• 식물조직배양학회지
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• 제27권3호
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• pp.233-238
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• 2000

야생 흰제비꽃의 엽병 유래 callus를 장기 계대배양하는 과정 중에 발생하는 순화된 friable callus와 분화능이 높은 compact callus를 비교 관찰한 바, friable callus는 연초록색으로 부서지기 쉬운 부드러운 callus이고, compact callus는 진녹색으로 단단한 callus였다. 동결처리 한 시료를 주사전자 현미경에서 동일하게 200배로 관찰하여 보면, friable callus 는 작은 세포집단으로 이루어진 세포군의 주변부에 고도로 액포화된 세포가 광범위하게 분포되어 있는 반면, compact callus는 거의 균일한 세포들로 구성되어 세포구성이 치밀한 것으로 관찰되었다. 또한 friable callus와 compact callus로 부터의 체세포배형성은 배양세포에서 배가 발생하여 배양기간이 지남에 따라 식물체로 분화하였다. 이와 같은 과정은 배양세포의 세포질이 보다 충만한 부위에서 배유사체 (embryo like body)의 발생이 이루어지는 것으로 관찰되었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제27권3호
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• pp.181-184
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• 2000

Friable callus와 compact callus를 배양 단계별로 단백질을 정량한 결과 friable callus가 가장 낮았고 배양 0주째부터 단백질 함량이 서서히 증가하여 배양 3주째 최대함량이 되었으며, 4주째부터는 감소하기 시작했다. 전기영동법으로 단백질의 패턴을 조사한 결과 compact callus와 friable callus간에 특징적인 차이를 보이는 단백질 밴드가 관찰되었다. Friable callus는 약 28 KD, 31 KD과 35 KD에서 특이적으로 나타났으며. compact callus에서는 30 KD부근의 밴드에서 많은 변화가 일어났다. 전체 단백질의 구성 아미노산은 배앙 2∼3주에 가장 높은 함량을 보였고, friable callus에서 그 함량이 가장 낮았다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제4권1호
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• pp.17-21
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• 2002

To establish an the mass production system of grape anthocyanin pigments through callus and cell suspension culture, the effects of various combinations of auxins and cytokinins on friable callus production were studied. for friable callus production, 2,4-D was superior to other regulators. IAA at 2 mg/L induced callus from stem and petiole while NAA resulted in rooting. Callus induction rate increased with the 2,4-D level, and stem segments were superior to leaf blade or petiole, showing nearly 100% with 1 and 2 mg/L 2,4-D from petiole and stem. Combined treatments of 2,4-D + kinetin and NAA + BA also yielded friable callus from stem segments. In treatments with 1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L kinetin and 1 mg/L NAA + 1 mg/L BA, callus induction rate was nearly 100%. The combination effect of 2,4-D and BA on anthocyanin production was not significant.

• Journal of Ginseng Research
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• 제11권1호
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• pp.56-65
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• 1987

인삼 crown gall tumor callus의 특성을 구명하기 위하여 Agrobacterium tumefaciens C58을 감염시켜서 얻어진 crown gall tumor를 phytohormone 무첨가 배지에서 배양하여 생육이 왕성한 tumor callus를 유기하였다. 이들 tumor callus는 정상조직에서 유기한 callus에 비해 외관상으로는 friable한 형태의 덩어리로 자라면서도 매우 단단한 양상을 보였으며, callus증식에 적합한 phytohormone 농도에서는 tumor callus의 생육이 오히려 억제되는 현상을 보였다. Tumor callus의 생육은 고체배양시 암배양이 광배양보다 생체중의 경우에는 2.4배, 건물중은 1.9배 가량이 더 많으며, 2,4-D가 함유된 최적조건에서 배양한 정상 callus의 생체중과는 비슷한 경향을 보였으나, 건물중은 tumor callus가 더 높았다. 그리고 현탁배양시에는 tumor callus가 정상 callus보다 생장속도가 2배 이상 빠른 경향이었다.

• 한국초지조사료학회지
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• 제9권3호
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• pp.124-128
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• 1989

本實驗은 Vernal알팔파의 callus 誘導에 미치는 몇가지 要因들에 對하여 糾明하고자 逐行되었으며 얻어진 結果는 다음과 같다, Callus 誘導에서 auxin 源으로서 2,4-D를 2-5mg/1 單用處理한 것이 가장 좋았으며, 여러가지 基本 培地 中에서는 B5와 SH가 callus 誘導에 가장 效果的이었는데, PC와 MS 培地에서 生成된 callus는 friable 하였다. 培地#의 pH는 5.8이 가장 좋았으며 7.0 以上에서는 callus는 거의 생장하지 않았다. 組織片은 9日 齡된 植物體의 것이 가장 좋았으며, 이를 前後하여 callus의 生成量은 減少하였다. Callus 誘導時, 光條件의 有無는 큰 影響을 나타내지 않았으나, 빛 條件에서는 callus 組織은 푸르게 되었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제32권2호
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• pp.123-128
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• 2005

