• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제16권8호
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• pp.1180-1184
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• 2006

The capsule that surrounds Yersinia pestis cells is composed of a protein-polysacchride complex; the purified protein component is fraction I (F1) antigen. We report the cloning of the cafl gene and its expression in Escherichia coli using the vector pETl02/D-TOPO and the F1-specific monoclonal antibody. The recombinant F1 (rF1) antigen had a molecular size of 17.5 kDa, which was identical to that of the F1 antigen produced by Y. pestis. Recombinant F1 protein was found to react to polyclonal antiserum to Y. pestis Fl. Recombinant F1 was purified by ProBond purification system and induced a protective immune response in BALB/c mice challenged with up to 10$^5$ virulent Y. pestis. Purified rF1 protein was used in an ELISA to evaluate the ability of a method to detect antibodies to Y. pestis in animal sera. These results strongly indicated that the rF1 protein is a suitable species-specific immunodiagnostic antigen and vaccine candidate.

• 한국식품영양과학회지
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• 제33권7호
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• pp.1085-1091
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• 2004

먼저 OVA항원에 대해 특이적으로 증식반응을 나타내는 T세포주를 수립하였고, 수림된 세포주는 세포 표면 단백질이 CD4$^{＋}$CD8$^{-}$이며 IL-2와 IFN-${\gamma}$를 분비하는 Type I에 속하는 보조 T세포(Thl)인 것을 확인하였다. 보중익기탕의 total 분획은 OVA항원에 대해 특이적으로 반응하는 Thl세포의 증식반응을 증가시키는 효과를 나타내지 않았으며 고농도에서 오히려 증식반응을 억제하였다. 그러나, 보중익기탕의 polysaccharide 분획은 전반적 인 농도에서 T세포의 증식반응을 유의하게 증가시키는 효과가 있는 것으로 나타났다. 보중익기탕의 polysaccharide 분획을 첨가하였을 때 T세포의 IL-2 분비량은 대조군보다 약간 적었지만, IFN-${\gamma}$ 분비량은 대조군보다 증가하였다. 그리고, 분비된 IL-2와 결합하는 T세포의 IL-3 수용체 발현양도 증가하는 것으로 나타났다. 또한, 항원제시세포의 MHC class II의 발현양도 증가시켰다. 이상의 결과로 보중익기탕의 polysaccharide분획은 T세포의 IL-2수용체 발현양을 증가시키고, 항원제시세포의 MHC classs II의 발현양을 증가시켜서 T세포의 증식반응을 증가시키는것으로 생각된다 그리고 보중익기탕이 생체 면역반응에 미치는 보다 정확한 효과를 평가하기 위해서는 직접 살아있는 실험동물에 투여하는 in vivo 실험이 필요하다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제21권2호
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• pp.257-264
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• 1983

In order to obtain more specific antigenic preparation for the diagnosis of human paragonlmiasis, crude saline extract of whole worm (=PwWWE), secretory.excretory components (PwSEC) and secretion-excretion-free somatic extract (PwSM) of 12 week-old ParagoninBus westermani were filtrated through Sephadex G-200 gel column. The adult Paragonimus worms were obtained from expevimentally infected doge. A total of 11 antigenic solutions was Iyophilised or diluted to adjust protein content of 1mg/ml. To evaluate the antigenicity of crude antigens and fractions, micro-ELISA was done with the sera from P westermani in(ected cases, C. sinensis infected cases and non-infected control cases to detect Paragonimus specific IgG antibody. The results were as follows: 1. When the PwWWE was filtrated through Sephadex G-200 gel, it was separated into three fractions; PwWWE Fr. 1, PwWWE Fr. 2 and PwWWE Fr. 3. The percentage of protein content was 28.0%, 21.6% and 50.4% respectively. The PwSM was also. separated into three fractions; PwSM Fr. 1, PwSM Fr. 2, PwSM Fr. 3. and their percentage of protein content was 41.3%, 38.6% and 20.1%. However, the PwSEC showed different fractionation pattern; i.e. fraction 1 (=PwSEC Fr.1) and 3 (PwSEC Fr. 3) without fraction 2. The percentage of protein content was 14.0% in PwSEC Fr. 1 and 86.0% in PwSEC Fr. 3. 2. When the antigenicity of each Paragonimus crude antigen and fractionated antigen was evaluated for specific IgG aritibody by micro-ELISA in 10 human paragonimiasis sera, PwSEC Fr, 1 was the most potent antigen showing the mean absorbance 1.98. The PwWWE Fr. 1, PwSEC, PwWWE were next to that: their mean absorbance were 1.72, 1.38 and 0.83 respectively. The antigenicity of fractions 2 and 3 was much weaker in binding specific IgG antibody. 3. When the antigens were reacted in micro-ELISA with 10 human clonorchiasis sera, most antigens showed weak reactivity. Each fraction 1 of crude antigens reacted higher than other fractions or crude antigens; the mean absorbance was 0.17 in fraction 1, but in others the absorbances were about 0.06. 4. With non-infected control sera, the result of micro-RLISA revealed almost same pattern with those of the clonorchiasis sera. From the above results, it became apparent that PwWWE Fr. 1, especially PwSEC Fr. 1 was the most potent antigen reacted with Paragonisfaus specific IgG antibody.

