An, Su-Yeon;Lee, Hoon-Taek;Kim, Suel-Kee;Yoon, Yong-Dal;Lee, Ho-Joon
한국동물번식학회:학술대회논문집
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한국동물번식학회 2003년도 학술발표대회 발표논문초록집
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pp.31-31
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2003
The incidence of reproductive abnormalities in the male has been reported to have increased during the past 50 years. These changes may be attributable to the presence of chemical with oestrogenic activity in our environment. Present study was carried out to determine the effects of maternal exposure to xenoestrogens on the testicular development and on the transcriptional expression of the steroidogenic enzyme and subunits of inhibin/activin in testis of male offspring. Pregnant female mice were administrated with 4-tert-octylphenol (OP; 2, 20, 200mg/kg), Bisphenol A (BPA; 2, 20, 200$\mu\textrm{g}$/kg), $\beta$-estradiol 17-valerate (EV; 2$\mu\textrm{g}$/kg) or vehicle (CV; corn oil) during gestational days 11 to 17. Offsprings were sacrificed on gestational day 18 (fetal 18) and neonatal day 7. Body weights were significantly increased in groups treated with all doses of OP and BPA. Maximum seminiferous tubules diameter on gestational day 18 were not changed in any treatment group, however, they were significantly increased on the neonatal day 7 in the group treated with low-dose of OP (2 mg/kg) and BPA (2 $\mu\textrm{g}$/kg). Increased expression of the P450$_{17a}$-hydroxylase dehydrogenase (P450$_{17a}$), 3$\beta$-hydroxylase dehydrogenase (3$\beta$-HSD), and 17$\beta$-hydroxylase dehydrogenase (17$\beta$-HSD) on gestational day 18 were observed in the groups treated with 2 or 20 mg/kg of OP. However, expression of the steroidogenic enzymes were not changed in the groups treated with all the doses of BPA. In contrast with the results from fetal testis, no expressional changes of these enzymes was found in all the OP-treated group and increased expression of inhibin/activin $\beta$B subunit mRNA were obseued in the 200 $\mu\textrm{g}$/kg BPA-treated group in the neonatal day 7. These results suggest that gestational exposure to low level of xenoestrogen causes a stimulatory effects on the transcriptional expressions of steroidogenic enzymes and subunits of inhibin/activin and on the seminiferous tubule development by their estrogen-like actions.ons.
