생산을 증진시킬 수 있다는 가능성도 암시한다.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2002년도 국제심포지엄
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• pp.94-94
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• 2002

Lactadherin (formerly known as BA46), a major glycoprotein of the human milk fat globule membrane, is abundant in human breast milk and breast carcinomas and may prevent symptomatic rotavirus infections. In this study, under the control of mouse whey acidic protein (WAP) promoter, the expression pattern of lactadherin (Ltd) in lactogenic hormone-dependent mouse mammary epithelial cell line HC11 were tested. pLNWLtd construct containing 2.4 kilobases of the WAP promoter and 1.5 kilobases of human lactadherin gene was stably transfered into HC11 cells using retroviral vector system. Integration and expression level of the transgene was estimated using PCR and RT-PCR, respectively. Prominent induction of Ltd gene under the WAS promoter was accomplished in the presence of insulin, hydrocortisone and prolactin, while induction with insulin alone resulted in lower expression. Our results demonstrate that the expression of the transgene is increased by synergistic effect of several lactogenic hormones, including insulin, hydrocortisone, and prolactin.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제2권3호
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• pp.432-434
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• 1989

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제14권5호
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• pp.710-719
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• 2001

Several amino acid transport systems in mammary gland have been characterized during the last few years. These systems may be divided into two broad categories based on whether they are sodium-dependent or $Na^{+}$-independent, and each of these categories is subdivided into 3 groups depending on whether the systems prefer zwitterionic, cationic or anionic substrates. The zwitterion preferring transport processes in mammary gland are $Na^{+}$-dependent system A and $Na^{+}$-independent systems L and T. System $y^{+}$ is a $Na^{+}$-independent transporter of cationic amino acids and $X_{AG^{-}}$ is a $Na^{+}$-dependent system for anionic amino acids. A ($Na^{+}+Cl^{-}$)-dependent system, selective for $\beta$-amino acids has been reported in rat mammary tissue. In addition, there is yet another class of transporters that have still broader specificity. The $Na^{+}$-dependent systems $BCl^{-}$-dependent and $BCl^{-}$-independent and $Na^{+}$-independent system $y^{+}L$ have been reported to mediate the transport of zwitterionic as well as cationic amino acids. Each system has been characterized with respect to its substrate specificity, affinity, kinetics and ion-dependence. Transport of amino acids by mammary tissue is regulated by i) the intracellular substrate concentration, ii) lactogenic hormones and iii) milk stasis. Four of the above transport systems (i.e. A, L, $y^{+}$ and $BCl^{-}$-independent) are up-regulated by lactogenic hormones (insulin, cortisol and prolactin) in mammary gland.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제25권3호
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• pp.421-427
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• 2012

The production of therapeutic proteins from transgenic animals is one of the most important successes of animal biotechnology. Milk is presently the most mature system for production of therapeutic proteins from a transgenic animal. Specifically, ${\beta}$-casein is a major component of cow, goat and sheep milk, and its promoter has been used to regulate the expression of transgenic genes in the mammary gland of transgenic animals. Here, we cloned the porcine ${\beta}$-casein gene and analyzed the transcriptional activity of the promoter and intron 1 region of the porcine ${\beta}$-casein gene. Sequence inspection of the 5'-flanking region revealed potential DNA elements including SRY, CdxA, AML-a, GATA-3, GATA-1 and C/EBP ${\beta}$. In addition, the first intron of the porcine ${\beta}$-casein gene contained the transcriptional enhancers Oct-1, SRY, YY1, C/EBP ${\beta}$, and AP-1, as well as the retroviral TATA box. We estimated the transcriptional activity for the 5'-proximal region with or without intron 1 of the porcine ${\beta}$-casein gene in HC11 cells stimulated with lactogenic hormones. High transcriptional activity was obtained for the 5'-proximal region with intron 1 of the porcine ${\beta}$-casein gene. The ${\beta}$-casein gene containing the mutant TATA box (CATAAAA) was also cloned from another individual pig. Promoter activity of the luciferase vector containing the mutant TATA box was weaker than the same vector containing the normal TATA box. Taken together, these findings suggest that the transcription of porcine ${\beta}$-casein gene is regulated by lactogenic hormone via intron 1 and promoter containing a mutant TATA box (CATAAAA) has poor porcine ${\beta}$-casein gene activity.

