한국식물병리학회 2004년도 The 2004 KSPP Annual Meeting & International Symposium
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pp.65-67
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2004
During initial interactions of bacteria with their host plants, most plants recognize the bacterial infections and repel the pathogen by plant defense mechanism. The most active plant defense mechanism is the hypersensitive response (HR) which is the localized induced cell death in the plant at the site of infection by a pathogen. A primary locus induced in gram-negative phytopathogenic bacteria during this initial interaction is the Hrp locus. The Hrp locus is composed of a cluster of genes that encodes the bacteral Type 111 machinery that is involved in the secretion and translocation of effector proteins to the plant cell. DNA sequence analysis of hrp gene in phytopathogenic bacteria has revealed a Hrp pathogenicity is]and (PAI) with a tripartite mosaic structure. For many gram-negative pathogenic bacteria, colonization of the host's tissue depends on the type III protein secretion system (TTSS) which secrets and translocates effector proteins into the host cell. Effectors can be divided into several groups including broad host range effectors, host specific effectors, disease specific effectors, and effectors inhibit host defenses. The role of effectors carrying LRR domain in plant resistance is very elusive since most known plant resistance gene carry LRR domain. Host specific effectors such as several avr gene products are involved in the determination of the host specificity. Almost all the phytopathogenic Xanthomonas spp. carry avrBs1, avrBs2, and avrBs3 homologs. Some strains of X. oryzae pv. oryzae carry more than 10 copies of avrBs3 homologs. However, the functions of all those avr genes in host specificity are not characterized well.;
Ground cherry (Physalis pubescens) is the most prominent species in the Solanaceae family due to its nutritional content, and prospective health advantages. It is grown all over the world, but notably in northern China. In 2019 firstly bacterial leaf spot (BLS) disease was identified on P. pubescens in China that caused by both BLS pathogens Xanthomonas euvesicatoria pv. euvesicatoria resulted in substantial monetary losses. Here, we compared whole genome sequences of X. euvesicatoria to other Xanthomonas species that caused BLS diseases for high similarities and dissimilarities in genomic sequences through average nucleotide identity (ANI) and BLAST comparison. Molecular techniques and phylogenetic trees were adopted to detect X. euvesicatoria on P. pubescens using recQ, hrpB1, and hrpB2 genes for efficient and precise identification. For rapid molecular detection of X. euvesicatoria, loop-mediated isothermal amplification, polymerase chain reaction (PCR), and real-time PCR techniques were used. Whole genome comparison results showed that the genome of X. euvesicatoria was more closely relative to X. perforans than X. vesicatoria, and X. gardneri with 98%, 84%, and 86% ANI, respectively. All infected leaves of P. pubescens found positive amplification, and negative controls did not show amplification. The findings of evolutionary history revealed that isolated strains XeC10RQ, XeH9RQ, XeA10RQ, and XeB10RQ that originated from China were closely relative and highly homologous to the X. euvesicatoria. This research provides information to researchers on genomic variation in BLS pathogens, and further molecular evolution and identification of X. euvesicatoria using the unique target recQ gene through advance molecular approaches.
본 논문은 벼 흰 잎마름병균인 Xanthomonas oryzae pv. oryzae(Xoo)의 병원성 유전자의 분자유전학적 연구현황을 기술하고자 한다. 또한 국내 고유 벼 흰 잎마름병균 KACC10331의 유전체해독 정보를 기반으로 다른 Xanthomonas의 유전체와 비교 분석함으로써, Xoo의 주요 병원성 유전자의 분자구조를 구명하고자 한다. 이를 통해 Xoo 고유 병원성 유전자 탐색 및 기능 해석을 위한 기초자료를 제공하는데 목적이 있다. Xoo 유전체에는 5개 과(family)에 속하는 9 type의 Insertion sequence(IS)가 611 copy로 존재하고 있으며, 주로 병원성 관련 유전자군 주위에 많이 분포하고 있는 것으로 나타났다. 현재까지 연구가 수행된 주요 병원성 관련 유전자인 hypersensitive response and pathogenicity (hrp) 유전자, extracellular polysaccharide (EPS) 유전자, extracellular enzyme 유전자, lipopolysaccharides (LPS) 유전자, 그리고 avilulence 유전자의 분자유전학적 연구현황을 기술하였다.
Two-component systems (TCSs) are critical to the pathogenesis of Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo). We mutated 55 of 62 genes annotated as responsive regulators (RRs) of TCSs in the genome of Xoo strain PXO99A and identified 9 genes involved in Xoo virulence. Four (rpfG, hrpG, stoS, and detR) of the 9 genes were previously reported as key regulators of Xoo virulence and the other 5 have not been characterized. Lesion lengths on rice leaves inoculated with the mutants were shorter than those of the wild type and were significantly restored with gene complementation. The population density of the 5 mutants in planta was smaller than that of PXO99A at 14 days after inoculation, but the growth curves of the mutants in rich medium were similar to those of the wild type. These newly reported RR genes will facilitate studies on the function of TCSs and of the integrated regulation of TCSs for Xoo pathogenesis.