난자 동결방법의 선별은 보다 효과적인 난자은행의 개발에 필수 불가결한 중요한 요소이다. 이전의 연구에서 마우스의 난자를 ethylene glycol과 electron microscope grid를 이용한 유리화 동결법으로 동결 융해한 결과 기존의 slow freezing 방법에서보다 높은 생존율과 배발달율이 나타남을 관찰하였다. 그러나 동결융해후의 난자는 방추사와 염색체의 이상성이 대조군에 비해 높은 빈도로 나타나 융해후의 배발달율을 감소시키는 것으로 보고되었다. 이에 본 연구에서는 유리화동결법동안 항동해제에 Cytoskeleton system을 안정화시키는 cytoskeleton stabilizer인 taxol을 첨가시킨후 동결시켰을때 생존율과 발달율을 개선시킬 수 있는지 알아보고자 본 실험을 시행하였다. ICR mouse의 성숙란을 채취하여 연구목적에 따라 taxol을 첨가시키지 않은 대조군과 첨가시킨 실험군으로 분류하였다. 동결방법은 난자를 1.5 M ethylene glycol (EG)에 2분 30초간 노출시킨후 5.5 M EG와 1 M sucrose가 첨가된 동결액에 20초간 노출시킨 후 Grid에 난자를 부착시킨후 직접 액체질소에 침지하여 동결하였다. 동결후 난자는 5단계로 융해를 실시한 후 정자와 체외수정을 시킨 후 수정된 난자는 modified P1 배약액에 124 h까지 발달율을 관찰하였고, 배양 후 발달된 배반포는 대조군과 실험군, 각각 4마리의 발정동기화된 recipient에 이식을 시행하였다. 배발달율은 대조군에 비해 실험군에서 4세포기 (48 vs. 84.4%), 8세포기 (34% vs. 70.6%), 상실배 (26% vs. 58.6%) 그리고 배반포 발달율은 (24% vs. 58.6%)로 높게 관찰되었다. 배아이식후 대조군과 실험군에서 각각 2 마리가 임신이되어 정상적인 산자를 분만하였다. 따라서 항동해제에 taxol의 첨가는 동결 융해후의 난자의 배발달율을 증진시킬 수 있었다..8%로 나타나 난할율 및 배반포 발생율에 있어서 융합조건에 따라 큰 차이는 없었으나 1.9㎸/cm, 30$\mu\textrm{s}$ 2회의 조건이 다른 조건들에 비하여 유의적으로 낮았다. 따라서, 체세포와 수핵란 세포질간의 융합율과 배반포 발생에 미치는 영향은 전압보다는 시간에 더 크게 받음을 알 수 있었으며, 이와 같은 결과에서 융합시 시간을 오래 주는 것보다 전압을 높이는 것이 수핵난자의 세포질에 상해를 줄이고 이후 배반포 발생에 유리할 것으로 사료되었다.면에서도 더욱 더 활발할 것으로 기대된다. 배란후 72시간째에 초음파진단기를 이용하여 난소의 난포발달을 조사한 결과 , 대조구와 bFF처리구에 비해 AI처리구에서 발달난포가 유의적으로 많은 것을 확인하였다. 이상과 같은 결과로, Anti-inhibin serum은 한우 자체에서 분비하는 Inhibin을 특이하게 억제하여 Inhibin에 의해 억제되는 FSH분비가 촉진됨으로써 난포발달과 estrogen의 농도가 촉진되는 것으로 사료되어 anti-inhibin serum이 한우의 과배란유기 효과가 있는 것으로 사료된다.정량 분석한 결과이다. 시편의 조성은 33.6 at% U, 66.4 at% O의 결과를 얻었다. 산화물 핵연료의 표면 관찰 및 정량 분석 시험시 시편 표면을 전도성 물질로 증착시키지 않고, Silver Paint 에 시편을 접착하는 방법으로도 만족한 시험 결과를 얻을 수 있었다.째, 회복기 중에 일어나는 입자들의 유입은 자기폭풍의 지속시간을 연장시키는 경향을 보이며 큰 자기폭풍일수록 현저했다. 주상에서 관측된 이러한 특성은 서브스톰 확장기 활동이 자기폭풍의 발달과 밀접한 관계가 있음을 시사한다.se that were all low in two aspects, named "the Nonsignificant group". And the issues were high risk perception in general setting and
유리화 동결법은 동결중 ice crystal의 형성이 이루어지지 않으므로 난자의 동결보존을 위한 유용한 동결방법이다. 이전의 연구에서 마우스의 난자를 ethylene glycol과 electron microscope grid를 이용한 유리화 동결법으로 동결 융해한 결과 기존의 slow freezing 방법에서보다 높은 생존율과 배발달율이 나타남을 관찰하였다. 그러나 동물과 인간 난자를 이용한 연구를 통하여 난자의 경우 동결 융해후 염색체에 부착되어 있는 미세소관인 방추사가 온도의 변화에 매우 민감하여 염색체 이상성이 증가되는 것이 보고되었다. 이에 본 연구에서는 성숙난자를 유리화동결법에 의해 동결 융해후 난자의 염색체와 방추사의 이상성이 증가되는지 알아보고자 본 실험을 수행하였다. ICR mouse의 성숙란을 채취하여 연구목적에 따라 fresh한 대조군과 동결음해 시킨 실험군으로 분류하였다. 