Cisplatin treatment increases the excretion of inorganic phosphate in vivo. However, the mechanism by which cisplatin reduces phosphate uptake through renal proximal tubular cells has not yet been elucidated. We examined the effect of cisplatin on $Na^+$-dependent phosphate uptake in opossum kidney (OK) cells, an established proximal tubular cell line. Cells were exposed to cisplatin for an appropriate time period and phosphate uptake was measured using $[^{32}P]$-phosphate. Changes in the number of phosphate transporter in membranes were evaluated by kinetic analysis, $[^{14}C]$phosphonoformic acid binding, and Western blot analysis. Cisplatin inhibited phosphate uptake in a time- and dose-dependent manner, and also the $Na^+$-dependent uptake without altering $Na^+$-independent uptake. The cisplatin inhibition was not affected by the hydrogen peroxide scavenger catalase, but completely prevented by the hydroxyl radical scavenger dimethylthiourea. Antioxidants were ineffective in preventing the cisplatin-induced inhibition of phosphate uptake. Kinetic analysis indicated that cisplatin decreased Vmax of $Na^+$-dependent phosphate uptake without any change in the Km value. $Na^+$-dependent phosphonoformic acid binding was decreased by cisplatin treatment. Western blot analysis showed that cisplatin caused degradation of $Na^+$-dependent phosphate transporter protein. Taken together, these data suggest that cisplatin inhibits phosphate transport in renal proximal tubular cells through the reduction in the number of functional phosphate transport units. Such effects of cisplatin are mediated by production of hydroxyl radicals.
$^{99m}Tc-DMSA$ 신장 신티그라피는 피질에 주로 섭취되어 신실질을 영상화하고 좌우 신장 및 배후방사능에 관심영역을 설정함으로써 상대 신섭취율을 평가할 수 있는 검사로, 진단 및 치료 후 경과관찰에 이용되고 있다. 본 논문에서는 후면상과 양면상 촬영 시 그리고 신장의 깊이를 적용한 경우의 상대 신섭취율 변화를 비교하여 상관관계를 알아보고자 한다. 실험은 신장 팬텀 및 조직등가물질을 이용하여 신장의 깊이에 차이를 주며 깊이 당 각 5번씩 총 25번을 진행하였다. 임상연구는 2014년 2월부터 10월까지 본원에 내원하여 $^{99m}Tc-DMSA$ 검사를 시행한 36명의 성인 환자를 대상으로 하였다. 장비는 감마카메라 INFINIA를 사용하였으며 GE사의 Xeleris Ver. 2.1220을 이용하여 신장 및 배후 방사능 모두 자동으로 관심영역을 설정하였다. 또한 환자별 신장 깊이의 차이를 고려하여 측면상을 촬영한 후 실제 신장 깊이를 측정하였다. 후면상에서의 산술평균값과 양면상에서의 기하학적 평균값 그리고 후면상에 신장 깊이를 적용해준 상대 신섭취율을 비교해보고 유의한 차이가 있는지 살펴보았다. 팬텀 실험 결과 좌, 우 신장 깊이의 차이가 1 cm 미만인 경우에는 양면상을 촬영했을 때와 후면상에 실제 깊이를 적용해준 경우 유의한 차이를 보이지 않았으나(P>0.05), 1 cm를 초과한 경우에는 유의한 차이를 보였다(P<0.05). 임상 연구에서는 후면상만을 촬영해준 경우와 후면상에 신장 깊이를 적용해준 경우의 상관관계(r=0.988)에 비해 양면상을 촬영해준 경우와 후면상에 신장의 깊이를 적용하여 보정해준 경우가 더 높은 상관관계(r=0.999)를 나타냈다. 본 연구에서는 양면상과 후면상을 촬영했을 때의 상대 신섭취율 차이를 확인할 수 있었다. 후면상만 촬영한 경우에도 깊이를 보정해줬을 때와 비교하여 상관관계가 있음을 알 수 있었으나 오차를 줄이기 위해서는 양면상을 촬영해주는 방법을 권고한다.
