• Maxillofacial Plastic and Reconstructive Surgery
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• 제31권3호
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• pp.193-197
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• 2009

Background: Though it is clear that many types of viruses can infect the oral mucosa, its condition for infection is unclear. The purpose of this study was to analyze the conditions for viral infection of normal oral mucosa and explore the possibility of topical gene therapy to oral mucosa using a viral vector. Methods: Freshly taken fragments of the palate and the tongue of mice were used for organ culture. The specimens were exposed to green fluorescent protein (GFP)-adenoviral vector for 1 hour except for the control. Initial viral titer was $6.3{\times}10^{11}\;pfu/ml$ and the virus was diluted to working concentrations. The dilution ratio was 1:1,000 ($6.3{\times}10^8\;pfu/ml$), 1:10,000 ($6.3{\times}10^7\;pfu/ml$), and 1:100,000 ($6.3{\times}10^6\;pfu/ml$). They were then cultured on a stainless steel wire mesh in an organ culture dish. The specimens were stereoscopically examined every 24 hours for 6 days, after which they were fixed and analyzed through immunohistochemical methods Results: There was no visible expression in the control, $6.3{\times}10^6\;pfu/ml$, and $6.3{\times}10^7\;pfu/ml$ groups. Initial expression was observed at 24 hours after infection in both the palate and the tongue in $6.3{\times}10^8\;pfu/ml$ and the expression significantly increased until 3 days in the palate and 2 days in the tongue after infection (P<0.05). In both groups, the expression was mostly observed at the resection margin. Immunohistochemical studies showed that the epithelial cells were positive to GFP. Conclusion: The present study showed that topically applied adenovirus containing specific genetic information of GFP could successfully transduce GFP in normal oral epithelial cells at the resection margin in organ culture in terms of dose and exposure time.

• 한국환경농학회지
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• 제35권1호
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• pp.72-78
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• 2016

본 곤충병원성곰팡이 B. bassiana M130의 포자를 대량생산하기 위한 방안으로 천연제오라이트 세라믹볼, 합성제오라이트 세라믹볼과 활성탄볼을 이용한 담체배양을 실시하였다. 그 중 천연제오라이트 세라믹볼 이용한 포자생산방법이 가장 우수 한 것으로 조사 되었으며, 배양 최적조건은 미강추출물(1:8, W/V) 3 mL, 전분 33 g, 포자현탁액 7 mL, pH3과 NaCl 5%로 배양하였을 때 B. bassiana M130 포자를 4.2×10⁸ conidium/mL 생산하고, 사이클론 회수방법을 통해 순수포자만 63%의 회수율을 보였다. 향후 천연제오라이트 세라믹볼을 이용한 곤충병원성 곰팡이 B. bassiana M130 포자의 대량생산이 가능하며, 온실가루이제어용 친환경살충제로 제품생산 및 원제의 대량생산을 통해 국산화 가능성을 제안하고자 한다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제36권1호
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• pp.7-12
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• 2009

본 실험은 음나무 배발생 세포의 증식 및 체세포배 발달을 위한 액체 현탁 배양조건의 확립을 위해 수행되었다. 배발생 세포의 생장율은 접종 밀도가 증가할수록 감소하였다. 배발생 세포의 증식에 가장 효과적인 접종 밀도는 0.1 g/100 ml 로서 이 농도에서 세포의 생장율이 가장 높았다. 배양기간에 따른 배발생 세포의 생장 패턴 및 세포 주기 (G1, S, G2/M) 분석 결과, 세포의 생장은 배양 5일 후부터 증가가 시작되어 15일 까지 급격히 생장하였으며 그 이후에는 점차 감소하였다. 배양 기간 별 세포 주기 (cell cycle)의 변화가 명확하게 관찰되어 배양 5일째 5기는 초기의 5.5% 에서 11.7%로 두 배정도 증가하였으며, 배양 15일 이후부터는 다시 초기의 세포 주기로 되돌아가면서 안정화되는 것으로 나타났다. 따라서 음나무 배발생 세포의 현탁배양은 15일의 주기로 배양하는 것이 증식에 가장 효과적인 것으로 생각되었다. 한편 배발생 세포에서 체세포배의 유도는 배양초기의 접종 밀도가 중요한 것으로 나타났다. 0.5 g/L 의 낮은 밀도로 접종 시에는 65% 이상의 어뢰형 배가 유도된 반면 접종 밀도가 높아질수록 어뢰형으로의 배발달은 급격히 감소하였다. 초기의 접종 밀도가 증가할수록 특히 어뢰형 배의 발달은 지연되었으나 구형 및 심장형 배의 유도는 초기 접종밀도에 영향을 받지 않았다. 이상의 실험결과로 음나무 액체 배양 시 초기 접종 밀도를 조절함으로써 배발생 캘러스의 증식 및 체세포배를 효과적으로 유도할 수 있었으며 이는 체세포배 생산을 위한 배양 기간의 단축이 가능함을 보여주는 결과이다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제11권3호
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• pp.205-217
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• 2007

