• 한국어병학회지
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• 제30권1호
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• pp.11-24
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• 2017

The current investigation dealing with the causative agent of mass mortalities in cultured Oreochromis niloticus. The diseased fish showed external hemorrhage, unilateral and bilateral eye opacity, ended by blindness and fish death. The postmortem lesions revealed congested friable kidney and spleen, and liver has yellow nodules. Obtained isolates were identified as Aeromonas hydrophila (the causative agent of Motile Aeromonas Septicemia) and found to be highly pathogenic as they contained hemolysin virulence gene causing mortality reached to 100 and 70% in intraperitoneal and intramuscular infection. The prevalence of MAS was 80% among the surveyed O. niloticus. Blood and serum were collected from naturally diseased, intraperitoneal and intramuscular injected O. niloticus for hematological and biochemical examination. Similarly, gills, musculature, kidney, liver and spleen were collected for histopathological evaluation, and micropathomorphological analysis of spleen was done. Macrocytic hypochromic anemia was recorded in the intraperitoneal infection. Serum protein, albumin and globulin were decrease only in naturally diseased fish. Leucocytosis with heterophilia and lymphocytosis were observed in naturally diseased and intraperitoneal infected fish. There were severe degenerative changes and hemorrhagic necrosis in the examined tissues which were more obvious in intraperitoneal than intramuscular infection. Activation and proliferation of melanocytes macrophages centers with severe hemosiderosis were recorded in spleen of naturally diseased and experimentally infected fish.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제19권11호
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• pp.1456-1463
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• 2009

Vibrio parahaemolyticus possessing urease-positive property is relatively rare, but such strains consistently exhibit the TDH-related hemolysin (TRH) gene. In this study, we examined the effects of incubation temperature on urease activity expression, using the TH3996 and AQ4673 strains where the enzyme activity is known to be temperature-dependent and -independent, respectively. In the TH3996 strain, $\beta$-galactosidase activity was 4.4-fold lower after $30^{\circ}C$ cultivation than after $37^{\circ}C$ in a ureR-lacZ fusion strain, but temperature dependency was not found in ureD- or nikA-lacZ fusion strains. However, ureR-, ureD-, and nikA-lacZ fusions of the AQ4673 strain was not influenced by incubation temperature. We compared the promoter sequences of ureR between the above two strains. Intriguingly, we detected mismatches of two nucleotides between the two strains located at positions -66 and -108 upstream of the methionine initiation codon for UreR. Additionally, urease activity was not affected by culture temperature at either $30^{\circ}C$ or $37^{\circ}C$ by allelic introduction of the AQ4673 ureR gene into the TH3996 ureR deletion mutant. Taken together, our study demonstrates that the transcriptional factor UreR is involved in the temperature dependency of urease activity, and two nucleotides within the ureR promoter region are of particular importance for the urease activity dependency of V. parahaemolyticus.

• 한국식품영양과학회지
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• 제29권6호
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• pp.1016-1024
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• 2000

본 연구는 식품에 존재하는 L. monocytogenes균의 신속한 검출방법을 조사하기 위하여 hlyA 유전자 primer 를 사용하여 PCR 기법으로 행하였으며 primer의 특이성과 PCR의 민감성, L. monocytogenes균의 검출을 위한 최적조건 및 우유 및 소고기의 적용시험을 각각 조사하였다 PCR 특이성 실험에서는 L. monocytogenes 20주에 대한 PCR 분석 결과 모두 713 bp 크기의 PCR products를 확인할 수 있었고, Listeria spp. 및 다른 세균에서는 동일한 Poducts가 증폭되지 않으므로써 hiyA based primer의 L. monocytogenes에 대한 PCR 특이성이 관찰되었다. PCR 분석법의 민감도는 L. monocytogenes ATCC 19111의 1 pg DNA와 2.4$\times$$10^4$cell 수준에서 target DNA가 증폭되었다. Tailing의 제거와 민감도를 높이기 위하여 PCR cycle 수에 따른 최적조건을 조사한 결과 20~30 cycle 정도의 PCR clcyle 수가 좋은 것으로 나타났으며 민감도는 20 cycle PCR amplification을 행한 후 한번 더 10~15 cycle로 처리했을 때 훨씬 증가하였다. 한편, 우유(10 mL)와 쇠고기 절편(10g)에 0~$10^{7}$ CFU/mL 또는 g 수준으로 L. monocytogenes를 신속하게 검출하기 위하여 PCR을 적용한 결과, 우유시료에서는 2번 PCR을 반복함으로써 2 cells까지 검출할 수 있었고, 쇠고기 절편은 LEB로 35$^{\circ}C$에서 24시간 증균하여 PCR합으로써 2.6$\times$$10^2$cell가지 검출할 수 있었다.