Lilium longiflorum 'Nellie White'에서 부서지기 쉬운 배발생 캘러스 (FEC)를 유도하여 FEC를 통한 소자구 재분화 체계를 확립하고자 실시하였다. FEC를 통한 나리 소자구 분화는 2.0 mg/L dicamba가 첨가된 MS 기본배지에 나리 인편을 배양하여 단단한 캘러스를 유도하고, 유도된 단단한 캘러스를 동일배지에서 3번 이상 계대배양하여 단단한 일반 캘러스를 증식하였다. 증식된 단단한 캘러스는 $1{\sim}2mm$ 정도의 크기로 절단하여 2.0 mg/L dicamba와 90 g/L sucrose가 첨가된 MS배지에서 배양하여 FEC를 유도하였다. 2개월 간격으로 계대배양하면서 FEC를 유도하였으며, FEC 유도율은 단단한 캘러스를 동일 배지에 계대배양 하였을 때 증가하였다. 유도된 FEC는 $1.0{\sim}2.0\;mg/L$ dicamba와 90 g/L sucrose가 첨가된 MS배지에서 5배 이상의 증식율을 보였다. 증식된 FEC에서 소자구 분화는 0.1 mg/L BA, 1.0 g/L NAA, 30 g/L maltose가 첨가된 1/2 MS 배지에서 양호하였다. 그러나 많은 재분화된 소자구가 투명화 되었다. 건전한 소자구의 재분화는 30 g/L sucrose와 $0.5{\sim}1.0%$ 활성탄이 첨가된 MS 배지가 가장 효과적이었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제32권2호
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• pp.117-121
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• 2005

국내 옥수수 3품종 (두메찰, 미백찰, 흑점찰)과 5 계통(HW1, KL103, HW3, HW4, KW7)의 미숙배를 1 mg/L 2,4-D, 25 mM proline, 100 mg/L casamino acid, 3 mM MES, 1.7 mg/L $AgNO_3$, Eriksson's vitamin 및 20 g/L sucrose가 첨가된 MS배지 (SEM)에 5주 동안 배양하였다. 각 계통 및 품종의 체세포배 발생 빈도는 HW1 (45.20%), KL103 (5.75%), HW3 (37.20%), HW4 (30.10%), KW70 (55.20%), 미백찰 (18.74%), 흑점찰 (22.41%), 두메찰 (36.72%)이었으며, 모델 품종인 Hi II type에서는 10% 이하였다. Hi II계통에서 형성되는 type II캘러스와 같은 노란색의 부드러운 배발생캘러스 (yellowish friable embryogenic callus, YFEC)는 오직 HW3와 흑점찰 품종에서 형성되었으며, 반면 다른 품종 및 계통에서는 late-embryo단계의 단단한 체세포배가 직접 발생되거나 형태적으로 비정상 모양을 갖는 단단하고 팽창된 체세포배가 발생 되었다. 노란색의 부드러운 배발생캘러스 (yellowish friable embryogenic callus, YFEC)는 동일배지에서 빠르게 증식 되었고 6개월 이상 배발생 능이 유지 되었으며, 1차 재분화 배지와 2차 재분화배지에 옮겼을 때 모두 식물체로 전환 되었다. 그러나 단단한 노란색의 배발생캘러스와 비정상 형태의 체세포배는 동일배지에서 매우 느리게 증식되었고, 재분화 배지에서 낮은 식물체 전환율 (25%)을 보였다. 따라서 본 연구로부터 선발된 HW3와 흑점찰은 향후 국내 옥수수 유전자원을 이용한 형질전환 시스템 개발연구에 이용 될 수 있을 것으로 예상된다.

• 한국작물학회지
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• 제20권
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• pp.1-26
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• 1975

