본 연구에서는 갈락토오즈의 현장검사(point-of-care testing, POCT)를 위한 일회용 갈락토오즈 바이오센서 개발에 관해 논하고자 한다. Galactose oxidase(GAO)와 horseradish peroxidase(HRP) 두 효소를 0.05 M phosphate 완충용액에 용해시킨 후 스크린 프린팅(screen printing) 방법으로 제작한 전극위에 고정화하여 센서를 제작하였다. 이렇게 제작된 센서를 이용하여 $100{\mu}L$ 이하의 시료를 이용하여 갈락토오즈를 90초 이내에 측정하였다. 전극에서의 반응을 최적화하기 위하여 GAO 효소가 가장 우수한 활성을 나타내는 pH 7.0 완충용액을 이용하여 GAO와 HRP 효소를 1:1로 고정화하고, 1mM 1,1'-ferrocene-dimethanol 전자전달매개체를 도입하여 센서를 제작하였다. 유리 탄소전극의 경우 100 mV (vs Ag/AgCl), 스크린 프린트된 전극의 경우 -100 mV(vs Ag/AgCl)의 인가전압을 적용하였다. 본 연구에 의해 개발된 센서는 $0{\sim}400{\mu}M$의 갈락토오즈 농도에 대하여 우수한 직선성($r^2$ = 0.997, S/N = 3)을 나타내었고 낮은 인가전압을 적용하여 갈락토오즈를 측정하므로, ascorbic acid, uric acid 그리고 acetaminophen과 같은 방해물질의 영향을 최소화 할 수 있었다. 또한 갈락토오즈 표준 용액에 대하여 만족할 만한 재현성을 나타내었다(CV = 5%).
한반도 남부지역에 분포하는 돌콩(Glycine soja) 종자의 galactomannan조성과 관련한 지리적 변이를 추적하기 위하여, 북위 $34^{\circ}50'00"\sim38^{\circ}12'00"$ 사이에 위치한 8개 지역(속초, 원주, 치악산, 청주, 안동, 대구, 울산, 사천)을 선정하여 채종한 종자를 재료로 mannose와 galactose의 정량분석을 실시하였다. 각 지역별 mannose의 함량은 최저 55.23 mg/g(사천)에서 최고 460.00 mg/g(안동)의 범위 내에서 다양하게 나타났다. Galactose의 지역별 함량 역시, 최고 387.50(울산)에서 최저 67.17(사천)에 이르는 다양한 수치를 보였다. 환경적응과 관련한 생태지표로서 종자의 경실도(硬實度, seed hardness)를 의미하는 mannose/galactose 함량비를 산출한 결과, 지역에 따라 $0.41\sim1.73$의 값을 나타내었고, 대체로 중북부형(원주, 치악산, 청주), 중남부 내륙형(안동, 대구) 및 해안형(속초, 울산, 사천) 의 3개 유형이 구분되었다. mannose/galactose 함량비의 전반적인 경향은 중남부 내륙형에서 비교적 높은 수치를 보였고, 중북부형에서 상대적으로 낮은 수치를 보였다.
경골어류 4종(조피볼락, 용치놀래기, 송곳니베도라치 및 졸복) 장관의 복합당질 성상의 차이를 밝히기 위해 장을 네 부위로 나누워 아홉 종류의 biotinylated lectin들(DBA, SBA, PNA, BSL- I , RCA- I , sWGA, UEA- I 및 Con A)로 반응시켰다. 조피볼락을 제외하면 부위에 따른 차이는 없었다. 용치놀래기 장 상피는 모든 부위에서 D-glucose/mannose 잔기를 함유하고 있었다. 조피볼락, 송곳니베도라치 및 졸복 장 모든 부위에서는 정도의 차이는 있지만 ${\beta}$-N-acetyl-D-gal-actosamine가 함유되어 있었다. 또한 조피볼락의 근위장, 중간장 및 원위장에는 galactose-${\beta}$-1,3-N-acetyl-D-galactosamine 및 ${\alpha}$-D-galactose도 함유되어 있었으나 직장에는 이들 당 잔기들이 함유되어 있지 않았다. 송곳니베도라치에는 ${\beta}$-N- acetyl-D-galactosamine 외에 ${\beta}$-N-acetyl-D-glucosamine 및 D-glucose/mannose도 발견되었으며, 졸복에서는 Galactose-${\beta}$-1,3-N-acetyl-D-galactosamine, D-galactose 및 D-glucose/mannose도 발견되었다.