This study was carried out determine the effect of renal ischemia on amino acid transport in rabbit renal cortical slices. The animal models of renal ischemia induced experimentally by clamping the renal artery. These results were summarized as follows: 1. The uptake of amino acids lysine and ${\alpha}$-aminobutyrate(AIB), dicarboxylate succinate and organic anion PAH in cortical slices was normal or increased after 30 or 60 min of ischemia in vivo. 2. In a 30 min ischemic kidney, the slice uptake of amino acids was returned to the control level by 30 min of reflow. In a 60 or 90 min ischemic kidney, the lysine uptake was returned to the control level after of reflow, but the uptake of AIB and succinate was significantly reduced during reflow period of 30-120 min. 3. Oxygen consumption in cortical slices was increased after 30 min of ischemia but was not altered by 60 min of ischemia. This results indicat that transient ischemia caused increasing of amino acid uptake in renal cortical slices without metabolic disorder of renal proximal tubule.
Park, In-Ho;Hwang, Moon-Young;Woo, Jae-Suk;Jung, Jin-Sup;Kim, Yong-Keun
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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제3권5호
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pp.529-538
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1999
This study was undertaken to examine the effect of ethanol on $Na^+ -dependent$ phosphate $(Na^+-P_i)$ uptake in opossum kidney (OK) cells, an established renal proximal tubular cell line. Ethanol inhibited ^Na^+-dependent$ component of phosphate uptake in a dose-dependent manner with $I_{50}$ of 8.4%, but it did not affect $Na^+-independent$ component. Similarly, ethanol inhibited $Na^+-dependent$ uptakes of glucose and amino acids (AIB, glycine, alanine, and leucine). Microsomal $Na^+-K^+-ATPase$ activity was not significantly altered when cells were treated with 8% ethanol. Kinetic analysis showed that ethanol increased $K_m$ without a change in $V_{max}$ of $Na^+-P_i$ uptake. Inhibitory effect of n-alcohols on $Na^+-P_i$ uptake was dependent on the length of the hydrocarbon chain, and it resulted from the binding of one molecule of alcohol, as indicated by the Hill coefficient (n) of 0.8-1.04. Catalase significantly prevented the inhibition, but superoxide dismutase and hydroxyl radical scavengers did not alter the ethanol effect. A potent antioxidant DPPD and iron chelators did not prevent the inhibition. Pyrazole, an inhibitor of alcohol dehydrogenase, did not attenuate ethanol-induced inhibition of $Na^+-P_i$ uptake, but it prevented ethanol-induced cell death. These results suggest that ethanol may inhibit $Na^+-P_i$ uptake through a direct action on the carrier protein, although the transport system is affected by alterations in the lipid environment of the membrane.
신장의 기능을 평가하는데 있어 신장 상대 섭취율(Renal Relative Uptake: %)은 매우 중요한 의미를 가지며, 이는 신장과 background의 Region Of Interest (ROI) 설정에 따라 많은 영향을 받게 된다. 특히 hydronephrosis 환자의 경우 육안으로 신장의 위치와 형태, 크기 등을 식별하기 어려운 경우도 있어 사용자가 설정하는 ROI에 따라 결과 값이 많은 차이를 나타내기도 한다. 본 연구는 일정한 신장의 ROI를 전제로 background ROI 설정을 변화시키며 신장 상대 섭취율을 분석하여 결과에 어떠한 영향을 미치는지 연구하였다. 2012년 1월부터 2013년 2월까지 삼성서울병원을 내원하여 Kidney MAG3 검사를 실시한 hydronephrosis 환자 27명을 대상으로 하였다. 환자에게 $^{99m}Tc-MAG3$ 185 MBq (5 mCi)을 정맥주사 후 데이터를 획득하였고, 환자의 영상을 재구성하면서 ROI를 설정하는 과정에서 background ROI를 변화시켰다. 첫째, renal processing 과정에서 자동으로 설정되는 automatic ROI와 사용자가 직접 설정하는 manual ROI를 비교하였다. 둘째, ROI 설정 위치를 신장의 위, 옆, 아래 부분으로 구분하여 설정하였다. 셋째 background 설정 시간을 1-2분, 2-3분으로 구분하여 비교하였다. Automatic ROI와 manual ROI의 신장 상대섭취율을 비교한 결과 약 3.7%p 차이가 나타났고, hydronephrosis가 있는 신장은 직접 ROI를 설정하는 경우 신장 상대 섭취율이 소폭 감소하는 경향을 보였다. ROI 위치에 따른 연구에서 아래쪽에 background를 설정한 결과 값이 가장 근접한 신장 상대 섭취율을 나타내었고, 위쪽의 경우 매우 큰 편차를 보였다. Background 설정 시간에 따른 결과에서 4%p 차이를 확인할 수 있었다. Hydronephrosis의 환자의 경우, automatic ROI는 위치를 설정하는데 오차가 적지 않게 나타났고, 사용자가 설정하는 ROI 위치에 따라서도 큰 폭의 변동성을 나타내었다. 이는 정상 신장에 비해 적은 count 섭취와 주변 조직과의 상대적인 관계에서 야기된 것으로 보인다. 따라서 신장과 background의 ROI를 설정할 시 보다 폭넓게 다양한 변수를 고려하여 오차를 최소화할 수 있는 방안을 연구해야 할 것이다.