벼의 조직배양을 통한 육종적 이용을 목적으로 생태형이 다른 다수의 품종을 공시하여 2,4-D와 DNN를 첨가한 배지조건에서 발아종자와 약으로부터의 callus형성 및 기관분화의 품종간 차이를 구명하고 callus형성 및 기관분화능력이 상이한 품종간 교잡에서 잡종 제1세대의 callus형성 및 기관분화의 상관관계를 조사하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 벼 발아종자로부터의 callus형성은 현저한 품종간 차이를 인정할 수 있었다. 공시된 배지에서는 대체로 일본형 수도는 인도형에 비하여 callus형성이 좋았다. 2. 배지조성물질로서의 2,4-D와 NAA가 callus형성에 미치는 영향을 비교한 바 대부분의 품종들은 NAA첨가배지에서 callus형성량이 많았다. NAA첨가배지에서와 2,4-D첨가배지에서의 callus형성량의 상관관계는 고도의 유의성(r=0.896$^{**}$)이 인정되었다. 3. 2,4-D첨가배지에서 형성된 callus는 NAA첨가배지에서 형성된 callus보다 푸실푸실(friable)한 것이 많았다. 4. 육도는 발아종자로부터의 callus형성은 불량하나 약으로부터의 callus형성은 양호하였다. 5. callus로부터의 기관분화는 뿌리의 분화가 경엽의 분화보다 용이하였다. 또한 품종에 따라 기관분화정도에도 차이가 있었다. 6. 교잡종자로부터의 callus형성은 양친이 callus형성이 양호하면 $F_1$도 양호하고 양친중 편친만이 양호하드라도 교잡종자의 callus형성은 양호하였다. 따라서 callus 형성이 잘되는 편이 우성이었다. 7. 양친의 기관분화보다 잡종의 기관분화가 양호한 편이었다. 그러나 기관분화의 난이와 callus형성의 난이와는 상관이 없었다. 8. 약으로부터의 callus형성은 품종에 다라 현저한 차이가 있어 최고 10.5%에서부터 전연 형성되지 않은 품종까지 있었다. 이론형품종은 대부분이 2~4%였으나 인도형 품종은 대부분이 1%이하였다. 9. 약에서 형성된 callus로 부터의 기관분화에도 품종간 차이를 인정할 수 있었다. 10. callus로부터 기관이 분화되었을 때 albino변이체의 출현이 많았는데 발아종자으 우연보다 약의 경우에 그 출현빈도가 높았다. 11. $F_1$식물의 약으로부터의 callus형성 및 그로부터의 기관분화는 원녹간교잡에서는 $F_1$식물이 양친에서보다 좋았고 근녹간교잡에서는 양친과 같거나 약간높은 경향이었다. 12. 발아종자로 부터의 callus 형성과 약으로 부터의 callus형성과의 상관관계는 r=0.504$^{**}$로서 고도의 유의성이 인정되었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제30권2호
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• pp.115-121
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• 2003

In this study, plant regeneration and Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation Kentucky bluegrass(Poa pratensis L.) were evaluated. Three different types of calli were produced depending on the combinations of growth regulators. They were non-friable brown or gray-colored callus (type I), compact, friable and yellow or white-colored callus (typeII), and soft, watery translucent callus with differentiated structure (typeIII). The highest regenerable organogenic callus (typeII) was obtained on the medium containing 1mg/L, 2,4-D and 0.1mg/L BA. Additionally, the production of typeII calli increased significantly when AgNO$_3$ was added to the callus induction and growth medium. The highest frequency of multiple shout formation from typeII callus was obtained on MS medium containing 1mg/L BA and 1mg/L Thidiazuron(TDZ). The organogenic calli(typeII) were inoculated with Agrobacterium tumefaciens strain EHA101 harboring the binary vector pIG121Hm with $\beta$-glucuronidase gene, and various factors were found to influence the transfer-DNA delivery efficiency. The highest transient GUS activity was observed on typeIIcallus. In the present work, we reported the first transient GUS activity of Kentucky bluegrass mediated by Agrobacterium tumefaciens. Our system may contribute to genetic improvement for breed-recalcirtrant grass species, Kentucky bluegrass.

• Plant Biotechnology Reports
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• 제2권1호
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• pp.87-92
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• 2008

An improved protocol for high frequency plant regeneration via somatic embryogenesis from zygotic embryo-derived cell suspension cultures of watershield (Brasenia schreberi) was developed. Zygotic embryos formed pale-yellow globular structures and white friable callus at a frequency of 80% when cultured on halfstrength MS medium supplemented with $0.3mg\;l^{-1}$ 2,4-D. However, the frequency of formation of pale-yellow globular structures and white friable callus decreased slightly with increasing concentrations of 2,4-D up to $3mg\;l^{-1}$, where the frequency reached ~50% of the control. Cell suspension cultures from zygotic embryoderived white friable callus were established using half-strength MS medium supplemented with $0.3mg\;l^{-1}$ 2,4-D. Upon plating of cell aggregates on half-strength MS basal medium, approximately 8.3% gave rise to somatic embryos and developed into plantlets. However, the frequency of plantlet development from cell aggregates was sharply increased (by up to 55%) when activated charcoal and zeatin were applied. Regenerated plantlets were successfully transplanted to potting soil and grown to normal plants in a growth chamber. The distinctive feature of this study is the establishment of a high frequency plant regeneration system via somatic embryogenesis from zygotic embryo-derived cell suspension cultures of water-shield, which has not been previously reported. The protocol for plant regeneration of watershield through somatic embryogenesis could be useful for the mass propagation and transformation of selected elite lines.