포도당 억제현상은 유전자 조작 및 induder에 의해 감소될 수 있다. UA8G와 GALl TATA box 사 이에서의 유전자 삭제는 포도당 억제현상을 줄이고 갈락토스가 존재하지 않는 조건에서 지속적인 유전자 발현을 도모했다. 상대적 inducer의 양(갈락토스/포 도당 농도의 비)은 유전자 발현 및 포도당 억제현상 에 영향을 주었다. 포도당 억제현상은 상대적 inducer의 양이 증가함에 따라 2-5배 정도 감소하였다. 또한 유전자 발현은 플라즈미드의 수에 좌우된다. 배지에 갈락토스만 았을 경우 유전자 발현은 플라즈 마드의 수가 증가함에 따라 증가하였다. 반면에 배지에 포도당과 갈락토스가 함께 있는 경우 (2% G Glu+2% Gal), 플라즈미드의 수는 유전자 발현에 별다른 영향을 주지 못했다. 그러나 높은 상대적 md ducer 양이 배지에 있는 경우 (0.4% Glu+0.8% Gal), 플라즈미드의 수가 증가함에 따라 유전자 발 현이 증가하였다. 즉, 포도당 억제현상을 줄임으로써 유전자 발현효율을 높이고자 할 때 갈락토스의 농도 를 증가시키는 경우보다는 포도당의 농도를 낮춤으 로써 상대적 inducer의 양음 높여 유전자 발현을 유 도하는 방법이 보다 효율적인 것으로 나타났다.
The efficacy of Kohl-Chikni Dawa (KCD), a compound ophthalmic formulation of Unani medicine, to control cataract development was explored in rats fed 25% galactose with the diet for 6 months. When one drop of 3% KCD solution was applied (once and twice daily) in both eyes for 6 months in galactose-fed rats, a significant reduction of lens opacification was noticed. The morphological changes of the lenses were observed every month by slit-lamp biomicroscope. These results suggest that the local application of 3% KCD solution possesses anticataract effect in galactose-fed rats.
We applied methanesulfonic acid (MSA) as a green catalyst to produce levulinic acid (LA) from monomeric sugars. To optimize reaction factors and assess the effect of reciprocal interactions, a statistical experimental design was applied. Optimized result of 40.7% LA yield was obtained under the following conditions: 60 g/L galactose, 0.4 M MSA at $188^{\circ}C$ for 26.7 min. On the other hand, 66.1% LA yield was achieved under 60 g/L fructose and 0.4 M MSA at $188^{\circ}C$ for 36 min conditions. For the effect of combined severity factor on the LA yield from galactose, the LA yield showed a peaked pattern, which was linearly increased until a CSF 3.2 and then diminished with a high CSF. Moreover, it was closely fitted to a non-linear Gaussian peak pattern with a high regression value of 0.989. These results suggest that MSA and galactose, derived from marine red macro-algae, can potentially be applied for the conversion into platform chemicals.
한국미생물생명공학회 2000년도 Proceedings of 2000 KSAM International Symposium and Spring Meeting
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pp.68-75
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2000
D-Tagatose is a potential bulking agent in food as a non-calorific sweetener. To produce D-tagatose from cheaper resources, plasmids harboring the L-arabinose isomerase gene (araA) from Escherichia coli was constructed because L-arabinose isomerase was previously suggested as an enzyme that mediates the bioconversion of galactose to tagatose as well as that of arabinose to ribulose. In the cultures of recombinant E.coli with pTC101, which harboring araA of E.coli, tagatose was produced from galactose in 9.9 % yield. The enzyme extract of E.coli containing pTC101 also converted galactose into tagatose in 96.4 % yield. For the economic production of D-tagatose, an L-arabinose isomerase of E.coli was immobilized using covalent binding on agarose. While the free L-arabinose isomerase produced tagatose with the rate of 0.48 mg/U$.$day, the immobilized one stably converted galactose into average 7.5 g/l$.$day of tagatose during 7 days with higher productivity of 0.87 mg/U$.$day. In the scaled up immobilized enzyme system, 99.9 g/l of tagatose was produced from galactose with 20 % equilibrium in 48 hrs. The process was stably repeated additional 2 times with tagatose production of 104.1 and 103.5 g/l.
