This study was conducted to obtain basic information about the transformation of ginseng tissue, identification of opine compound and protein, and saponin production from ginseng callus transformed with Ti-plasmic of AW$.$obacterium tumefaiens C58. Ginseng crown gall callus induced by pTiC58 could be continuously cultured on the Phytohormone-free medium. The transformation was reconfirmed by the detection and identification of opine compound, from the gall callus. The transformed ginseng callus contained higher amounts of protein than normal callus and the protein pattern of transformed callus was quite different from that of normal callus. The xylose which is not detected in the normal callus and ginseng root was identified in gall callus. The saponin contents of gall callus of ginseng were three times higher than that of normal callus, and ginsenoside composition of the transformed callus was similar to that of the cultivated ginseng root, but quite different from that of normal callus.
Tissue culture of the roots of Panax ginseng was carried out to enhance the production of ginseng callus as well as to increase its contents of ginsenosides. A long cylinder type callus mass was formed when cultured IK callus by rotary shaking culture method, the growth ratio of the callus being 7.71 which was approximately 4 fold higher than those obtained by other culture methods. Ginsenosides $Rg_1$, Re and $Rb_1$ could be detected from the callus mass by TLC, however, their total contents were revealed to be approximately 9% compared to that of the fresh ginseng root equivalent by HPLC analysis,.
This study was undertaken to investigate the influence of kinetin and 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid on the rate of growth, the contents of RNA, DNA, and protein. And also the effect of plant growth regulator on isoperoxidases in callus derived from root (root-callus) and petiole (petiolecallus) was investigated. The rate of growth in petiole-callus was higher than the rootcallus at 0.1 mg/l kinetin and 1mgfl 2,4-D. At 1mgll kinetic, the rate of growth increased, but at high concentration the rate of growth decreased fast. The contents of RNA, DNA and protein also increased, but it did not coincide with the increase of the growth rate of callus. The isoperoxidases of callus grown at various amounts of 2,4-D and kinetic occurred in an almost fashion, but those of root-callus appeared different from those of petiole-callus.
These studies were designed to define the effects of temperature on the vegetative growth of the korean ginseng, the induction and growth of the ginseng callus and organ differentiation from the callus of ginseng. At the temperature over $25^{\circ}C$. the plant growth of ginseng was significantly decreased and the chlorophyll in the .central parts of leaflets was deteriorated. Induction and growth of the ginseng callus was best at $25^{\circ}C$. High temperature of $29^{\circ}C$ promoted the initiation of roots from callus tissue but the shoot was not initiated at the temperature over $25^{\circ}C$. Shoots initiation from the ginseng callus occurred at $21^{\circ}C$ or lower temperature.
Callus culture was initiated from explants of mature root tissues of ginseng (Panax ginseng C. A. Meyer) on MS medium enriched with 2, 4-D. The aging callus produced numerious embryoids in the same medium. Reculture of these embryoids in the media (1/2 MS or B5) supplemented with benzyladenine and gibberellic acid resulted in profuse plantlet regeneration.
Grown-gall tumor was induced from the infection of Panax ginseng C.A. Meyer by Agrobacterium tumefaciens C58 and the tumor calli were formed on the phytohormone free MS medium. The calli were friable and rough in appearance. Calli obtained from crown gall tumor were similar to and indistinguishable from each other. The tumor callus was quite different from normal callus. Tumor callus grew rapidly, whereas mal callus appeared late. The growth of tumor callus was better in the dark than in the light. In suspension culture, the fresh weight of tumor callus was twice as much in comparison with normal callus.
Panax ginseng root has been widely used as an important drug for thousands years in China, Korea and Japan. The main effective components of ginseng have been believed to be saponins. However, ginseng cultivation is very difficult and needs many years for growth. It has already been shown that Panax ginseng callus produces a considerable amount of the same kinds of saponins as in intact plants. Various culture conditions were examined for increased production of ginseng saponins by cell culture. The saponin contents and the growth rates in two cell lines of ginseng callus were compared in static and suspension cultures, rotary and reciprocal shaking cultures. It was shown that the growth rate in rotary shaking cultures of D5-B2K-B2K callus was the highest and ginseng saponin production was most effective in reciprocal cultures of D5-B2K-B2K callus. The saponin content per fresh weight of the culture was 1.03 times higher than that of the fresh ginseng root.
Cell growth and production of phenolic compounds by callus cultures of Panax ginseng C. A. Meyer were investigated under various phytohormones concentrations and inoculum size. The results indicated that the cell growt was improved by a MS medium supplemented with 2 mg/L of CPA. The maximum cell yield was obtained at inoculum size of 1 g/flasd. The production of phenolic compounds in the callus cultures was higher than those in the ginseng root. Especially, one cell line (20601) showed the highest content of phenolic compounds and antioxidant activity.
In the present study effects of 2,4-D and kinetin on the callus tissue growth of Korean ginseng(Panax ginseng C. A. Meyer), in relation to the synthesis of saponin were investigated. The saponin synthesis in the callus culture of ginseng root was enhanced by 2,4-D and kinetin. The total saponin content of callus grown on the optima growth conditions, that is, 5mg/l of 2,4-D and 2mg/l of kinetin, was about three times as high as that of the 6 year-old ginseng roots commercially used as herbs. The kinetin specifically increased the synthesis of protopanaxadiol group ginsenoside and decreased the syntehsis of protopanaxatriol gropu in callus cultures, while 2,4-D caused to an increase in the synthesis of protopanaxatriol group ginsenoside and decrease the synthesis of protopanaxadiol group.
In order to develop the biotechnological methods for the mass production of anticancer compounds from tissue culture of Panax ginseng C.A. Mayer, these studies were carried out for the selection of ginseng cell lines containing higher concentration of polyacetylene compounds and optimal condition for their biosynthesis. Panaxynol, one of ginseng polyacetylene, was not detected in any callus induced from ginseng superior cell lines cultured on MS medium supplemented with $\beta$-chlorophenoxy acetic acid (CPA). Panaxydol, another one of polyacetylene and anticancer compounds, were detected in calli of 5 cell lines by thin layer chromatogram and gas chromatogram. Among the 18 ginseng superior lines, the cell line 30201 has higher content of panaxydol. Especially, panaxydol was not detected in the callus induced from cell line 10301 which cultured on the medium containing CPA only, however, it was detected on the same callus cultured on mixed medium containing CAP 2 mg/L and BA 0.05 mg/L. SH medium was better than MS medium for ginseng callus growth and biosynthesis of polyacetylene, and also found that it was not effected by NAA and sucrose concentration in the culture medium.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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