본 실험에서는 균주의 특성에 따른 유산균수 시험방법의 적합 여부를 알아보기 위해 액상요구르트 제품들을 유효기간 중 여러 실험조건으로 비교 검토하였다. 비교한 실험조건은 배지(BCP, Elliker agar), 배양상태(aerobic, anaerobic), 희석수(saline, phosphate buffer), 희석방법 (10배, 100배)이었으며 $37^{\circ}C$에서 72시간 배양하였다. L. acidophilus 균주를 사용한 액상요구르트의 경우, 배지와 희석방법에 따른 차이는 거의 없었고 희석수와 배양상태에서는 약간의 차이가 있었다. L. jugurti 균주와 L. acidophilus +L. casei 혼합균주의 생우 배지 배양상태, 희석수에서 차이가 있었고 희석방법에는 거의 차이가 없었다. L. casei의 경우 배지, 희석방법에서 약간의 차이를 나타했으며 배양상태는 유산균수에 영향이 없었다. L. bulgaricus의 경우는 배지, 배양상태, 희석방법에 따라 차이가 있었고 희석수는 차이가 없었다. 그러므로 요구르트의 유산균수 측정은 균주의 종류에 따라 가장 좋은 실험조건을 선택하여 실시하는 것이 효과적인 시험방법으로 사료된다.
본 연구에서는 프로바이오틱 유산균이 생산한 항균물질에 의한 바이오제닉 아민 생성균의 제어 효과와 박테리오신 및 유기산의 항균 활성에 영향을 미치는 배양 조건을 조사하였다. Lactobacillus plantarum FIL20 (64 AU/ml) 및 Lactobacillus paracasei FIL31 (128 AU/ml)의 박테리오신 용액은 Serratia marcescens CIH09과 Aeromonas hydrophilia RIH28에 각각 강한 항균 활성을 나타내었고 FIL20과 FIL31 균주로부터 얻은 배양 상등액 내에 유산 함유량은 각각 $107.3{\pm}2.7mM$과 $129.5{\pm}4.6mM$로 나타났다. 따라서 L. plantarum FIL20과 L. paracasei FIL31이 생산한 박테리오신 용액(200 AU/ml) 및 배양 상등액($200{\mu}l/ml$)의 처리에 의해 S. marcescens CIH09 및 A. hydrophilia RIH28의 균수 및 히스타민과 티라민의 생성량을 유의하게 감소시켰다(P < 0.05). 초기 pH (5.0)와 배양 온도($15^{\circ}C$)가 낮은 조건 하에서 CIH09 균주가 생산한 히스타민과 티라민의 생성량은 L. plantarum FIL20이 생산한 박테리오신 용액이나 배양 상등액 처리에 의해 유의하게 감소되었다. 또한 식염 5% 혹은 아질산 칼륨($200{\mu}g/g$)과 FIL20 유산균의 항균물질을 혼용한 경우 바이오제닉 아민을 생성하는 세균의 균수와 유해 아민 함량을 유의하게 감소시켰다(P < 0.05). 결론적으로 L. plantarum FIL20과 L. paracasei FIL31의 박테리오신 및 유기산 용액은 허들 테크놀로지에 적용하여 바이오제닉 아민 생성을 효과적으로 제어할 수 있는 생물학적 보존제로 이용될 수 있을 것이다.