본 연구는 자궁근종 성장에 관한 분자생물학적인 기전의 이해를 위해 자궁근종 및 정상 자궁근세포의 초기 배양방법을 확립하기 위해 실시하였다. 이를 위해 최종적으로 두 가지 세포 배양 방법이 확립되었다. 그리고 안정적으로 연구(특히, 여성호르몬에 대한 반응 연구)에 사용할 수 있는 가장 적합한 세포 배양 방법이 모색되었다. 두 가지 세포 배양 조건 중 두 번째 방법(method 2)이 안정적으로 세포의 반응을 연구하는데 더 나은 방법으로 결론 내려졌고, 여성호르몬에 대한 반응이 더 좋은 것으로 밝혀졌다. 이 방법을 통해 배양된 세포에 $E_2$를 처리했을 때 정상 자궁근세포에 비해 근종세포에서 PR, IGF-1 and IGF-1 receptor mRNA의 발현이 더 높은 것으로 나타났다. 더욱이 주변에 있는 세포들보다는 조직에서 좀 더 큰 반응을 보였으며, 이는 $E_2$에 대한 세포의 반응에 세포외기질(extracellular matrix)과 세포 사이의 상호작용이 필요하다는 것을 의미한다. 결론적으로 이러한 근종세포 및 조직의 초기 배양 방법은 in vitro 상에서 종양 발생에 대한 기초연구를 위해 유용하게 사용될 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제39권9호
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• pp.1366-1372
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• 2010

알코올 발효 효모 종류를 달리하여 현미탁주를 제조하고 이를 이용한 현미식초(정치배양 및 교반배양)의 품질 특성을 조사하였다. 효모 종류에 따른 알코올 함량은 B가 14.3%로 가장 높았으며 적정산도는 모든 구간에서 0.6% 이하로 나타났다. 이를 이용한 교반 및 정치배양 현미식초의 품질특성을 비교한 결과, 교반배양구간에서는 초기산도 1.0%, 초기 pH는 3.9~4.0에서 발효 7일째 DV구간에서 산도가 6.05%로 가장 높았고 AV, CV 및 BV가 5.64, 5.55 및 5.32% 순으로 나타났다. 또한 정치배양구간에서도 산도는 발효 14일째까지 꾸준히 증가하여 5.01~5.31%로 나타났고 발효 16일째부터 조금씩 감소하는 경향이었다. 효모 종류에 따른 현미식초의 산도 및 pH 차이는 크게 나타나지 않았다. 현미식초의 유리아미노산 함량을 비교한 결과, 교반배양구간에서 총 유리아미노산 함량은 BV, DV, AV 및 CV 순으로 높게 나타났고 필수 유리아미노산 함량은 BV에서 100 mg% 이상으로 가장 높았다. 정치배양구간에서 유리아미노산 함량은 모든 구간에서 교반배양구간보다 높은 함량을 나타내었으며 serine, alanine, valine, isoleucine, leucine 및 $\gamma$-aminobutyric acid 등이 교반배양구간에 비하여 높았으며 특히 $\gamma$-aminobutyric acid는 45.69~52.27 mg%로 약 10배 이상 높게 나타났다. 현재까지의 결과는 현미식초의 품질특성은 효모 종류보다는 초산발효 방법에 따른 품질 차이가 더 큰 것으로 나타났다. 그러나 향후 숙성과정에서 변화를 거치면서 향기성분, 관능적 특성에 차이가 있을 것으로 예상되어 다양한 식초의 품질인자에 관한 연구가 요구된다.

