Bacillus thuringiensis var. kurstaki의 내독소단백질을 섭취한 Helocoverpa assulta의 유충에서 각 조직의 표면구조변화를 주사전자현미경으로 조사하였다. Bt 내독소단백질은 조사된 모든 조직 표면에서 부식과 파괴현상을 유발시켰다. 이러한 결과들로 볼 때 독소분자들은 세포막에 대한 뚜렷한 특이성이 없이 독소에 노출된 모둔 종류의 세포막에 결합하는 것으로 보인다.
담배나방(Heliocoverpa assulta)와 파밤나방(Spodoptera exigua)유충에 대한 유기인계 살충제인 다이아지논과 담배의 산물인 니코틴의 영향을 조사하기 위하여 본 실험을 시행하였다. 다이아지논이 처리된 담배나방유충의 사망률은 파밤나방유충의 경우보다 훨씬 높았으며 니코틴 처리구에서는 이와 반대양상을 나타내었다. 담배나방유충 중장의 cytochrome P-450 monooxygenases (MFO) 활성은 다이아지논 처리구에 비해서 니코틴 처리구에서 더욱 높게 나타났다. 담배나방유충을 기주식물인 담배잎으로 사육하였을 때 다른 화합물과는 달리 대부분의 니코틴은 변화 없이 배설되었다.
본 연구는 비행중인 담배나방(Helicoverpa assulta (Guenee))성충의 혈림프내 지질과 탄수화물의 함량변화와 그들의 호르몬조절가능을 조사하기 위하여 수행되었다. 비행초기 몇분동안에 암수 모두 빠른 지질증가반응을 보였고, 약 2기간까지 증가된 수준이 유지되었다. 비행중 혈림프내 탄수화물농도는 거의 변화가 없었지만, 수컷에서는 비행후 10분 동안 약간의 농도증가가 있었다. 합성 지질동원호르몬(Lom-AKH-II), 당동원호르몬(Bld-HrTH), 담배나방 자신의 뇌-카디아카체 추출물들 모두 담배나방의 혈림프내 지질과 당함량을 높여주었는데, 지질이 당보다 훨씬 더 높게 나타났다. 이상의 결과로 주로 지질이 담배나방의 주 비행연료로 사용되고 혈림프내 지질함량은 지질동원호르몬의 조절을 받는 것으로 보여진다. 또한 담배나방에는 지질동원호르몬과 당동원 호르몬이 같이 있을 수 있으며, 이들 펩티드들의 구조는 Mass-AKH, Hez-HrTH, Lom-AkH-II, Pea-HrTH 등의 구조와 유사할 것이라고 유추되었다.
고추를 가해하는 담배나방(Helicoverpa assulta ($Guen\acute{e}e$))의 최적 방제 적기는 과실 내부로 침투하기 이전 시기인 알과 어린 유충으로 인식되고 있다. 본 연구는 담배나방의 이러한 감수성 발육시기를 대상으로 하는 효과적 생물적 방제 기술을 개발하는 데 목표를 두었다. 쌀좀알벌(Trichogramma evanescens Westwood)은 알기생봉으로 담배나방 알도 기생시키는 것이 본 연구를 통해 관찰되었다. 그람양성균인 토양 곤충병원세균(Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki)과 그람음성균인 곤충병원세균(Xenorhabdus nematophila ANU101)은 어린 담배나방 유충을 대상으로 상호 협력적 병원력을 발휘하였다. 고추 포장의 담배나방 성충 발생은 페로몬트랩을 통해 모니터링하였다. 혼합 미생물제제는 접촉과 섭식 독성 분석 모두에서 쌀좀알벌의 유충 발육과 성충 생존에 영향을 주지 않는 것으로 판명되었다. 담배나방 성충 발생이 성페로몬 트랩으로 확인된 시기에 고추포장에 쌀좀알벌과 미생물제제의 혼합 처리가 실시되었다. 혼합 생물방제 처리는 화학농약과 비슷한 수준으로 과실의 피해를 현저히 감소시킨 반면, 단독 생물방제 처리는 효과가 현저히 낮았다. 아울러 본 연구는 쌀좀알벌의 형태적 및 유전적 특징을 분석했다.
담배와 고추의 주요해충인 담배나방 [Helicoverpa assulta(Guenee)]의 미생물적 방제법을 개발하기 위하여, 아직 국내에서 보고되지 않은 담배나방 핵다각체병 바이러스 담배나방 사충으로 부터 분리하고, 바이러스의 전자현미경 관찰 및 바이러스 DNA의 제한효소 분석 등을 통한 생화학적 특성을 조사하였다. 담배나방 핵다각체병 바이러스의 다각체는 구형에 가까운 20면체로서 크기는 평균 약 1.0$\mu$m 정도이고, 다수의 바이러스 입자가 다각체 단백질에 포매되어 있었다. 포매된 바이러스 입자는 한개의 봉상 nucleocapsid가 하나의 envelope 내에 매립된 형태의 SNPV(single embedded nuclear polyhedrosis virus)로, 형태는 전형적인 봉상으로서 그 크기는 약 $65nm\times300nm$ 였다. 또한 다각체 단백질의 SDS-PAGE 분석 결고, 분자량은 약 31 Kd이었으며, 담배나방 핵다각체병바이러스 DNA를 분리하여 EcoRI. HindIII 등 수종의 제한효소로 처리분석한 결과, 그 genome의 크기는 약 120Kb 정도였다. 본 핵다각체병바이러스는 담배나방 유충에만 병원성을 나타내 기주특이성을 보였다.