• Animal cells and systems
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• 제1권4호
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• pp.603-608
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• 1997

Analysis of the 5'-regulatory sequence of the caprine ${\beta}$-lactoglobulin (BLG) gene promoter revealed that two different types of activation were mediated by discrete regions, from -740 to -470 and from -205 to 109, in cultured mammary HC11 cells. Activation mediated by the proximal region was observed regardless of cell growth status. Distal activation, however, was observed only after confluent growth of the cells and was enhanced by the lactogenic hormones. This activation was accompanied by appearance of binding activity of proteins to these regions in the mammary HC11 cells. The binding motifs were broadly distributed over the upstream regulatory sequence. Comparison of the binding regions and mutation analysis suggest that a binding motif homologous to the ${\gamma}$-interferon responsive element (${\gamma}$-IRE) is responsible for transcriptional activation by hormonal induction in the mammary HC11 cells. The multiple ${\gamma}$-IRE homologous motifs seem to play a significant role in enhancing mammary cell-specific activation of the caprine BLG gene.

• 한국가축번식학회지
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• 제27권1호
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• pp.15-23
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• 2003

본 연구는 VSV-G glycoprotein을 envelope으로 하는 pseudotyped retrovirus vector system을 이용하여 쥐의 유방상피세포인 HC11에서 human Lactadherin 유전자의 발현을 확인하고자 하였다. 실험에 사용한 vector는 개체내에서의 외래 유전자의 지속적인 발현에 의한 생리적인 부작용을 최소화하기 위한 구조로, 조직특이적이며 lactogenic hormone에 의해 유도적인 활성을 가지는 것으로 알려진 WAP promoter의 통제하에 도입하고자 하는 외래 유전자를 위치하도록 하였다. WAP promoter의 대조군으로 지속적인 활성을 나타내는 $\beta$-actin promoter를 사용하였으며, 이 각각의 promoter와 marker gene으로 E. coli LacZ gene을 재조합한 후 retrovirus vector system을 이용하여 HCll에 도입하였다. 세포의 genome 내로의 유전자의 전이는 PCR을 통해 확인하였고, RT-PCR의 수행으로 유전자의 발현을 확인하였다. Lactadherin 유전자를 이용한 실험도 동일한 과정으로 수행하였으며, RT-PCR의 결과에서 HCll 세포에서 Lactadherin 유전자의 발현이 insulin을 단독으로 처리한 군에 비해 insulin, hydrocortisone, prolactin을 동시에 처리한 군에서 우월하게 나타나는 것으로 확인되었다. 그러나 insulin 단독 처리군에서 유전자의 발현이 약하게 나타나는 것으로 관찰되어 WAP promoter의 leakiness에 대한 재고의 필요성이 요구되었다.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2002년도 국제심포지엄
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• pp.71-71
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• 2002

Promoters for milk proteins have been used far producing transgenic animals due to their temporal and spatial expression patterns. ${\beta}$-casein, a calcium-sensitive casein, is a major milk protein that corresponds ca. 30 per cent of total milk protein. Expression of ${\beta}$-casein is controlled by lactogenic hormones such as prolactin (PRL), composite response elements (CoREs) and transcription factors. CoREs are clusters of transcription factor binding sites containing both positive and negative regulatory elements. ${\beta}$-casein gene promoter contains various regions (CoREs) for gene transcription. We analyzed the promoter region by mutagenesis using exonuclease III and linker-scanning. Transcription control elements usually are positioned in 5'-flanking region of the gene. However, in some cases, these elements are located in other regions such as intron 1. The nucleotide sequences of ${\beta}$-casein promote. region has been reported (E12614). However, the properties of the promoter is not yet clear. In this study, we plan to investigate the properties of cis-regulating elements of porcine ${\beta}$-casein by mutation analysis and expression analysis using dual-luciferase repoter assay system.