수신증 진단을 받은 소아 환자 $^{99m}Tc$-DMSA 신장 검사에서 영상 획득 후 좌-우측 신장의 섭취 비율을 분석하기 위해 관심영역을 설정하는데, 장비의 자동 관심영역 설정 시 수신증으로 확장되어 있는 신우 부위까지 관심영역에 포함되어 정확한 좌-우 신장의 섭취율이라 할 수 없기에 본 연구는 신장 모형과 확장된 신우의 모형을 이용한 실험을 통해 수신증으로 인해 확장된 신우를 포함한 관심영역과 포함하지 않은 관심영역을 비교하여 보다 개선된 관심영역의 설정 방법을 제시 하고자 한다. 또한, 확장된 신우에 섭취된 방사성 의약품이 신장 피질 세포에서의 섭취인지 아니면 요관의 막힘으로 인한 잔류 소변 인지를 알아 보기 위해 판독의의 도움을 받아 알아 보기로 한다. 두 개의 신장 모형에 같은 양의 물을 채우고 $^{99m}TcO_4$ 111 MBq를 각각 넣어 섞었다. 확장된 신우를 표현하기 위해 5개의 고무 풍선에 물 용량을 각각 10 mL로 채운 후 $^{99m}TcO_4$를 각각 18.5, 37, 55.5, 74, 92.5 MBq를 각각 섞어 준비 하였다. 또한, 고무 풍선에 $^{99m}TcO_4$를 37 MBq으로 고정하고 물 용량을 각각 5, 10, 15, 20, 25 mL를 섞어 준비하였다. 좌측 신장은 모양 그대로 유지하고 우측 신장 모형에 이 고무 풍선을 붙여 수신증의 신장과 비슷한 모형을 만든 후 각각 200만 계수를 수집하였다. 수집된 영상을 확장된 신우를 포함한 관심영역과 포함하지 않은 관심영역을 그려서 좌-우 신장의 섭취비율을 비교 하였고, 재현성을 위해 한 영상당 5회씩 관심 영역을 설정하였다. 환자의 경우 $^{99m}Tc$-DMSA를 1.5~1.9 MBq/kg 주사하고, 3~4시간 후에 검사하였고, 숙련된 3명의 방사선사가 각각 1회씩 관심 영역을 설정하여 비교 평가 하였다. 두 자료 간의 통계적 유의성을 알아보기 위해 SPSS (ver. 17) Wilcoxon Signed Ranks Test 사용하였다. 신장 모형 실험 결과로 확장된 신우를 포함하여 관심영역을 설정한 것과 포함하지 않고 관심영역을 설정한 두 집단간에 수집계수, 주변 계수, 섭취율을 비교해 본 결과 수집계수와 섭취율의 변화된 결과를 얻을 수 있었고, 환자 검사 영상에서 또한 섭취율의 변화된 결과를 얻을 수 있었다. 또한, 확장된 신우에 섭취된 방사성 의약품은 확장된 신우에 의해 요관으로 내려가지 못한 잔류 된 소변이라는 것이 확인되었다. 위 결과에서 보여 주듯이 신장의 좌-우측 섭취율 도출 시에 수신증으로 인해 신우가 확장된 신장에서 신우를 포함하여 관심영역을 설정했을 때의 섭취율이 포함하지 않았을 때의 섭취율에 비해 과섭취율을 보여 주고 있다. 검사자의 작업 편의성과 결과의 신속성을 위해 자동 관심영역으로 설정하여 결과를 도출해 내고 있지만, 이러한 수신증 환자의 경우에는 확장된 신우에 방사성의약품이 섭취가 되어있는 것은 잔류된 소변이므로 관심영역 설정 시에 확장된 신우 부분을 제외하고 수동으로 관심영역을 설정해야 정확한 좌-우측 신장의 섭취율을 도출할 수 있을 것이라 사료된다.
