Avian reoviruses have been implicated in respiratory disease enteric conditions including Cloacal pasting in young thicks, pericarditis, hydropericardium, anaemia with swollen spleen and liver and petechiation of skeletal muscle and viral arthritis. This study was conducted to examine properties of reovirus field 3 strains isolated from affected broiler from several farms. An infectious agent was isolated from leg tendons and intestine of broiler with clinical tenosynovitis. The agent grew well on the chicken embryo kideny cells(CEK). One of them produced cytopathic effects(CPE) of round type and formed intranuclear inclusions, and the other was characterized by CPE of syncytical type and cytoplasmic inclusion. The properties and serological classification of field strains were examined by hemagglutin test, virus neutralization test, agar gel precipitin, electropherotype. They showed no hemagglutination reactions and not well neutralization and to possess common antigens detectable by AGP test. RNA electropherotype presented 10 segment band as the previous report. These data suggest that the field strains and standard strains (1133, 1733) may be the same group.
Reovirus was found to inhabit both the respiratory and the enteric tract of human and animals. The genome of reovirus comprises 10 segments of double-stranded RNA, total size 24 kbp. Nine strains of reovirus were isolated from human and field mice in Korea. Aseptically collected sera from human and lung tissues from field mice were used for virus isolation. For serotype determination, hemagglutination inhibition test was used, and three strains were confirmed to type 2 and six strains to type 3. To determine the genomic diversity and molecular phylogeny of reoviruses isolated in Korea, part of S4 genomic segment of reovirus was enzymatically amplified and directly sequenced. In nucleotide level, Apo98-35 strain showed 15.4%, 19.3%, and 14.4% differences compared to type 1 (T1L, Lang), type 2 (T2J), and type 3 reference strains, respectively. In amino acid level, Apo98-35 strain showed 10.5%, 13.7%, and 9.5% differences compared to type 1, type 2, and type 3 reference strains, respectively. Using the maximum parsimony method based on 285 bp spaning region of the S4 genomic segment, phylogenetic analysis indicated that Apo98-35 from Korea formed different phylogenetic branch. Our data obtained by sequence and phylogenetic analyses of reoviruses are consistent with the distinct geographically dependent evolution of reoviruses in Korea.
Avian reovirus (ARV) and fowl adenovirus (FAdV) were evaluated for pathogenicity in specific pathogen free (SPF) chickens. ARV was isolated from the broilers with history of malabsorption syndrome (MAS). FAdV was isolated from the layer breeders with inclusion body hepatitis and hydropericardium syndrome. Total 6 inoculated groups including 1 un-inoculated group were organized and inoculated with the ARV and/or FAdV by oral route. The minimal pathological lesions and lower viral gene detection rates were present in the ARV inoculated groups compared to those of FAdV or ARV/FAdV inoculated groups. Common gross lesions in the ARV inoculated group were distended intestine with foamy contents and in the FAdV group there were foamy cecal contents and hydropericardium among the evaluation methods such as gross and histological lesion, viral gene detection, body weight and serum chemistry, histopathological lesion score was reliable especially in the liver lesions such as hepatic necrosis and lymphocytic infiltration. However, we did not success to evaluate the synergetic effect of mixed infection of ARV and FAdV in this study. Therefore, we need further study to reproduce malabsorption syndrome of ARV infection using different viral agent such as rotavirus and using different dose of virus.
Kim, Wi-Sik;Kim, Soo-Jin;Kim, Jeong-Ho;Jung, Sung-Ju;Kim, Do-Hyung;Oh, Myung-Joo
Journal of fish pathology
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v.23
no.3
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pp.335-342
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2010
In 2008, mass mortality was observed in paradise fish Macropodus opercularis which was imported from Indonesia. PCR of these fish found positive for megalocytivirus and Mycobacterium sp., while an unidentified virus was culture-isolated using CHSE-214 cells. In the present study, we investigated characterization of the unidentified virus and its pathogenicity to determine whether the virus was the causative agent of the mass mortality of paradise fish. The unidentified virus induced cytopathic effect (CPE) with syncytia in CHSE-214 and other fish cells, BF-2, GF, SSN-1, FSP and FFN. The virus was resistant against treatments with IUdR, chloroform, acidity at pH 3, basicity at pH 11 and high temperature at $56^{\circ}C$ for 3h. By electron microscopy, the viral particles were spherical having a double capsid structure with approximately 65 nm in external diameter. Viral genome was composed of at least 10-segmented RNA with sizes ranging from 0.7 kb to 3.6 kb. Based on these characters, this virus can be classified into family Reoviridae. This reovirus did not cause any mortality in an artificial experiment conducted by injecting the virus to paradise fish. This indicates that the reovirus is not only responsible for the mass mortality of paradise fish in 2008.
