• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제17권3호
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• pp.1519-1529
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• 2016

Background: Matrix metalloproteinase -2 (gelatinase-A, Mr 72,000 type IV collagenase, MMP-2) and -9 (gelatinase-B, Mr 92,000 type IV collagenase, MMP-9) are key molecules that play roles in tumor growth, invasion, tissue remodeling, metastasis and stem-cell regulation by digesting extracellular matrix barriers. MMP-2 and -9 are well known to impact on solid cancer susceptibility, whereas, in hematological malignancies, a paucity of data is available to resolve the function of these regulatory molecules in bone marrow mononuclear cells (BM-MNCs) and stromal cells of myelodysplastic syndrome (MDS) and acute myeloid leukemia (AML). Objectives: The present study aimed to investigate mRNA expression and gelatinase A and B secretion from BM-MNCs in vitro and genotypic associations of MMP-2 (-1306 C/T; rs243865), MMP-9 (-1562 C/T; rs3918242), tissue inhibitor of metalloproteinase -1 (TIMP-1) (372T/C; rs4898, Exon 5) and TIMP-2 (-418G/C; rs8179090) in MDS and AML. Results: The study covered cases of confirmed MDS (n=50), AML (n=32) and healthy controls (n=110). MMP-9 mRNA expression revealed 2 fold increased expression in MDS-RAEB II and 2.5 fold in AML M-4 (60-70% blasts). Secretion of gelatinase-B also revealed the MMP-9 mRNA expression and ELISA data also supported these data. We noted that those patients having more blast crises presented with more secretion of MMP-9 and its mRNA expression. In contrast MMP-9 (-1562 C/T) showed significant polymorphic associations in MDS (p<0.02) and AML (p<0.02). MMP-9 mRNA expression of C/T and T/T genotypes were 1.5 and 2.5 fold increased in MDS and AML respectively. In AML, MMP-2 C/T and T/T genotypes showed 2.0 fold mRNA expression. Only MMP-9 (-1306 C/T) showed significant 4 fold (p<0.001) increased risk with chemical and x-ray exposed MDS, while tobacco and cigarette smokers have 3 fold (p<0.04) risk in AML. Conclusions: In view of our results, MMP-9 revealed synergistic secretion and expression in blast crises of MDS and AML with 'gene' polymorphic effects and is significantly associated with increased risk with tobacco, cigarette and environmental exposure. Release and secretion of these enzymes may influence hematopoietic cell behavior and may be important in the clinical point of view. It may offer valuable tools for diagnosis and prognosis, as well as possible targets for the treatments.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제29권2호
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• pp.69-73
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• 2005

The hematopoietic growth factor erythropoietin (EPO) is required for the maintenance, proliferation, and differentiation of the stem cells that produce erythrocytes. To analyse the biological activity of the recombinant human EPO (rec-hEPO), we have cloned the EPO cDNA and genomic DNA and produced rec-hEPO in the CHO cell lines. The growth and differentiation of EPO-dependent human leukemic cell line (F36E) were used to measure cytokine dependency and in vitro bioactivity of rec-hEPO. MIT assay values were increased by survival of F36E cells at 24h or 72h. The hematocrit and RBC values were increased by subcutaneous injection of 20 IU (in mice) and 100IU(in rats) rec-hEPO. Hematocrit values remarkably increased at $13.2\%$ (in mice) and $12.2\%$ (in rats). The pharmacokinetic behavior with injection of 6 IU of rec-hEPO remained detectable after 24 h in all mice tested. The highest peat appeared at 2h after injection. The long half-life of rec-hEPO is likely to confer clinical advantages by allowing less frequent dosing in patients treated for anemia. These data demonstratethat ree-hEPO produced in this study has a potent activity in vivo and in vitro. The results also suggest that biological activity of ree-hEPO could be remarkably enhanced by genetic engineering that affects the potential activity, including mutants with added oligosaccharide chain and designed to produce EPO-EPO fusion protein.

• 한국가금학회지
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• 제36권2호
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• pp.177-186
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• 2009