We measured physiological functionalities, including antihypertensive angiotensin I-converting enzyme inhibitory activity and immun-stimulating ${\beta}$-glucan content for sixty kinds of Makgeolli that is commercially available from the market. As a result, we selected R-12 commercial raw Makgeolli, with a high content of immuno-stimulating ${\beta}$-glucan, and R-14 commercial raw Makgeolli, exhibiting high antihypertensive activity. Due to the similarities in their overall physicochemical properties and raw materials used for fermentation, we compared the microbial flora in order to investigate the reason for the differences in their functionalities. Nested PCR and denaturing gradient gel electrophoresis for yeasts and bacteria were performed for analysis of microbial diversity of two different kinds of Makgeolli (i.e., R-12, R-14), which showed immuno-stimulating ${\beta}$-glucan content and exhibited a very high level of antihypertensive activity, respectively. Analysis of the 18S rDNA amplicon revealed a major presence of the yeast strain Pichia burtonii in every Makgeolli sample. Analysis of the 16S rDNA amplicon revealed a predominance of lactic acid bacteria, and the most frequent lactic acid bacteria were Lactobacillus ingluviei, L. fermentum, and L. harbinensis, and Lactobacillus sp. Among these, L. harbinensis was detected only in R-12 and L. ingluviei was found only in R-14. Different functionalities from the individual commercially available Makgeolli may be attributed to actions of different microbial flora during fermentation.
Antibiotic-resistant Staphylococcus aureus is beginning to pose a social issue. Thus, there is an urgent need for the development of effective anti-staphylococcal agents to eradicate antibiotic-resistant S. aureus in food systems and to treat the pathogen in clinical areas. To address this need, lactic acid bacteria (LAB) from kimchi were screened for the production of anti-staphylococcal bacteriocin. From this screening, a bacteriocin generated by the MK3 strain, which was identified by 16S rRNA gene sequence analysis as Enterococcus faecium, demonstrated antimicrobial activity against an S. aureus strain, and was designated enterocin MK3. Enterocin MK3 also demonstrated activity against other gram-positive bacteria, including several LAB and Listeria monocytogenes, but not gram-negative Escherichia coli. The molecular mass of enterocin MK3 was estimated as approximately 6.5 kDa on an SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis) gel.
Pediococcus acidilactici strain M produced a bacteriocin which was proteinaceous, heat stable, and exhibited antimicrobial activity against lactic acid bacteria, variety of food spoilage and pathogenic bacteria. The antimicrobial activity was not caused by $H_2$$O_2$ and organic acid, and was remained between pHs of 4.0 to 9. Molecular weight of crude bacteriocin was approximately 2, 500. Phenotypic assignment after plasmid cruing experiment demonstrated that a 53.7 kilobase (kb) plasmid, designated as pSUC53, was responsible for the sucrose fermentation phenotype ($Suc^+$) and a 11.1 kb plasmid, designated as pBAC11, was associated with bacteriocin production phenotype ($Bac^+$). Neither of the two plasmids were linked to antibiotic resistance.
A bacteriocin-producing lactic acid bacteria was isolated from contaminated milk products, which was identified by using the API50 CH kit as Lactococcus lactis subsp. lactis with reliability of 98%. Fatty and analysia of the cell membrane showed that this strain contained same fatty acids profiles as type strain, Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC 19435. The bacteriocin of Lactococcus sp. HY 449 showed relatively wide range of inhibition spectrum against gram positive and some gram negative bacteria such as Escherichia coli and maintained the inhibitory activity between pH2.0 and pH9.0 The thermostability of this bacteriocin was higher in acidic solution than in distilled water and was stable at 60$\circ $C for 1 hour.