Pseudomonas syringae pv. tabaci 11528은 담배를 숙주로 하여 wildfire disease를 일으키는 식물 병원성 세균이다. P. syringae pv. tabaci psyR deletion mutant를 이용하여 swarming motility, tabtoxin 생산능, siderophore 생산능, AHL 생산능 등의 phenotypic test를 수행하였다. psyR deletion mutant는 wild-type 균주보다 swarming motility가 증가하였고, tabtoxin 생산 또한 증가하였다. 하지만 siderophore와 AHL 생산능은 감소하였고 virulence 또한 지연되었다. 이러한 결과로 PsyR이 QS regulator로 작용한다는 사실과 더불어 병원성 유전자의 조절에도 관여한다는 것을 확인하였다. PsyR이 각각의 병원성 유전자의 발현을 조절하는 regulator들에게 미치는 영향을 전사단계에서 확인하기 위해 fur, gacA, psyI, prhI, prhA, hrpR, hrpA 유전자들을 정량적 real-time PCR (qRT-PCR) 방법으로 확인하였다. 또한 PsyR에 의한 병원성 유전자 조절이 DNA상에 직접적으로 결합하여 일어나는 것인지 아니면 다른 경로를 통해 간접적으로 일어나는 것인지를 확인할 필요가 있어 정제한 PsyR 단백질과 병원성 관련 유전자들의 upstream region 서열을 이용하여 electrophoretic mobility shift assay (EMSA)를 수행한 결과 본 연구에서 선정한 병원성 관련 유전자들이 PsyR에 의해 직접적으로 조절되지는 않는다는 사실을 밝혔다.
Ralstonia solancearum infects many solanaceous plants, however race 3 infects only potato and tomato weakly. To identify genes responsible for race specificity of R. solanacearum, we mobilized genomic library of LSD2029 (race 3) into LSD341 (race 1) and inoculated 1,000 transconjugants into hot pepper. One transconjugant that did not induce wilt symptom in hot pepper was isolated. We found that a cosmid clone, pRSl, conferred avirulence to LSD341. By deletion and mutational analyses of pRSl, we found the 0.9-kb PstI/Hindlll fragment carries avirulence functions. We sequenced the fragment and identified one possible open reading frame, a rsal gene, possibly encoding 110 amino acids. The rsal was preceded with a plant-inducible promoter (PIP) box, indicating that the gene might be regulated by HrpB. Interestingly, the promoter region of the rsal homolog in the strain GM11000 (race 1) did not have the PIP box. Rsal did not show any significant homologies with proteins in the database, indicating th e protein is different from the previously reported avirulence proteins. When we mutated the rsal gene by marker-exchange in LSD2029, the mutant was less virulent in potato.
In this study, we conducted whole-genome sequencing with six species of Pectobacterium composed of seven strains, JR1.1, BP201601.1, JK2.1, HNP201719, MYP201603, PZ1, and HC, for the analysis of pathogenic factors associated with the genome of Pectobacterium. The genome sizes ranged from 4,724,337 bp to 5,208,618 bp, with the GC content ranging from 50.4% to 52.3%. The average nucleotide identity was 98% among the two Pectobacterium species and ranged from 88% to 96% among the remaining six species. A similar distribution was observed in the carbohydrate-active enzymes (CAZymes) class and extracellular plant cell wall degrading enzymes (PCWDEs). HC showed the highest number of enzymes in CAZymes and the lowest number in the extracellular PCWDEs. Six strains showed four subsets, and HC demonstrated three subsets, except hasDEF, in type I secretion system, while the type II secretion system of the seven strains was conserved. Components of human pathogens, such as Salmonella pathogenicity island 1 type type III secretion system (T3SS) and effectors, were identified in PZ1; T3SSa was not identified in HC. Two putative effectors, including hrpK, were identified in seven strains along with dspEF. We also identified 13 structural genes, six regulator genes, and five accessory genes in the type VI secretion system (T6SS) gene cluster of six Pectobacterium species, along with the loss of T6SS in PZ1. HC had two subsets, and JK2.1 had three subsets of T6SS. With the GxSxG motif, the phospholipase A gene did locate among tssID and duf4123 genes in the T6SSa cluster of all strains. Important domains were identified in the vgrG/paar islands, including duf4123, duf2235, vrr-nuc, and duf3396.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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