동결방법은 난자를 1.5 M ethylene glycol (EG)에 2분 30초간 노출 시킨후 5.5 M EG와 1M sucrose가 첨가된 동결액에 20초간 노출시킨 후 Grid에 난자를 부착시킨 후 직접 액체질소에 침지하여 동결하였다. 동결후 난자는 5단계로 융해를 실시한 후 생존된 난자는 tubulin 항체를 이용한 immunostaining 방법으로 방추사의 이상성을 관찰하였고, 염색체는 난자를 고정 후 10% Giemza로 염색 후 염색체의 수적인 이상성을 관찰하였다. 염색체 분석결과 염색체 이상 빈도는 대조군의 경우 19.6%, 동결융해군은 32.8%로 관찰되었다. 또 방추사의 이상빈도는 대조군의 경우 20.2%, 동결 융해군은 32.3%로 관찰되어 동결 융해후의 난자에서 염색체와 방추사의 이상 빈도가 증가됨이 관찰되었다.찰되었다. 배아이식후 대조군과 실험군에서 각각 2 마리가 임신이되어 정상적인 산자를 분만하였다. 따라서 항동해제에 taxol의 첨가는 동결 융해후의 난자의 배발달율을 증진시킬 수 있었다..8%로 나타나 난할율 및 배반포 발생율에 있어서 융합조건에 따라 큰 차이는 없었으나 1.9㎸/cm, 30$\mu\textrm{s}$ 2회의 조건이 다른 조건들에 비하여 유의적으로 낮았다. 따라서, 체세포와 수핵란 세포질간의 융합율과 배반포 발생에 미치는 영향은 전압보다는 시간에 더 크게 받음을 알 수 있었으며, 이와 같은 결과에서 융합시 시간을 오래 주는 것보다 전압을 높이는 것이 수핵난자의 세포질에 상해를 줄이고 이후 배반포 발생에 유리할 것으로 사료되었다.면에서도 더욱 더 활발할 것으로 기대된다. 배란후 72시간째에 초음파진단기를 이용하여 난소의 난포발달을 조사한 결과 , 대조구와 bFF처리구에 비해 AI처리구에서 발달난포가 유의적으로 많은 것을 확인하였다. 이상과 같은 결과로, Anti-inhibin serum은 한우 자체에서 분비하는 Inhibin을 특이하게 억제하여 Inhibin에 의해 억제되는 FSH분비가 촉진됨으로써 난포발달과 estrogen의 농도가 촉진되는 것으로 사료되어 anti-inhibin serum이 한우의 과배란유기 효과가 있는 것으로 사료된다.정량 분석한 결과이다. 시편의 조성은 33.6 at% U, 66.4 at% O의 결과를 얻었다. 산화물 핵연료의 표면 관찰 및 정량 분석 시험시 시편 표면을 전도성 물질로 증착시키지 않고, Silver Paint 에 시편을 접착하는 방법으로도 만족한 시험 결과를 얻을 수 있었다.째, 회복기 중에 일어나는 입자들의 유입은 자기폭풍의 지속시간을 연장시키는 경향을 보이며
Sertoli cell tumor (SCT) of the testicle arises from the supporting cells within the seminiferous tubules. SCT is common in dogs, especially in cryptorchid testicles, but also has been reported in the stallion, ram, cat, and bull. Sertoli cell tumor sample was collected from 7-years male german shepherd. In this study, SCT arose from one testicle. Sample size is approximately 1.7 cm in diameter and it has a round form. In the microscopic, cells within the tumor variably resemble Sertoli cells (SCs) that normally populate the seminiferous tubules and interstitial area. There is abundant stroma of dense, mature fibrous connective tissue in SCT. In the immunohistochemical staining, cytokeratin AE1/AE3 was not expressed in the control and SCT. S-100 protein was expressed by SCs, germ cells and fibrous connective tissue of SCT. Melan A was expressed by leydig cells (LCs) of SCT. A study by using S-100 and melan A in canine SCT was almost never carried out. S-100 and melans A is considered to suggest for diagnosis and pathogenesis of canine SCTs. Inhibin-alpha and Vimentin were well known as the marekers of SCTs. Also, they were expressed by Sertoli cells and LSs of SCT in this study.