• 식물조직배양학회지
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• 제28권3호
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• pp.141-146
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• 2001

고추 C. anuumm, C. bacatuum, C chacoense의 하배축, 자엽 및 본엽을 원형질체 분리재료로 하여 실험한 결과, 원형질체 분리를 위해서 세포벽 분해효소로 1% Cellulysin과 0.25% Macerozyme 효소의 조합과 삼투조절제로 0.65 M sorbitol을 사용하였다. 항산화제인 MES를 효소용액에 첨가하여 줌으로써 원형질체 분리과정에서 발생하는 갈변을 억제시킬 수 있었다. 원형질체를 수정된 K8p 배지에 1∼5 mg/L zeatin, 0.5 mg/L IAA, 0.1∼0.5 mg/L TDZ, 1 mg/L 2,4-D를 첨가하여 배양하였을 때 5일에 분열을 시작하였으며 원형질체에서 얻어진 colony들을 agarose가 첨가된 반고체 배지에 고정하여 배양하는 방법이 액체평판배양 방법보다 더 효과적이었으며 이 방법은 세포배양시 분비되는 페놀류 물질로 인한 갈변을 방지할 수 있었다. 세 가지 다른 고추속의 원형질체 배양에서 얻어진 4000여 개의 캘러스를 식물생장조절제인 TDZ, IAA, 2ip, BAP, NAA, zeatin을 이용한 100가지 다양한 조합의 재분화 배지에 옮겼으나 캘러스가 커지거나 고사하는 현상만 관찰되었을 뿐 줄기로 재분화된 식물체는 얻을 수 없었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권3호
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• pp.244-249
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• 1998

Methylobacterium organophilum을 사용하여 메탄올로부터 세포외 고점도 다당류, 메틸란의 생산을 특정 배양조건에서 수행하였다. C/N 비율이 미치는 영향을 살펴본 결과 균체의 비성장속도는 C/N 비율에 대하여 큰 차이가 없었고, 단위 균체당 메틸란 생산수율은 C/N 비율 약 30부근에서 최적이었다. 여러 가지 금속염 중에서 Mn$^{++}$과 Fe$^{++}$ 이온이 결핍하면 메틸란의 생산이 현저히 저해됨을 보였다. 균체 농도와 메틸란 생산은 pH는 7근처에서 최적을 나타내었다. 균체 성장의 최적온도는 37$^{\circ}C$이었으나 메틸란 생산의 최적 온도는 3$0^{\circ}C$이었다. 메탄을 농도가 증가할수록 비성장속도가 감소하였고, 4% 이상의 농도에서는 균체 성장이 완전히 저해되었다. 메틸란 생산을 위한 최적 메탄올 농도는 초기농도로 0.5%(v/v)이었고 그 이상의 농도에서는 메틸란 생산이 급격히 감소하였다. 메탄올의 독성과저해를 극복하기 위하여 최적 배양조건에서 메탄올의 유가식 배양을 수행하여 최종 균체 농도와 최종 메틸란 농도가 각각 12.4 g/l 및 8.7 g/l이었다.

• 한국균학회지
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• 제10권2호
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• pp.75-83
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• 1982

