• Journal of Plant Biology
• /
• 제39권4호
• /
• pp.243-247
• /
• 1996

Phosphoribosylanthranilate transferase (PAT) catalyzes the second step of the tryptophan biosynthetic pathway and is encoded by a single-copy gene that complements all the visible phenotypes of the tryptophan mutant (trp1-100) of Arabidopsis. The trp1-100 is blue fluorescent under UV light becuase it accumulates anthranilate. To obtain a plant with reduced PAT activity, PAT1 genes with several internal deletions in different promoter regions (pHS 101, pHS102, pHS104, pHS105, and pHS107) were induced into trp1-100 via Agrobacterium. Then, homozygous T3 plants were isolated and examined for blue fluorescence. Introduction of the PAT1 gene fusants results in the reversion of fluorescence phenotype except in the case of pHS105. These results prompted us to perform a parallel analysis of anthranilate synthase and PAT interms of the genetic complementation. A plant line carrying pHS105 gene fusant does not completely complement the blue fluorescence but it accumulates less anthranilate than trp1-100. The activity of PAT was reduced in the transgenic mutant as well. The plant carrying these constructs will add to the growing collection of molecular tools for the study of the indolic secondary metabolism.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제18권5호
• /
• pp.460-465
• /
• 1990

Asp.wentii와 Asp.nidulans의 원형질체 재생은 2-DG가 30$\mu g$/ml 첨가된 포자현탁액을 4시간 전배양 할 때 적당하였고 ergosterol, myoniositol, casamino acid, BSA가 함유된 CBE 재생용 배지에서 효과적이었으며, 30 이상 재생률을 나타내었다. 원형질체 융합은 10mM $CaCl_2$가 함유된 pH7.5의 30PEG 4000으로$37^{\circ}C$ 에서 10분간 처리했을 때 가장 양호하였으며, 융합빈도는 $8.2\times 10^{-4}$을 나타내었다. 가장 우수한 융합주인 FWN-56은 CMCase, avicelase, $\beta$-glucosidase 및 xylanase를 동시에 분비하였으며 친주에 비하여 활성이 2.3배, 1.5배, 1.8배, 2.5배 각각 증가하였고, 또한 MM에 4중 이상 보관 후의 segregant율이 1 이내였으므로 유전적 안정성은 높았으며, 분생포자 DNA함량은 1.4-1.6배였다. 또한 핵의 크기도 친주에 비하여 큰 것으로 보아 융합주임을 확인하였다.

• 한국균학회지
• /
• 18권2호
• /
• pp.77-83
• /
• 1990

사철느타리버섯과 느타리버섯의 영양요구주로 원형질체 융합과정을 관찰하고, 융합에 영향을 미치는 여러 가지 요인을 분석한 결과는 다음과 같다. 원형질체에 polyethylene glycol을 혼합하였을 때 원형질체는 서로 응집되어 원형질막의 접착이 이루어졌으며, 0.6 M sucrose로 PEG를 제거한 후에 두 개 또는 다수의 원형질체가 융합되었다. 원형질체 융합에 크게 영향을 주는 요인은 PEG 농도, pH, 삼투압조정제였으며 원형질체의 농도, PEG 흔합시간, 원형질체 배양온도 및 시간, PEG 분자량, $CA^{2+}$, glycine도 영향을 주었다. 가장 알맞는 조건을 pH 8.0으로 조절된 30% PEG 8000으로 원형질체에 혼합하여 $30^{\circ}C$에서 10분간 배양하고 0.6 M sucrose에 현탁하여 동일한 삼투압조정제가 첨가된 배지에서 배양될 때 가장 많은 융합주를 획득할 수 있었다.