산모의 당뇨병은 조산과 함께 광범한 선천성 기형을 야기한다고 알려져 있다. 고혈당이 원인으로 제시되었지만 알려진 것은 별로 없다. 당뇨병의 모델로서 췌장을 부분절제한 동물의 배아와 신생자를 조사하였다. 1) 췌장을 90% 절제한 어미로부터 태어난 신생자는 정상 신생자보다 생존률이 낮았지만, 살아남은 신생자의 경우에 생후 6주까지 체중을 조사하였을 때 암수 모두 정상적인 신생자와 비슷하였다. 간 조직을 조사하였을 때, 췌장을 절제한 어미로부터 태어난 신생자는 암수 모두에서 간의 이상이 발견되었다. 간에서 합성되고 소변으로 분비되는 major urinary protein(MUP)도 암컷 수컷 모두에서 그 양이 감소하였는데, 간조직의 이상을 뒷받침하고 있다. 2) 췌장을 부분절제한 어미에서 남아있는 췌장내의 랑게르한스 섬이 커져 있었으며, 간조직도 이상이 생긴 것으로 나타났다. 그러나 췌장을 부분절제한 어미의 경우에 혈당 수준은 대조군과 차이를 보이지 않았다. $Inhibin-{\alpha}$가 과발현된 생쥐에서 태어난 신생자의 경우에 저체중과 생존률 저하가 나타나고 있는데, 당뇨병 신생자와 유사한 점이 매우 많다. 이에 DNA 주사법으로 $inhibin-{\alpha}$의 과발현을 유도한 후에 어미 자신의 변화를 조사하였는데, $inhibin-{\alpha}$를 과발현시킨 생쥐에서 랑게르한스 섬이 작아졌지만, 혈당 수준은 대조군과 차이를 보이지 않았다. 종합하면, 췌장의 부분절제는 신생자와 배아 모두에게 영향을 미치고 있었고, 어미 자체에도 심각한 영향을 주고 있었다. 그렇지만 조사한 기간 내에서 산모의 혈당 수준은 변하지 않은 것으로 나타났다. 당뇨병 산모와 배아 및 신생자와의 관계는 매우 복잡한 것으로 추정된다.
Inhibins participate in the regulation of pituitary follicle-stimulating hormone synthesis and secretion, follicular maturation and steroidogenesis in the female. Inhibin ${\beta}_A$ gene (INHBA) was studied as a candidate gene for the prolificacy of sheep. Single nucleotide polymorphisms of the entire coding region and partial 3' untranslated region of INHBA were detected by PCR-SSCP in two high fecundity breeds (Small Tail Han and Hu sheep) and six low fecundity breeds (Dorset, Texel, German Mutton Merino, South African Mutton Merino, Chinese Merino and Corriedale sheep). Only the PCR products amplified by primers 3, 4 and 5 displayed polymorphisms. For primer 3, genotype CC was only detected in Chinese Merino sheep, genotype AA was detected in the other seven sheep breeds. Genotype BB was only detected in Hu sheep. Only Hu sheep displayed polymorphism. Eight or four nucleotide mutations were revealed between BB or CC and AA, respectively, and these mutations did not result in any amino acid change. For primer 4, genotypes EE, EG and GG were detected in Dorset and German Mutton Merino sheep, genotypes EE, EF and FF were detected in Chinese Merino sheep, only genotype EE was detected in the other five sheep breeds. Only Dorset, German Mutton Merino and Chinese Merino sheep displayed polymorphism. Sequencing revealed one nucleotide mutation ($114G{\rightarrow}A$) of exon 2 of INHBA gene between genotype FF and genotype EE, and this mutation did not cause any amino acid change. Another nucleotide change ($143C{\rightarrow}T$) was identified between genotype GG and genotype EE, and this mutation resulted in an amino acid change of $serine{\rightarrow}leucine$. For primer 5, genotypes KK and KL were detected in German Mutton Merino and Corriedale sheep, genotypes KK, LL and KL were detected in the other six sheep breeds. Genotype MM was only detected in Hu sheep. All of these eight sheep breeds displayed polymorphism. Sequencing revealed one nucleotide mutation ($218A{\rightarrow}G$) of exon 2 of the INHBA gene between genotype LL and genotype KK, and nine nucleotide mutations between genotype MM and genotype KK. These mutations did not alter amino acid sequence. The partial sequence (395 bp for exon 1 and 933 bp for exon 2) of the INHBA gene in Small Tail Han sheep (with genotype KK for primer 5) was submitted into GenBank (accession number EF192431). Small Tail Han sheep displayed polymorphisms only in the fragment amplified by primer 5. The Small Tail Han ewes with genotype LL had 0.53 (p<0.05) or 0.63 (p<0.05) more lambs than those with genotype KL or KK, respectively. The Small Tail Han ewes with genotype KL had 0.10 (p>0.05) more lambs than those with genotype KK.
