Agar was extracted from Gelidium amansii, which was harvested at the shores of Jeju Island in South Korea. As a unique solvent, the ability of dimethyl sulfoxide (DMSO) was used to separate agarose from agar by removing agaropectine and quality of the resultant agarose was characterized for chromatography purposes. Agar sample was agitated by motor-driven stirrer with DMSO in a water bath (at 70$^{\circ}C$ for 2 h) and centrifuged (3,000 rpm for 20 min). Resultant upper agarose layer was gelled, washed, dried and milled. The quality of agarose was evaluated by the analysis of proximate chemical composition, sulfate content, gelling strength and DNA migration. In this study, the separated agarose showed low sulfate amount (0.28%) and showed high gel strength (1190 g ${\cdot}\;cm^{-2}$). The resolution power and the ligase activities gave clear picture about the suitability of the present agarose for practical purposes.
국내 연안산 우뭇가사리로부터 고강도 한천을 제조하기 위하여 수산화나트륨을 여러 가지 조건에서 처리한 우뭇가사리로부터 한천을 제조하고 한천의 수율 및 이화학적 특성을 조사하였다. 수산화나트륨의 최적 처리조건을 찾기 위하여 처리농도, 온도 그리고 시간 등 다양한 조건을 검토하여 우뭇가사리로부터 고강도의 한천을 제조할 수 있는 방법을 개발하였다. 수산화나트륨을 0, 2, 4, 6 그리고 $8\%$를 $80^{\circ}C$에서 3시간 처리한 우뭇가사리로부터 추출한 한천의 수율 및 이화학적 특성을 검토한 결과, 수산화나트륨의 처리 농도는 $6\%$가 적당하였다. 수산화나트륨의 최적 처리 온도를 결정하기 위하여, 수산화나트륨의 처리농도를 $6\%$로 하고 40, 60,70, 80 그리고 $90^{\circ}C$에서 3시간 처리한 우뭇가사리로부터 추출한 한천의 수율 및 이화학적 특성을 검토한 결과, 수산화나트릅의 처리 온도는 $80^{\circ}C$가 적당하였다. 수산화나트륨의 처리시간을 결정하기 위하여, $6\%$의 수산화나트륨을 $80^{\circ}C$에서 2, 3 그리고 4시간 처리한 우뭇가사리로부터 추출한 한천의 수율 및 이화학적 특성을 검토한 결과, 수산화나트륨의 처리시간은 2시간이 적당하였다. 우뭇가사리로부터 고강도 한천을 제조하기 위한 수산화나트륨의 전처리조건을 수산화나트륨의 농도, 온도 그리고 시간별로 조사한 결과, 최적의 전처리 조건은 $6\%,\;80^{\circ}C$에서 2시간이 적절한 것으로 나타났다. 수산화나트륨을 처리하지 않은 우뭇가사리로부터 추출한 한천의 Gal는 $53.28\%$, An-Gal는 $4.24\%$였으며, 수산화나트륨을 처리한 우뭇가사리에서 추출한 한천의 경우, Gal는 $51.69\~52.96\%$, An-Gal는 $44.05\~46/10\%$로 수산화나트륨 처리로 인한 구성당의 조성은 큰 차이가 없었다.
본(本) 연구(硏究)에서는 한천(寒天)의 조단백질(粗蛋白質). 회분(灰分)의 제거방법(除去方法) 및 gel강도(强度)에 미치는 영향(影響)을 검토(檢討)하였다. 조단백질(粗蛋白質) 및 회분(灰分)의 제거방법(除去方法)으로서 Trichloroacetic acid(TCA) 와 Perchloric acid(PCA)의 첨가처리(添加處理) 및 수침법(水浸法)을 사용(使用) 하였으며 그 결과(結果)는 다음과 같다. 조단백질(粗蛋白質) 제거공정(除去工程)에서 단백질(蛋白質) 침전제(沈澱劑)로는 PCA 가 TCA보다 더 효율적(效率的)이었다. 0.01% PCA 첨가시(添加時) 조단백질(粗蛋白質) 함량(含量)은 4.0%에서 1.0%로 감소(減少)하였고, gel 강도(强度)는 원료한천(原料寒天) 220g/$cm^2$에 대하여 402g/$cm^2$로 증가(增加)하였다. 회분제거공정(灰分除去工程)을 12시간(時間) 수침상태(水浸狀態)로 진탕함으로서 회분(灰分)이 8.7%에서 2.7%로 감소(減少)하였고 gel강도(强度)는 원료한천(原料寒天) 22/$cm^2$에 대해 530g/$cm^2$로 증가(增加)하였다. 그러나 회분함량(灰分含量)의 변화(變化)가 3% 미만에서는 gel강도(强度)에 미치는 영향(影響)이 거의 없었다.