• 한국가축번식학회지
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• 제9권2호
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• pp.133-139
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• 1985

An immunoassay may be defined as an analytical procedure involving the competitive reaction between a limiting concentration of specific antibody and two populations of antigen, one of which is labelled or immobillized. The advent of immunoassay has revolutionised our knowledge of reproductive physiology and the practice of veterinary and clinical medicine. Radioimmunoassay (RIA) was the first of these methods to be developed, which meausred the analyte with good sensitivity, accuracy and precision (1,2). The essential components of RIA are:-(i) a limited concentration of antibodies, (ii) a reference preparation, and (iii) an antigen labelled with a radioisotope (usually tritium or iodine-125). Most procedures invelove isolating the antibody-bound fraction and measuring the amount of labelled antigen. Good facilities are available for scintilltion counting, data reduction nd statistical analysis. RIA is undergoing refinement through:-(i) the introduction of new techniques to separate the antibody-bound and free fractions which minimize the misclassification of labelled antigen into these compartments, and the amount of non-specfic binding. (3), (ii) the development of non-extration for the measurement of haptens (4), (iii) the determination of a, pp.rent free (i.e. non-protein bound) analytes (5), and (iv) the use of monoclonal antibodies(6). In 1968, Miles and Hales introduced in important new type of immunoassay which they termed immunora-diometric assay (IRMA) based on t도 use of isotopically labelled specific antibodies(7) in a move from limited to excess reagent systems. The concept of two-site IRMAs (with a capture antibody on a solid-phase, and a second labelled antibody to a different antigenic determinant of the analyte) has enabled the development of more sensitive and less-time consuming methods for the measurement of protein hormones ovar wide concentration of analyte (8). The increasing use of isotopic methos for diverse a, pp.ications has exposed several problems. For example, the radioactive half-life and radiolysis of the labelled reagent limits assay sensitivity and imposes a time limit on the usefulness of a kit. In addition, the potential health hazards associated with the use and disposal of radioactive cmpounds and the solvents and photofluors necessary for liquid scientillation counting are incompatable with the development of extra-laboratory tests. To date, the most practical alternative labels to radioisotopes, for the measurement of analytes in a concentration > 1 ng/ml, are erythrocytes, polystyrene particiles, gold sols, dyes and enzymes or cofactors with a visual or colorimetric end-point(9). Increased sensitivity to<1 pg/ml may be obtained with fluorescent and chemiluminescent labels, or enzymes with a fluorometric, chemiluminometric or bioluminometric end-point. The sensitivity of any immunoassay or immunometric assay depends on the affinity of the antibody-antigen reaction, the specific activity of the label, the precision with which the reagents are manipulated and the nonspecific background signal (10). The sensitivity of a limited reagent system for the measurement of haptens or proteins is mainly dependent upon the affinity of the antibodies and the smalleest amount of reagent that may be manipulated. Consequently, it is difficult in practice to improve on the sensitivity obtained with iodine-125 as the label. Conversely, with excess reagent systems for the measurement of proteins it is theoretically possible to increase assay sensitivity at least 1000 fold with alternative luminescent labels. To date, a 10-fold improvement has been achieved, and attempts are being made to reduce the influence of other variables on the specific signal from the immunoreaction.

• 농업과학연구
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• 제13권2호
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• pp.299-310
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• 1986

3M KCl을 이용하여 면양 squamous cell carcinoma 및 정상면양 조직(組織)에서 획득(獲得)한 추출액(抽出液)의 성상을 sephadex column chromatography, lymphocyte blastogenicity assay, acid dissociation method 및 gradient polyacrylamide gel electrophoresis 등을 이용하여 연구하였다. Sephadex column chromatography에서 얻은 5개의 종양분획(腫瘍分劃)중 분획(分劃)III은 가장 종양특이(腫瘍特異)한 항원(抗原)을 보유하고, 분획(分劃)V lymphocyte reactivity를 저하(低下)시키는 성분을 함유하고 있었다. 각 분획(分劃)을 분자량(分子量) > 100,000, 10,000~100,000 및 < 10,000의 3군(群)으로 분리한 바 종양특이항원(腫瘍特異抗原) 및 면역저지물질(免疫沮止物質)은 10,000~100,000분획(分劃)에서 나타났다. 분획(分劃)I tumour specific antigen - antibody complex를 내포하고 있음이 밝혀졌다. Gradient gel electrophoresis를 이용하여 분획(分劃)을 더욱 세분했을 때 분획(分劃)III은 Slice No 4~6에서 종양특이물질(腫瘍特異物質)이 인정되었고, 분획(分劃)V Slice No 9~11에서 면역기능저하물질(免疫機能低下物質)이 있음이 밝혀졌다.