Twenty years have passed since a prenatal screening for Down syndrome and neural tube defect was applied to obstetric field. The Quad test (AFP, hCG, uE3, Inhibin-A) of the second trimester and the combination test (PAPP-A, hCG, NT) of the first trimester became popular now. The recent trend of prenatal screening is to combine these two screening tests together in order to increase a detection rate of Down syndrome. Three types of screening methods are introduced as follows; integrated test, sequential test and contingent test. In addition to combination of each test, an incorporation of characteristic ultrasound findings of Down syndrome is suggested for its risk calculation. The absence of fetal nasal bone would be a very useful marker especially in the first trimester screening test. According to a change of way calculating risk of Down syndrome, obstetrician's role will be more increased not by passive participation, but by active participation using ultrasound in risk calculation.
암컷 포유동물의 노화 과정에서 생식계는 체내 여러 시스템 가운데 가장 먼저 기능 저하가 나타난다. 생식 노화(reproductive aging) 과정 중인 암컷 포유동물은 비록 종 특이성이 있지만 주기성(cyclicity)의 소실과 같은 생식 능력의 감소와 함께 여러 기능들의 변화가 동반되면서 궁극적으로 인간의 폐경 현상과 같은 생식 능력 상실이 나타난다. 본 증설은 암컷 포유동물의 생식호르몬 축, 특히 신경내분비 회로의 노화에 대한 정보들과 노화 연구에 유용한 설치류 모델들을 소개하고자 한다. 암컷 설치류의 중년(middle age, 생후 $8{\sim}12$개월)은 인간의 폐경기 진입 직전에 해당되는 시기로, 이 시기에 시상하부 GnRH 분비의 맥동성과 급등(surge)이 현저히 지연되기 시작하고, 곧 이어 뇌하수체 LH 분비의 맥동성과 급등이 역시 약화 내지 지연된다. 노화와 관련된 GnRH-LH 신경내분비 활성의 결손은 시상하부 GnRH 뉴런의 활성을 조절하는 여러 자극(예, glutamate)들의 변화와 밀접하게 연관되어 있다. 많은 연구자들이 이러한 '시상하부 결손(hypothalamic defects)'이 생식 노화의 주된 요인임을 지지하지만, inhibin과 같은 난소 요인의 변화 역시 생식 노화의 유도와 관련된 것으로 보인다. 생식 노화를 연구함에 유용한 몇몇 설치류 모델이 있다; FSH 수용체 녹아웃(follitropin receptor knockout; FORKO) 생쥐 모델의 경우는 homozygous(null) 뿐만 아니라 heterozygous(haploinsufficient) 상태도 노화에 따른 난자/난포의 고갈을 나타낸다. Dioxin/aryl hydrocarbon 수용체 녹아웃 (AhRKO) 생쥐 모델도 유사한 상태를 유발할 수 있다. 생식 노화의 기작에 관한 연구는 삶의 질을 높이기 위한 수단들, 예를 들어 호르몬 보충요법(HRT)의 장단점을 평가하고 안전성을 제고하는데 도움이 될 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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