형질전환 동물에 있어서 외래 유전자의 조절되지 않은 과다 발현은 생리적인 부작용이나 독성을 나타내게 된다. 본 연구에서는 이러한 문제를 해결하기 위하여 외래 유전자 발현 조절 system인 tetracycline-inducible expression system(Tet system)을 도입하였다. 그러나 종래의 Tet system을 이용한 유전자 발현 조절은 system 자체의 구성 요소로 인한 미미한 leaky 현상 때문에 완벽하게 이루어지지 않는다. 본 연구에서는 보다 완벽한 외래 유전자의 발현 조절 system을 구축하기 위하여 rtTA 대신 진일보한 형태의 $rtTA2^SM2$를 도입하고 TRE 부분을 TRE-tight로 대체하였다. 확립된 retrovirus vector system을 이용하여 다양한 표적세포와 형질전환 닭으로부터 혈소판 생산의 일차적인 조절자이며, 조혈간세포의 생존과 증식에 있어서 매우 중요한 역할을 하는 human thrombopoietin(hTPO)를 생산하고자 하였다. In vitro 상의 연구에서, CEF 세포에서 발현되는 hTPO가 가장 높은 발현량과 발현 유도율을 나타내었으며, 상업적으로 판매되고 있는 hTPO나 다른 표적세포에서 생산된 hTPO에 비해 생물학적 활성이 가장 높은 것으로 확인되었다. 고농도로 농축한 재조합 retrovirus를 stage X단계의 계란의 배반엽 층에 미세주입하여 대리 난각 방법으로 배양한 결과, 미세주입한 138개의 계란 중 21일 후에 15개의 계란에서 병아리가 부화하였으며, 그 중 8마리가 형질전환 개체로 확인되었다. 이 형질전환 닭은 사료 1 g 당 0.5 mg의 doxycycline을 첨가하여 2주간 식이하였으며, 그 후 혈액을 채취하여 hTPO 농도를 측정한 결과 200ng/mL로 확인되었다. 또한 형질전환 개체 중 수컷의 정자에서 hTPO 유전자의 존재를 확인함으로써 germLine transmission의 가능성을 입증하였다. 이상의 연구 결과는 사람의 cytokine 단백질의 대량생산을 위한 생체반응기로서의 형질전환 닭의 생산 가능성을 제시한 데 의의가 있다.

• IMMUNE NETWORK
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• 제5권3호
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• pp.179-185
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• 2005

Background: Psoriasis is a multifactorial autoimmune skin disease with a pathogenesis that has remained obscure. Recently, T cells bearing natural killer receptors (NKRs) were precisely and strongly targeted as new putative pathogenic immunocytes in psoriasis. Among NKRs, killer cell immunoglobulin-like receptor (KIR) is the major molecule recognizing HLA class I allotypes and might be closely related to psoriasis. Methods: To investigate the association of KIR genotype and patients with psoriasis in Korean, we defined the 14 KIR genotypes in 96 patients with psoriasis and 86 healthy controls using PCR-SSP methods. Results: The frequencies of KIR2DS4 and KIR3DL1 were significantly decreased in psoriasis compared with controls (RR=0.21, p<0.02). When patients were divided into two subgroups at the age of onset, type I (<30 years) and type II ($({\geq}30$ years) respectively, these phenomena were similarly observed independent of groups divided (type I: RR=0.26, p<0.005; type II: RR=0.14, p<0.0006). When the patients were divided into subgroups according to the age of onset and family history, the frequencies of KIR2DS4, KIR3DL1, and KIR2DS3 were significantly decreased in type I compared with type II psoriasis (3DL1, 2DS4: p<0.004; 2DS3: p<0.04) and were significantly decreased in psoriasis without family history compared to with family history (3DL1, 2DS4: p<0.007; 2DS3: p<0.05). The frequency of haplotype combination BB was significantly increased in psoriasis compared with controls (RR=2.74, p<0.009). Conclusion: These results suggest that KIR genotype is a factor for the occurrence and development of psoriasis and in future how combinations of HLA and KIR genes influence psoriasis needs to be defined.

• Laboratory Medicine Online
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• 제7권4호
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• pp.163-169
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• 2017

배경: 혈액은행 자동화 검사장비는 혈액은행 검사 결과의 질 향상에 도움이 될 것이다. 최근 자동화 장비 DAYMATE M이 개발되어, 이에 대한 성능을 검증하였다. 방법: 서울성모병원과 인천성모병원에서 수집한 300개의 혈액 검체를 가지고 ABO와 RhD 검사를 실시하였다. 또한, 336개의 검체를 이용해 항체선별검사(AST)를 진행하였고, 골수 이식을 받은 82명의 환자에 대해서도 동일한 검사를 진행하였다. DAYMATE M와 비교하기 위한 수동검사는 DS-SCREEING II (Bio-Rad Laboratories, Switzerland)와 Selectogen (Ortho-Clinical diagnostics Inc., USA)을 사용하였다. 결과: 전체 300개의 혈액 검체는 A형 87개, B형 73개, O형 79개, 그리고 AB형 61개로 이뤄져 있다. DAYMATE M과의 일치율은 혈구형 검사에서는 99.9%, 혈청형 검사에서는 97.0%였다. 혈구형 검사에서 불일치한 검체 1개는 수기법에서는 AB형으로 나왔지만 DAYMATE M에서는 B형으로 나왔고, 혈청형 검사에서 나온 불일치 결과 6개는 모두 A형 검체가 DAYMATE에서 anti-B가 검출되지 않은 경우였다. 336개의 항체선별검사의 일치율은 93.2%였다. 136개의 양성 검체 중 불일치 결과는 6개였다. 골수 이식을 받은 82명의 환자들을 대상으로 한 검사 결과, ABO 검사결과의 일치율은 92.2%였다. 6개의 불일치 결과 중 4개는 DAYMATE M에서만 공여자형으로 판독되었고, 나머지 2개는 수기법에서만 공여자형으로 판독되었다. 결론: 혈액은행 자동화 검사 장비 DAYMATE M은 ABO, RhD 검사, 항체선별검사에서 기존의 수기법과 높은 일치율을 보였고, 조혈모세포이식을 받은 환자를 대상으로 검사할 때에도 좋은 성능을 나타냈다.