We examined the ultrastructure of eupyrene and apyrene spermatogenesis in the testis of Helicoverpa assulta (Lepidoptera: Noctuidae). The spermatogenesis was progressed near the fringe adjacent to the follicular layer of the testicular follicle, surrounding the apical cell concentrically. Eupyrene and apyrene were firstly distinguished at the telophase stage of the primary spermatocyte. Chromatin was evenly scattered in eupyrene nuclei, whereas it was lumped near the nuclear envelope in apyrene spermatogenesis. Then, the nucleus of eupyrene was transformed into two daughter nuclei by meiosis, while the nucleus of apyrene was divided into many micronuclei by irregular meiosis. After the meiosis was completed, a number of mitochondria in the cytoplasm of the early spermatids of the eupyrene and the apyrene were fused into one nebenkern. Also, as axial filament was formed due to the elongation of the spermatid, the nebenkern became splitted into mitochondrial derivatives. An acrosome precursor was present only in the eupyrene, attached to nuclear envelope.
담배나방 (Helicoverpa assulta)의 발생기간 중 존재하는 major haemolyruph protein (MHP)을 확인하였으며, 그 발생에 따른 변화상 및 물리화학적 특성을 조사하였다. MHP는 유충-용-성충의 발생단계에서 확인되었으며, 그 함량은 유충의 성장에 따라 증가하여 용기와 성충기 동안에도 높게 유지되고 용초기와 성충 초기에서 일시적인 감소를 보여, 총 혈림프 단백질의 농도 변화와 유사한 변화양상을 보였다. ammonium sulfate precipitation, gel filtration 그리고 ion exchange chromatography를 통해 정제한 MHP의 전기영동 분석 결과, 단일 구성소 단위 (69 kDa)가 hexamer를 이룬 분자량 414kDa의 glycolipoprotein (pI 5.9)인 것으로 확인되었다. MHP의 아미노산 조성에 있어서 18.27 mole % 의 tryptophan, 7.47 mole % 의 tyrosine and 6.51 mole % 의 phenylalanine이 검출되어 다른 곤충류의 저단백질들에 비해 비교적 높은 aromatic amino acid의함량을 보였다. 지방체, 장, 말피기관 단백질의 전기영동 및 이들 단백질과 anti-MHP간의 immunodiffusion test 결과 MHP는 지방체에 존재하고 있음이 확인되었다.
Effects of $\alpha$-difluoromethylornithine (DFMO) and $\alpha$-difluoromethylarginine (DFMA), inhibitors of polyamine syntheic enzymes (ornithine decarboxylase, arginine decarboxylase), on ovary were investigated during pupal-adult development of Helicoverpa assulta. Two inhibitors (DFMO, DFMA) showed definite inhibition effects on ovarian development. The inhibition effect on ovaries weight was more marked in DFMA-injection than that observed in DFMO-injection. Two inhibitors (DFMO, DFMA) gave rise to a peculiar decrease in ornithine decarboxylase (ODC) or arginine decarboxylase (ADC) activity in ovaries, 72 hrs (5-day old pupa) post injection. However, DFMO clearly exhibited supression of ODC activity after 96 hrs (6-day old pupa). In addition, two inhibitors (DFMO, DFMA) diminished putrescine content in the ovary. The spermidine level was slightly decreased by each injection of the inhibitors. However, two inhibitors (DFMO, DFMA) raised the spermine content at certain developmental stages in the ovary. Although the effect of DFMA was less severe, two inhibitors (DFMO, DFMA) caused not only an overall delay in ovarian development, but also abnormalities in cellular differentiation. Noted effects in the pupal ovary were the appearance of irregular nurse cells and partial destruction of follicle epidermal cells. Adult ovary showed rapid degradation of nurse cells, a reduction in the number of follicle epidermal cells and immature oocytes that had a low yolk content.
To elucidate the effect of elevated sublethal temperature ($33\pm1^{\circ}C$) on polyamine metabolism and oogenesis, we investigated alterations in the major polyamines and ornithine decarboxylase (ODC) and arginine decarboxylase (ADC), and ovarian development during the pupal-adult development of the tobacco budworm, Helicoverpa assulta. Ovaries ODC activity under the elevated sublethal temperature ($33\pm1^{\circ}C$) were lower than those of the optimal rearing temperature ($25\pm1^{\circ}C$). whereas ovarian ADC activity was consistently higher than the optimal rearing temperature ($25\pm1^{\circ}C$). When the gonads were exposed to the higher temperature, ovarian putrescine showed somewhat suppressed levels throughout development, indicating a relatively high correlationship with the alteration aspects in ODC or ADC activity under elevated sublethal temperature. A somewhat precocious ovary was observed in an early stage of development at $33\pm1^{\circ}C$, but cellular abnormalities occurred in this ovary. The ovary developed under elevated sublethal temperature was observed the inhibitional effect of polyamine metabolism and the abnormal development of ovariole, which seem to be related to the sterility.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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