Agar로부터 agarose 제조 시 유기용매를 이용해서 황을 제거하는 방법이 일반적으로 많이 사용되어진다. 하지만 agar의 황을 가수 분해하는 효소를 사용할 경우 agarose 제조 시공정과정을 획기적으로 간소화할 수 있다. 따라서 arylsulfatase로 agaropectin에서 황 제거를 통해 agarose로 바꾸는 공정은 간단하고 높은 수율을 얻을 수 있기 때문에 agarose 생산에 효율적으로 적용할 수 있다. 본 연구에서는 arylsulfatase를 세포표면에 발현하는 효모생촉매를 이용하여 제조한 agarose의 황 함량과 gel 강도를 측정하였다. 처리한 효모(효)소의 농도가 증가할수록 증가된 탈황 반응에 의해 황함량이 줄어들었고, 특히 35 unit/mL의 효소 농도로 처리하였을 때 황 함량은 0.2%까지 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 황 함량을 가장 낮출 수 있는 최적 조건은 0.6% agar(Junsei) 용액에 효모 표층 arylsulfatase 35 unit/mL로 처리하고 $40^{\circ}C$에서 3시간 반응시켰을 때 였다. 또한 1.0% DNA 전기 영동용 agarose의 gel 강도는 효모 표층 arylsulfatase 처리로 제조된 agarose의 경우 $559.8{\pm}0.12$로 상업적 agarose의 gel 강도($880.6{\pm}0.15\;g/cm^2$와) 보다는 낮았다. 따라서 효모 S. cerevisiae의 세포 표면에서 발현된 재조합 arylsulfatase 효소를 이용하여 agar로부터 전기영동용 agarose의 생산 공정에 적용 가능함을 알 수 있었다.
국내산 한천원조(寒天原藻)로서 남해(南海), 완도(莞島), 여수(麗水)지역에서 수집한 꼬시레기에 대하여 전처리(前處理)방법에 따른 한천의 수율(收率)과 품질특성(品質特性)을 분석한 결과는 다음과 같다. 원조(原藻)의 전처리(前處理)과정에서 고온(高溫)알칼리 처리는 알칼리의 농도가 높을수록 수율(收率)이 증가하였으나 처리시간은 한시간이 최적(最適)이었다. 산(酸)처리에서는 산(酸)농도가 높을수록 또 처리시간이 길수록 수율(收率)이 증가하였다. 상온(常溫)알칼리 처리에서는 알칼리의 농도가 높을수록 또 처리시간이 길수록 수율(收率)이 약간씩 감소하였다. 한천(寒天)제품의 품질특성(品質特性)을 보면 전처리과정에 의하여 전질소, 조회분은 크게 감소하였다. 한천(寒天)제품의 제리강도(强度), 젤화능력(化能力), 젤화온도(化溫度), 점도(粘度)는 고온(高溫)에서 원조(原藻)의 알칼리처리조건이 강할수록 증가하는 경향이 있었으며 유황함량과 제리강도(强度)는 고도(高度)의 부(負)의 상관(相關)관계를 나타내었다. 원조(原藻)의 상온(常溫)알칼리처리는 처리조건에 따라 한천의 품질향상(品質向上)에 있어서 큰 차이가 없었으며 고온(高溫)알칼리처리와 유사한 효과(效果)를 나타내지 못하였다.
Agar was prepared from Gelidium amansii collected from Jeju Island, South Korea. This agar preparation has high gel strength and low sulfate content compared with G. amansii agar from Morocco. Accordingly, agarose was made from the Jeju agar through the consecutive refining processes of dimethyl sulfoxide (DMSO) extraction and ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA) washing. The physicochemical properties of the resulting agarose were compared with those from agarose prepared using only DMSO extraction. Consecutive DMSO extraction and EDTA washing more strongly affected the physicochemical properties of the agarose (purified agarose) compared with the use of DMSO extraction alone. These properties were similar to those of commercial agarose used for electrophoresis. In DNA electrophoresis, the separation and movement speed of the purified agarose were similar to those of the commercial agarose. In a $^{13}C$ NMR analysis, the purified agarose exhibited the same carbon peak as the commercial agarose. When observed under scanning electron microscopy, the agar had an even and smooth surface without irregularities or pores, and the purified agarose had a wide surface area with a large number of pores; the commercial agarose had an irregular surface that would allow the solvent to easily permeate. These results illustrate that the physicochemical properties of agarose prepared from DMSO extraction and EDTA washing were more effective than those observed after DMSO extraction alone; thus, these processes used in succession will be useful in agarose industries.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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