• 한국균학회지
• /
• 제27권6호
• /
• pp.399-405
• /
• 1999

${\alpha}-amylase$ 생산력이 우수한 야생형인 S. fiburigera의 핵을 순수분리하여 영양요구성 변이주인 S. cerevisiae(tyr-, ura-)의 원형질체에 전달하는 핵전이를 이용하여 종간잡종을 형성시킨 후 이들 형질전환체로부터 ${\alpha}-amylase$ 고생산 균주를 획득하였다. 핵전이를 위한 원형질체 형성 및 재생조건에서는 Novozym 234의 농도 1%, 삼투안정제는 0.6M KC1, 효소처리 시간은 90분, 그리고 최적 pH는 5.8로 나타났다. 핵전이에 의한 형질전환율은 0.25%로 비교적 낮은 편이었으며, 유전적 안정성, 세포크기의 체적, DNA함량의 측정 그리고 핵염색의 결과 형질전환체의 핵형은 aneuploid로 추정되었다. 형질전환 체의 ${\alpha}-amylase$ 활성은 모균주와 비교하여 약 $1.2{\sim}1.9$배 증가하였다.

• 미생물학회지
• /
• 제28권2호
• /
• pp.120-127
• /
• 1990

전분 분해능이 있는 담자균성 효모, Filohasidium capsuligenum의 종내 및 Saccharomyces cerevisiae와의 속간 원형질체융합을 시도하였다. F capsuligenum CBS 6122-2의 종내 융합율은 각각 $2.9\times10^{-3}$ (ade+mel trp), $8.5\times10^{-3}$(ade+met)이고, F. capsuligemum CBS 4381 (cys his)과 S.cerevisiae 262-12-1 (hom3 thr1), X2180-1A (ade thr)와의 속간 융합율은 각각 $8.8\times10^{-6}$, $9.5\times10^{-4}$이었다. DNA 정량, 핵 염색, 자외선 조사에 따른 생존력 비교 그리고 형질 분리 분석 결과 등을 통해 종내와 속간에서 핵 융합이 일어난 것을 알 수 있었다. 또한, 종내 융합체의 경우 세포당 $\alpha$-amylase와 glucoamylase 생성능이 양천형에 비해 1.6-2.1배의 증진 효과가 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제20권1호
• /
• pp.6-13
• /
• 1992

유산균주의 균주개량방법의 일환으로 protoplast fusion 방법을 사용하여 lincomycin에 내성을 나타내는 Lactobacillus casei KCTC 1121과 rifampicin에 내성을 나타내는 Lactobacillus delbruckii JK-414의 protoplast 형성과 재생, 융합에 대한 조건 및 융합주의 생리학적 성질 등을 검토하였다. Lactobacillus case와 Lactobacillus delbrueckii JK-414는 삼투압 안정제로 sucrose가 함유된 protoplast forming buffer에서 5$\mu g$/ml의 mutanolysin 으로 $42^{\circ}C$, 15분간 처리 했을 때 protoplast 형성율이 높게 나타났다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제31권1호
• /
• pp.26-32
• /
• 1988

본 연구는 효모의 killer toxin을 포도주 발효효모에 도입시켜 발효중 다른 야생효모의 생육을 억제함으로서 starter를 절감하고 발효기간을 단축시키는 보다 효율적인 발효균주를 개발하기 위하여 수행되었다. 포도주 효모 Saccharomyces cerevisiae M524 균주에 N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine을 처리하여 3종의 영양요구 변이주$CHM2(thr^-),\;CHM3(asp^-),\;CHM6(tyr^-)$를 만들었고, 이 변이주 각각을 killer 효모인 S. cerevisiae 1368R $({\alpha}\;his\;4\;kar\;1-1[kil-K][K_0]$, respiratory deficient)과 세포융합시켜 4종의 융합주 $CHF21(thr^-kil^+)\;CHF22(thr^-\;kil^+)\;CHF31(asp^-\;kil^+)\;CHF61\;(tyr^-\;kil^+)$을 만들었다. 이중 CHF31 융합주를 killer 효모 1368R과 killer 감수성 효모 S. cerevisiae $5{\times}47$에 각각 혼합 배양한 바 CHF31이 killer로서의 특성과 모균주에 못지 않은 ethanol 생성능을 지녔음이 확인되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제14권5호
• /
• pp.359-363
• /
• 1986