• 생명과학회지
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• 제34권2호
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• pp.79-85
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• 2024

SlyA는 Salmonella와 같은 장내세균과(Enterobacteriaceae)에 속하는 E. coli에서 용혈소(HlyE)의 발현을 조절하는 전사 조절인자로 알려져 있다. 그러나 Salmonella에는 slyA 유전자가 있지만 hlyE 유전자는 없다. Salmonella에서 SlyA의 역할을 탐구하기 위해 slyA 유전자가 결실된 돌연변이주를 사용하였다. S. Typhimurium CK295 (ΔslyA)는 allelic exchange 방법으로 제작되었다. 야생형 균주와 CK295 균주의 비교시험에서 생육 특성, 운동성, 총 단백질 분석, 분비 단백질 분석 등에서 특별한 차이가 발견되지 않았다. CK295 균주는 야생형에 비해 생물막을 약간 적게 생성하는 패턴을 보였다. 흥미롭게도, 대식세포에서의 생존능력을 비교한 결과, CK295 균주는 야생형에 비해 생존능력이 60% 감소하는 것으로 나타났다. 마우스의 독성을 테스트하기 위해 6주령 BALB/c 마우스에 경구 투여한 후 사망률을 측정하였다. 그 결과, BALB/c에서 CK295 (ΔslyA)의 LD₅₀ 값이 야생형 S. Typhimurium 𝜒3339의 값보다 100배 이상 높게 나타났다. 종합적으로, SlyA는 살모넬라균의 in vivo 생존에 관여하는 독성 인자를 코딩하는 유전자의 발현을 조절하는 것으로 추정된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권12호
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• pp.2043-2048
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• 2015

Bacillus thuringiensis microbial insecticide products have been applied worldwide. Although a few cases of B. thuringiensis foodborne illness have been reported, little is known about the toxigenic properties of B. thuringiensis isolates. The aims of this study were to estimate the pathogenic potential of B. thuringiensis selected from microbial insecticide products, based on its possession of toxin genes and production of enterotoxins. Fifty-two B. thuringiensis strains selected from four kinds of microbial insecticide products were analyzed. PCR assay for detection of toxin genes and immunoassay for detection of enterotoxins were performed. The hemolysin BL complex as a major enterotoxin was produced by 17 (32.7%), whereas the non-hemolytic enterotoxin complex was detected in 1 (1.9%) of 52 B. thuringiensis strains. However, cytK, entFM, and ces genes were not detected in any of the tested B. thuringiensis strains. The potential risk of food poisoning by B. thuringiensis along with concerns over B. thuringiensis microbial insecticide products has gained attention recently. Thus, microbial insecticide products based on B. thuringiensis should be carefully controlled.

• 한국식품영양학회지
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• 제33권2호
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• pp.142-148
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• 2020

The purpose of this study was to investigate the prevalence, toxin gene profiles, and enterotoxin producing ability of Bacillus cereus isolated from environment-friendly vegetables and good agricultural practices (GAP) vegetables. A total of 49 vegetables including 40 environment-friendly vegetables and 9 GAP vegetables were tested. The Vitek 2 system was used to identify B. cereus and the PCR was used to detect 6 toxin genes, respectively. B. cereus was detected in 34 (69.3%) of 49 vegetables and the prevalence of B. cereus in GAP vegetables (44.4%) was lower than in the environment-friendly vegetables (75.0%). The detection rates of entFM, nheA, hblC, and cytK enterotoxin genes, respectively, among all isolates were 100%, 97.0%, 88.2%, and 73.5%, respectively. All of the isolates had at least one or more enterotoxin gene and 20 isolates (58.8%) had hemolysin BL enterotoxin producing ability. The risk of food poisoning from the environment-friendly vegetables and the GAP vegetables has been shown as constant. Thus, it is necessary to expand the supply of GAP vegetables showing lower B. cereus contamination than the environment-friendly vegetables. The characteristics of the environment-friendly vegetables and the GAP vegetables that must be consumed after cleaning should be disseminated to consumers regarding food poisoning prevention.

• 생명과학회지
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• 제17권3호통권83호
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• pp.386-395
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• 2007