Affinity chromatography법에 의해 해바라기씨 유래 $\alpha$-galactosidase정제를 수행하여 locust bean gum 증점 대체자원의 개발을 위한 기초연구로서 정제효소처리된 guar gum 과 locust bean gum의 구성당인 galactose와 mannose의 구성비율을 비교 검토하였다. 정제효소처리된 guar gum의 중점효과는 galactose와 mannose비율이 1 : 3.2일 때 가장 증가하였다. 이와같은 비율은 효소적 처리시간을 24시간으로 하였을 때 나타내었다. 해바라기씨 유래 $\alpha$-galactosidase처리에 의한 guar gum으로부터의 galactose의 유리가 증점효과에 영향을 미치는 것으로 사료된다. Xanthan gum과 guar gum의 혼합, xanthan gum과 guar gum 및 정제효소처리된 천연 유래 copra meal과의 혼합물에 대한 증점효과도 비교하였다.
국내산 양식김을 이용한 겔 제조를 위한 기초 자료를 얻기 위하여 채취 장소 및 시기에 따라 crude porphyran 및 porphyran을 제조한 후 알칼리 처리하여 수율, 화학적 및 겔 특성을 조사하였다. 알칼리 처리 crude porphyran과 porphyran의 수율은 각각 $4.9\~10.9\%$와 $4.0\~6.7\%$였으며 채취 시기별로는 부안 김은 2월 산이, 위도 김은 1월 산이 수율이 가장 높았다. 겔 강도는 알칼리처리 crude porphyran의 경우 부안김은 2월 산이 $790 g/cm^2$, 위도김은 $740 g/cm^2$로 가장 높았다. 알칼리 처리에 의해 총당은 증가하고 단백질과 황산기는 감소하였다. 알칼리 처리 crude porphyran과 알칼리처리 porphyran의 3,6-anhydro galactose 함량은 각각 $42.6\~46.6\%$와 $40.8\~45.0\%$로 galactose : 3,6-anhydro galactose의 mole 비가 1.0 : 0.8$\~$1.1였다. GC와 FT-IR 분석 결과 알칼리 처리에 따라 3,6-anhydro galactose peak($932cm^{-1}$)가 증가하고 6-sulfate galactose ($815 cm^{-1}$)와 총 황산기 peak ($1250 cm^{-1}$)가 감소함을 알 수 있어 황산기의 대부분이 3,6-anhydro galactose의 전구 물질인 6-sulfate-galactose로 존재함을 알 수 있다.
본 연구에서는 높은 수율로 xylitol을 생산하기 위하여 P. stipitis CBS 5776으로부터 xylitol dehydrogenase (XDH)의 활성이 결여된 변이균주의 개발과 xylitol 발효 특성에 관한 실험을 수행하였다. EMS를 처리하여 XDH defective 변이균주인 PXM-4를 최종적으로 선별하였고, 변이균주 PXM-4의 XDH 활성을 측정하여 XDH 활성이 완전히 제거된 변이균주임을 확인하였다. 변이균주 PXM-4의 xylitol 발효에서 가장 적합한 cosubstrate로서 galactose를 선정하였다. Galactose와 xylose의 혼합당 배지에서 xylitol 생산이 오히려 낮아졌고, 20 g/L 이상에서는 xylitol 생산이 호히려 낮아졌고, 20 g/L의 xylose를 이용한 xylitol 발효에서 가장 적합한 galactose의 농도는 20 g/L 이었으며, 생산된 xylitol의 농도는 14.4 g/L 이었고, 수율은 97% 이었다. 또한 잔존하는 xylose를 완전히 xylitol로 전환시키기 위하여 xylitol 농도가 증가되지 않는 시기에 glalactose를 첨가함으로써 최종 xylotil 농도를 25 g/L 까지 향상시켰다. 옥수수 속의 산 가수분해 용액을 이용한 xylitol 발효에서 배지 내 존재하는 xylose는 모두 xylitol로 전환됨으로 확인하였다. 이와 같은 결과에 따라 XDH defective 변이균주를 개발함으로써 높은 수율의 xylitol 생산이 가능함을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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