사과주(酒) 효모(酵母)의 Saccharomyces sp. R-11의 배양조건(培養條件)을 균생육(菌生育)과 알코올생성(生成)의 측면(側面)에서 검토(檢討)한 결과(結果)는 다음과 같다. 기본배지(基本培地)로서는 Henneberg B 배지(培地)가 가장 양호(良好)하였으며 탄소원(炭素源)으로 sucrose가 가장 우수하여 균(菌)의 생육면(生育面)으로는 15%, 알코올생성(生成)을 위해서는 25% 첨가(添加)가 가장 적당하였다. 공시균(供試菌)의 생육(生育)을 위한 최적(最適) pH는 4.5, 온도(溫度)는 30^{\circ}C$였다. 한편 $Mg^{2+}$ 첨가(添加)는 균생육(菌生育)을 촉진(促進)시켰으며$Co^{2+}$는 저해(沮害)하였다. 알코올생성(生成)은 배양온도(培養溫度)가 낮을수록, 최적(最適) pH에 가까울수록 양호(良好)하였다. Generation time은 정치배양시(靜置培養時) 최적생육조건(最適生育條件)에서 7.5시간(時間)이었으며 specific growth rate 0.092 $hr^{-1}$이었다. 균생육(菌生育)은 알코올농도(濃度) 8%에서 약 50% 저해(沮害)되었으며 12% 이상(以上)에서는 거의 불가능(不可能)하였다. 본공시균(本供試菌)은 알코올 무첨가시(無添加時) $SO_2$ 125ppm까지, 알코올농도(濃度) 8%에서는 75ppm까지 생육(生育)이 가능(可能)하였으며, $SO_2$ 농도(濃度)가 높아질수록 lag phase가 길어지는 경향(傾向)을 보였다 알코올농도(濃度)와 $SO_2$ 관계에서는, 균생육(菌生育)은 초기(初期) 알코올농도(濃度) 6%까지는 $SO_2$ 농도(濃度)에 관계없이 별(別)다른 차(差)가 인정되지 않았으며, $SO_2$ 무첨가(無添加) 및 25ppm에서는 초기(初期) 알코올농도(濃度) 10%, $SO_2$ 50ppm 및 75ppm에서는 8%, $SO_2$ 100 및 125ppm에서는 초기(初期) 알코올농도(濃度) 6%까지 알코올생성(生成)이 가능했다.

• 한국균학회지
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• 제20권1호
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• pp.58-64
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• 1992

Trichoderma 속의 제균종중에서 10균주를 선별하여 protoplast 형성에 관한 제반조건을 검토하였으며 그 결과는 다음과 같았다. 보편적으로 protoplast 형성에 있어서 삼투안정제의 효과는 ${KCI}>(NH_4)_2{SO_4}>NaCl>mannitol>{MgSO}_4$ 순이었으며, 최적농도는 0.6-0.9M 사이에서 결정되었다. Protoplast형성을 위한 DRISELASE의 최적조건은 pH5.0, 효소농도 2%. 반응시간 4시간, 반응온도 $30^{\circ}C$ 이었다. NOVOZYM 234의 최적조건은 pH 5.5, 효소농도 1%,반응시간 3시간, 반응온도 $30^{\circ}C$ 이었다. Protoplast 생성은 대수증식기 초기와 증기사이의 균사체가 최적이었다. Protoplast 생성에 있어서는 DRISELASE가 효과적이었으나 T. longibruchiatum IAM 13107과 T. viride IAM 5141의 경우에는 NOVOZYM 234가 보다 효과적이었다.

• 한국양식학회지
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• 제10권2호
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• pp.219-225
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• 1997

배양온도, 먹이생물의 종류에 따라 rotifer 의 성장과 세포크기변화를 알아본 결과 다음과 같다. Large-type rotifer 의 최대세포수는 온도 $36^{\circ}C$, 먹이생물 $\omega$-yeast를 공급한 것에서 배양 7일후 1,420 ind./ml, small-type rotifer에서는 온도 $34^{\circ}C$, 먹이생물 $\omega$- yeast를 공급한 것에서 배양 7일후 1,669 ind./ml로 최고의 성장을 보였다. Rotifer의 크기변화에서는 large-type의 경우 온도 $34^{\circ}C$, 먹이생물 C. ellipsoidea를 공급한 실험구에서 $112.1\mu m$까지 감소되었다 (실험시작시 $202.0\mu m$. Small-type rotifer의 경우는 $320^{\circ}C$, $\omega$-yeast를 먹이로 공급한 것이 배양시작 5일후 $201.3\mu m$까지 증가되었다 (실험시작시 $157.0\mu m$. 크기의 변화가 큰 rotifer에 온도 변화를 다시 주었을 때 처음 실험 시작 때의 rotifer 크기로 회복되었다.