본 연구는 1999년에서 2001년도 걸쳐서 3년간 국내에서 분리된 환자유래 장염비브리오 18균주와 일본 후쿠오카 지역에서 2002년도에 환자에서 분리한 장염비브리오 9균주 등 총 27균주에 대하여 toxR 유전자의 검출, 혈청형별 검사, 약제내성의 양상, tdh, trh1 및 trh2 유전자의 보유상태 및 urease 생성성을 살펴보고, 혈청형 O3:K6 균주에 대하여 TDH의 생성성 검사, tdh 양성균주의 RFLP 형별, ORF 8의 분포, PFGE법과 RAPD법을 실시하였으며 결과는 다음과 같다. 1. 한국 및 일본의 환자유래 균주 대부분에서 urease음성이었으며, toxR 유전자로 확인 동정하였고 혈청형의 분포는 국내 분리 주의 O3:K6, O4:K9, O6:K46, O3:K57, O5:Kl5와 일본 분리주의 O3:K6, O1:K38, O4:K68, O4:Kl2의 혈청형으로 나타났다. 2. 항생제 감수성 시험에서는 vancomycin과 oxacillin은 27균주 (100%), penicillin은 26균주 (96.3%)로 높은 내성을 나타내었고, 14균주 (51.9%)가 4가지 이상의 항생제에 다제내성을 나타내었다. 항생제의 내성양상은 6종류로 혈청형에 관계없이 vancomycin, oxacillin, penicillin에 내성을 나타내는 V형이 15균주 (55.6%)로 가장 많이 나타났다. 3. tdh 유전자는 26균주가 PCR법과 DNA probe hybridization법의 결과에서 양성으로 나타났으며, urease양성이었던 일본 환자유래 혈청형 O3:K6 1균주만이 tdh유전자 음성, trh2 유전자 양성을 나타냈다. 혈청형 O3:K6의 TDH 생성성역가는 전 균주가 256배에서 2,048배 정도로 나타났으며, RFLP 양상은 모든 균주가 11.5 kb와 4.3 kb에 tdh 유전자를 보유하고 있었다. 또한 혈청형 O3:K6 균주들은 RAPD법과 PFGE법으로 유전자형별을 비교 검토한 결과 8형으로 거의동일한 유전자형별의 결과를 나타내었다. 4. ORF 8의 분포는 혈청형 O3:K6 전 균주에서 양성이었고, 특히 혈청형 O6:K46 4균주 모두에서 ORF 8 양성을 나타내어 새롭게 나타난 유행균주일 가능성을 시사 하였다. 따라서 ORF 8 유전자의 검출은 범세계적으로 유행하는 균주들을 동정하는데 있어 genetic marker로서 매우 유용한 것으로 사료된다.

• KSBB Journal
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• 제18권6호
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• pp.522-528
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• 2003

본 연구는 식중독 환자로부터 분리한 장염비브리오균 120 균주를 세균학적 특성시험, 항균제 감수성 여부, 독소 유전자와 독소조절유전자의 검출 및 보유 여부를 PCR, RPLA 로 시험하였으며, 각 지역간의 분리 세균을 GS-PCR, PFGE 시험으로 병원체 상관 관계를 분석한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. 장염비브리오균은 0%의 NaCl 농도에서는 성장을 보이지 않았고, 8% NaCl이 첨가된 농도에서는 성장을 보였다. 국내 설사환자의 장염비브리오균의 O, K 혈청형은 17가지로 나타났으며, 이 중 O3:K6형이 68.3%로 가장 많았다. Ampicillin 등 18가지 항균제 시험에서 Ampicillin, Ticacillin에 높은 내성을 보였으며, Ampicillin, Ticacillin, Vancomycin에 동시 내성을 나타낸 경우가 52.5%로 나타났다. 독소조절 유전자 toxR은 PCR시험에서 시험균주 모두 368bp 크기의 유전자를 가지고 있었으며 장염 비브리오균의 조기진단에 유용한 것으로 확인되었고, 독소유전자 tdh는 120균주 중 109 균주만이 199bp 크기의 유전자를 보유하고 11균주가 음성이었다. trh 독소 유전자를 보유한 균주는 시험균주 중 3 균주만이 250bp 크기의 유전자를 보유하고 있었으며, tdh, trh 유전자를 동시에 가지고 있는 균주는 3균주로 이 균주의 TDH 독소 생성능은 x16 정도로 독소 생성능이 미약했다. 독소생성 Kanagawa 시험에서 120균주 중 107균주가 양성반응 을 나타내었으며, Kanagawa 양성반응을 보인 균주은 모두 tdh 유전자를 보유하고 있었다. Group Specific-PCR에서 최근에 유행을 일으키는 O3:K6 혈청형의 유연관계를 찾는데 유용한 것으로 나타났다. 조절유전자 toxRS 염기서열을 분석한 결과 같은 혈청형이라도 3균주는 7개의 염기서열 차이를 나타내었으며, 이는 현재 유행을 일으키는 균주와는 다른 균주임을 확인하였다. PFGE로 보다 더 세분화하여 혈청관계를 분류할 수 있었으며, 식중독 환자 유래 장염비브리오균은 3가지 type으로 나타났으며, 이들 균주 사이에는 상호 밀접한 상관관계를 나타내었다. 따라서 PFGE 기법으로 얻어진 결과는 분자 역학적으로 유용한 도구로 사용될 수 있음을 확인하였다.