Mammalian reovirus (MRV) causes respiratory and intestinal disease in mammals. Although MRV isolates have been reported to circulate in several animals, there are no reports on Korean MRV isolates from wildlife. We investigated the biological and molecular characteristics of Korean MRV isolates based on the nucleotide sequence of the segment 1 gene. In total, 144 swabs from wild animals were prepared for virus isolation. Based on virus isolation with specific cytopathic effects, indirect fluorescence assays, electron microscopy, and reverse transcription-polymerase chain reaction, only one isolate was confirmed to be MRV from a Korean roe deer (Capreolus pygargus). The isolate exhibited a hemagglutination activity level of 16 units with pig erythrocytes and had a maximum viral titer of 105.7 50% tissue culture infectious dose (TCID50)/mL in Vero cells at 5 days after inoculation. The nucleotide and amino-acid sequences of the partial segment S1 of the MReo2045 isolate were determined and compared with those of other MRV strains. The MReo2045 isolate had nucleotide sequences similar to MRV-3 and was most similar (96.1%) to the T3/Bat/Germany/342/08 strain, which was isolated in Germany in 2008. The MReo2045 isolate will be useful as an antigen for sero-epidemiological studies and developing diagnostic tools.
A total of eight strains of avian reoviruses were isolated from chickens with arthritis or stunted growth. The isolations were made from broilers or broiler breeders under 12 weeks of age. The viruses had a typical morphology of reoviruses with double capsid layers and 81nm of diameter. In agar gel precipitation tests, the isolates reacted with antisera prepared against S-1133 or R-1 strains of avian reoviruses and cross reacted with S-1133 antigen. They did not agglutinated RBC's from day-old chicks, adult chickens, guinea pigs, and horses. The isolates showed strong resistance against the treatments of chloroform, IUdR, and heat, When infectivities of the viruses were titrated in cell cultures of chicken embryo fibroblast, chicken embryo liver, and Vero cells, similar end points reached four to five days after inoculation, regardless of tell types and virus inoculation time, either inoculated simultaneously at the time of cell seeding or on confluency. Mean times of mortality of chicken embryos inoculated with the isolates via the chorioallantoic membrane ranged from 54 to 59 hours and that of S-1133 strain was 73 hours.
Kim, Hye Kwon;Moon, Hyoung Joon;Park, Seong Jun;Rho, Se Mi;Han, Jae Yeon;Nguyen, Van Giap;Park, Bong Kyun
Korean Journal of Veterinary Research
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v.51
no.2
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pp.129-137
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2011
Swine diseases could be caused by unrecognized or minor pathogens. In this study, two unknown cytopathogenic agents were isolated from swine, through cell culture. In order to identify these two cytopathogenic agent (designated CP129 and #2045-7), a particle associated nucleic acids PCR (PANPCR) from previous paper was used with simple modification. The cloning procedure was more specified in this study by adding cell control system. According to the modified PAN-PCR, two and four agentsspecific DNA sequences were obtained from CP129 and #2045-7, respectively, and they were identified as Mycoplasma (M.) hyorhinis and Mammalian orthoreovirus by nucleotide BLAST. Since M. hyorhinis (CP129) was filterable and non-visible by microscope, this unusual virus-like nature of M. hyorhinis (CP129) was discussed. Especially, the reovirus (#2045-7) was a serotype 3 and a triple reassortant among three serotypes of reoviruses. It was grouped with recently reported reoviruses from disease cases (swine, human and feline), based on the genetic analysis of L1 and S1 partial sequences. In conclusion, two unknown cytopathogenic agents were successfully identified using modified PAN-PCR with cell control system and they were characterized in this study.
In March 1997, a new rhabdovirus was isolated from moribund cultured Japanese flounder Paralichthys olivaceus in sea water tank and cage culture systems in Kyung-Nam and Chun-Nam province, Korea. At temperature $15^{\circ}C$ the virus replicated and induced cytopathic effects (CPE), which progressed to eventual cytolysis, in susceptible cell lines, including RTG-2 and EPC. The CHES-214 cell line was refractory. Virus particles were bullet-shaped and measured $70nm{\times}100$ to 150 nm in size. The isolate was sensitive to pH 3, to diethyl ether, and to heat ($50^{\circ}C$ 5 min, $60^{\circ}C$ 1 min). Viral replication was not inhibited by $10^{-4}$ M 5-iododeoxyuridine. Virus infectivity was reduced by anti-HRV (8401-H) rabbit serum, but can not reduced by antisera against infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV), chum salmon reovirus (CSV), retrovirus of salmonid (RVS) and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV). HRV virus antigen was detected by fluorescent antibody test (FAT) in the cytoplasm of infected EPC cell. Purified isolates virions were composed of: polymerase (L), glycoprotein (G), nucleoprotein (N) and 2 matrix proteins (M1 and M2). Based upon their relative mobilities, the estimated molecular weights of the proteins were: L, 160 kDa; G, 55 kDa; N, 45 kDa; M1, 26 kDa; and M2, 22 kDa.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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