본 실험의 목적은 starch의 alcohol발효에 있어서 전분의 $\alpha$-1.4 linkage을 분해하여 alcohol발효를 하는 S diastaticus와 전분 중의 $\alpha$-1.4, $\alpha$-1.6 linkage를 모두 분해할 수 있는 C. tropicalis 간의 이속간의 protoplast fusion을 시켰다. 이때 세포 융합의 빈도는 $10^{-5}$-$10^{-6}$이였으며, 이틀 융합체중 amylase 생성능과 유전적으로 안정한 융합체를 분리하였다. fusant의 성질을 조사하기 위하여 탄소원 자화능을 조사한바 parent와 달리 탄소원 자화능이 일부 보완됨을 보였고 또한 fusant는 원 parent보다 세포의 크기가 클 뿐만아니라, DNA함량도 많았다. spore형성능은 S. diastaticus A4는 spore를 형성하나 C. tropicalis는 형성할 수 없는 반면에 fusant는 형성하였고, Cu$^{++}$ 내성과 NaCl 내염성도 조사하였는데 fusant는 parent의 중간 성질을 가졌다. Fusant의 증식율을 조사하기 위하여 생육도를 조사한 결과 Parent보다 유도기가 길었음을 알았다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제32권2호
• /
• pp.101-109
• /
• 2004

Streptomyces avermitilis가 생산하는 이차대사산물인 avermectin $B_{la}$ (AVM $B_{la}$ /)의 생산성을 향상시키고자, 고생산성 균주를 융합파트너로 이용하여 원형질체 융합에 필요한 기본 실험조건을 확립하였고, 대량 선별시스템을 이용하여 다양한 융합균주들을 선별하였다. 특별한 표지인자가 없는 경우에도 원형질체 융합에 의해 유전자재조합체들을 선별할 수 있는 방법을 개발하였다. 즉 고생산성 균주의 원형질체(L-isoleucine유사체인 O-methylthreoiune또는 azaleucine에 대한 저항성 변이주의 원형질체를 치사율이 약 95%정도 되도록 UV나 NTG로 각 원형질체를 돌연변이시킨 후, 융합을 시도하여 재생된 변이주를 원형질 융합된 유전자재조합체로 간주하는 방법을 고안하였다. 돌연변이원으로 UV를 이용할 경우 대부분의 유전자재조합 균주들의 AVM $B_{la}$ 생산성이 융합 모균주들에 비해 높게 나타났으며, 주목할 만하게도 최고 3배 정도 향상된, 거의 산업용 균주의 생산성을 갖는 균주들을 선별할 수 있었다.

• 미생물학회지
• /
• 제37권4호
• /
• pp.312-316
• /
• 2001

에탄올 발효능이 우수한 Saccharomyces에 속하는 4 균주를 가지고 여러 조합의 mating-pair 또는 fusion-pair를 만들고 이들 pair들로부터 만들어진 hybrid주들의 에탄올 생성능과 생존능을 통계적으로 분석한 결과, 에탄올 생성능에서는 차이가 없었으나, 생존능의 경우는 [S. kluveri $khl{\times}S.$ cerevisiae cp3]의 균주조합이 가장 우수한 hybrid를 낼 수 있는 것으로 나타났다. 실제로 에탄올 생성능과 잔당, 효율, 생존능에서 두루 우수한 균주는 [S. kluveri $khl{\times}S$ cerevisiae cp3] 조합에서 얻어진 융합주 clone No. 3가 에탄올 생성능 10.11%(w/v) 또는 12.81%(v/v), 잔당 3.53%(w/v), 생존능 62.65%, 발효 효율 92.2%로서 가장 발효능과 생존능이 우수한 균주로 선정되었다.