폴리 젖산의 원료가 되는 젖산은 D-, L의 광학이성질체로 존재하는데 L젖산 폴리머와 라세미 폴리머는 결정성과 녹는점이 다르므로 플라스틱으로서의 만족할 만한 물성을 기대하기 위하여 원료로서 광학적으로 순수한 L-lactic acid가 요구된다. 이를 위하여 한 종류의 이성질체만을 선택적으로 생산하는 젖산균주를 탐색하여 분리함으로써 광학적으로 순수한 산물을 얻을 뿐만 아니라 이러한 발효법에 의한 젖산생산은 자연계에 풍부한 starch나 cellulose, 음식물쓰레기와 같은 재생 가능한 자원을 기질로 사용하여 젖산발효에서 전분의 당화 공정에 필요한 시간과 노력을 최소화하며 젖산 생산에 드는 전체적인 비용을 절감할 수 있다. 전분을 직접 이용하는 것은 젖산균의 일반적인 성질이 아니므로 전분이 풍부한 누룩을 수집하여 직접적으로 전분을 분해하여 젖산발효를 수행하는 균주를 누룩에서 분리하였다. 분리균주는 형태학적, 배양학적,생화학적 특성 및 16s rDNA 분석을 통하여 Enterococcus sp.으로 동정되어 Enterococcus sp. JA-27로 명명하였다. 생육에 따른 L-lactic acid의 최적 생산 조건을 검토한 결과, 최적 배지조건은 탄소원으로 1.5% soluble starch, 질소원으로 3.5% tryptone, 그 외의 다른 조성들은 0.1% $K_2$$HPO_4$, 0.04% $MgSO_4$$.$$7H_2$O, 0.014% $MnSO_4$$.$$4H_2$O, 0.04% $MgSO_4$$.$$7H_2$O이었고 최적 배양조건은 $30^{\circ}C$, pH 8이었다. 대량생산을 위한 기초자료를 제공하기 위하여 회분배양과 유가배양을 실시하였고, 회분배양이 L-lactic acid의 생산수율(0.134 g, L-lactic acid/g, soluble starch)이 더 높게 나타나 효과적이었다. 7 L 발효조 배양시 pH를 control한 결과, L-lactic acid 생산이 삼각플라스크에 비해 1.5배 더 증가하였다. 배지 중의 젖산을 정제하기 위한 방법으로 이온교환 칼럼크로마토그라피(ion-exchange column chromatography)를 사용하였고 일련의 정제 과정을 통하여 배양액 중의 L-lactic acid 정제 수율은 약 85% 정도로 나타났으며 HPLC로 분석한 결과 99.7%의 순도를 확인할 수 있었다.
From the extensive screening for small cryptic plasmid among about 23 lactic acid bacteria (LAB), 2.4 kb of cryptic plasmid was isolated from Lactobacillus farciminis strain KCTC 3681 and named as pLF24. The plasmid pLF24 was a circular molecule of 2,396 base-pairs in length with a G+C content of 38%. Two protein-coding sequences could be predicted. ORF1 and ORF2 showed homologies to plasmids of gram-positive bacteria. The replication protein coded by ORF2 and the plus origin, were similar to replication regions of other gram-positive bacteria as shown in plasmids such as pLH2, pLS141-1 and pLC2. The nucleotide sequence of pLF24 was deposited into Genbank data base with an accession number of EU429343. The newly isolated plasmid can be used for construction of shuttle vector in Lactobacillus bacteria.
A bioluminescent Lactobacillus plantarum (pLuc2) strain was constructed. The luminescent signal started to increase during the early exponential phase and reached its maximum in the mid-exponential phase in a batch culture of the strain. The signal detection sensitivity of the strain was the highest in PBS (phosphate buffered saline), followed by milk and MRS broth, indicating that the sensitivity was influenced by the matrix effect. The strain was used in millet seed fermentation which has a complex matrix and native lactic acid bacteria (LAB). The luminescent signal was gradually increased until 9 h during fermentation and abolished at 24 h, indicating that the strain could be specifically tracked in the complex matrix and microflora. Therefore, the bioluminescent labeling system can be used for monitoring LAB in food and dairy sciences and industries.
The probiotic characteristics of a total of 137 lactic acid bacterial strains isolated from soybean paste were investigated. Among those tested, the D37 strain was selected as a probiotic bacteria due to its acid and bile tolerance, and its strong anti-cancer and antibacterial activities. The D37 strain showed highly stable viability at acidic pH for 2 hr, and was very stable in 10% bovine bile. The viability of human colon cancer HT-29 cells was inhibited more than 60% at a $200\;{\mu}/mL$ concentration of D37 cell-free culture supernatant, and the degree of inhibition was concentration-dependent. The D37 strain showed a wide range of antibacterial activities against food-borne pathogenic bacteria such as Escherichia coli O157, Listeria spp., Vibrio spp., Salmonella spp., and Staphylococcus aureus. According to phenotypic characteristics and the utilization of various sugars, the D37 strain was identified as Lactobacillus cellobiosus.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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