To Assessment of the quantified renal uptake rates in every $^{99m}Tc$-DMSA scan tests of patients is actually difficult because of time consumption and complicated calculations required to measure the correct dose of the infused radionulide and radiation decay, the adjustment for the depth of kidney and the subtraction of background count. We've formulated two regression models for the quantified renal uptake rates[I] from the simple renal uptake rates[H] with a square shaped ROI (Region-Of-Interest) in 25 cases (Group 1) and with a kidney shaped ROI in 37 cases (Group 2), respectively. The regression model for the Group 1 was $[I]_1$=0.885 $[H]_1$-4.575 (P<0.005), and for the Group 2 was $[I]_2$=0.591 $[H]_2$-2.105 (p<0.005). The formal charts were clinically convenient to evaluate the individual renal functions in patients with $^{99m}Tc$-DMSA renal scan.
The present study aimed to investigate the interaction of nucleoside analogs with human organic anion transporter 1 and 3(hOAT1 and hOAT3) that play a primary role in the tubular uptake of endogenous and exogenous organic anions in the kidney. The interactions of ddC, ara-C, ara-A and ara-U with hOAT1 and hOAT3 were examined using MDCK cells stably overexpressing hOAT1 or hOAT3. Among the tested drugs, ddC showed the highest affinity to hOAT1 with $IC_{50}$ values of 5.2 mM, while ara-A, ara-C and ara-U weakly inhibited the cellular uptake of $[^3H]-PAH$ in MDCK-hOAT1 cells at 1 mM. In contrast, all the tested drugs did not have any inhibition effect on the cellular uptake of $[^3H]-estrone$ sulfate in MDCK-hOAT3 cells over the drug concentration of 0.01-2 mM, implying that they might not interact with hOAT3. Taken all together, the present study suggests that hOAT1 could weakly interact with nucleoside analogues such as ddC, ara-C, ara-A and ara-U but the interaction with hOAT3 during the urinary excretion of these nucleoside analogues may be negligible in the kidney.
Many nephrotoxic agents exert their effect primarily on the cells of the proximal tubules. We used the LLC-$PK_1$, kidney epithelial cell line as a model system for studies on nephrotoxicity and investigated whether the uptake of $\alpha$-methylglucose($\alpha$-MG) could serve as a parameter to assess effects of nephrotoxicants on the functional integrity of the cells at an early time of toxicity. The enzyme leakage test which has been used to be as a conventional cytotoxic parameter in vitro, was conducted to compare with $\alpha$-MG uptake. Treatment with cisplatin for 24 and 48 hours significantly increased activities of lactate dehydrogenase and $\gamma$-glutamyltransferase in culture medium at a concentration of 50$\mu$M. However, above 100$\mu$M of concentration, activities of these enzymes in media were dramatically decreased by cisplatin. These observations indicate that cisplatin has direct inhibitory effect on the activities of these enzymes and make it doutful to use enzyme leakage test to demonstrate damage of kidney cells by chemicals such as cisplatin over the appropriate range of concentration. Cisplatin inhibited $\alpha$-MG uptake at a low concentration which enzymes were not leaked. Also cadmium chloride and mercuric chloride which are acutely nephrotoxic in vivo, significantly inhibited $\alpha$-MG uptake at a low concentration. These results indicate that the uptake of $\alpha$-methylglucose in LLC-$PK_1$cell line is a useful biomarker for the study of nephrotoxicity.
Patients with diffusely increased uptake in both kindeys("hot kidney") on the $^{99m}Tc-MDP$ bone imagings were evaluated. Total incidence of the "hot kidney" was 2.7% (56/2053). Among 56 patients with "hot kidney", the most common diseases were malignancies (30), and the remainders were composed of renal diseases(11) and other disease group(16). We report the possible factors for the "hot kidney" with brief review of some literatures.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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