• 대한수의학회지
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• 제38권2호
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• pp.328-335
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• 1998

Outer membrane proteins(OMPs) of Brucella abortus 1119-3 strain were extracted by Triton X-100 treatment, and fractionated by DEAE-cellulose column chromatography and Sephacryl S-300 column chromatography. The antigenic proteins in these fractions were identified by Western blot analysis. In Western blot analysis, a single band(38kDa) was observed in the DEAE fractions from 36th fraction to 38th fraction against sera of cattle infected with B abortus. And other fractions have several bands. However, the Sephacryl S-300 fractions exhibited a total of 3 peaks of proteins with a broad range from about 30 to 116kDa. In order to characterize further, the extracted OMPs and the DEAE fractions were analyzed by two dimensional polyacrylamide gel electrophoresis(2-DE) and Western blot using serum from naturally infected cattle with Brucella spp. The 2-DE immunoblots of DEAE fraction showed immunoreactive spots more than twenty two. The major protein spots have ranging from about 32 to 47kDa. The pI values of the spots were detected from pH 4.7 to 5.4. Among the major protein spots, the 38kDa protein which is a specific antigen, located at the point of approximately a pI 4.8.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제35권4호
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• pp.251-258
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• 1997

톡소포자충. RH주 tachyzoite의 항원성 난백질에 대하여 알아보고자 마우스 복강 내 또는 in uipo에서 Hep-2 cell에 계대한 톡소포자충과 감염마우스의 복팡앤으로 SDS-PAGE/immunoblot을 시행하였다 또 lmnoanity chromatoaphy를 이용하여 톡소포자충 항원을 징제한 후 SDS PAGE/immunoblot을 시행하여 항원을 분리하였으며. 톡소포자충 조항원 및 정제항원으로 면역시킨 마우스 혈청을 이용하여 IgG-ELISA를 시행하였다. 톡소포자충 용해물을 면역시킨 노끼의 항혈 청으로 immunoblot을 시행하였을 때 마우스 복강 내로 계대한 톡소포자충에서 76 kDa. 70 kDa. 64 kDa. 53 kDa 46 kDa. 44 kDa. 35 kDa. 25 kDa. 18 kDa 및 13 kDa의 항원대가 관찰되었으며. in vitro에서 Hep-2 cell에 배양한 톡소포자충은 70 kDa. 64 kDa. 53 kDa 35 kDa. 25 kDa 및 13-10 kDa의 항원대가 관찰되어 마우스 복강 내에 계대한 톡소포자충에서 더 많은 항원대가 관찰되었다. 마우스 복강 계대한 tachyzoite 용해물을 immunoaffinity글 시행하여 부분 정제한 후 떤역시킨 초기의 항혈청으로 immunoblot을 하였을때 E-1에서는 97 kDa. 63 kDa. 53 kDa 및 35 kDa이 E-2에서는 53 kDa 및 35 kDa이 나타났다. 한편 감염 마우스 복강 액에서는 76 KDa 53 KDa. 35 kDa 및 29-28 kDa의 항원대가 관찰되었으며. 정상 마우스 복강 액에서도 약하게 76 kDa .35 kDa 및 29-28 kDa의 반응대가 관찰되었다. 감염 마우스 복강앤을 IgG-Sepharose column을 통과시킨 후 시행한 immunoblot에서 E-1은 84 kDa. 76 kDa. 5,B kDa 및 29 kDa이 . E-2에서 53 kDa 및 45 kDa의 항원대가 관찰되었다. 이 실험에서 immunoawnity chromatography를 이용하여 톡소포자충 용해물 및 분비물에서 76 kDa. 63 kDa. 53 kDa. 35 kDa 및 29 kDa의 항원을 불리하였다. 톡소포자충의 조항원과 정제항원 (감염 마우스 복강액. E-1)으로 IgG-ELISA를 시행한 결과. 조항원의 경우 2차 면역 후 1주 후부터 IgG 항체가 증가하였고 정제 항윈은 2차 면역 후 3주 후부터 IgG항체가 증가하였다 (p<0.05).

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제9권1_2호
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• pp.43-53
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• 1982

여성의 난소기능은 뇨중 Oestrone-3-glucuronide를 간편한 solid-phase 의 화학발광성 면역학적 측정법 (Chemiluminescence Imrnunoassay(CIA) 에 의하여 그 기능이 탐지될 수 있다. Oestrone-3-g1ucuronyl-6-bovine serum albumine에 대한 antiserum의 IgG fraction은 polystyrene 실험관벽에 흡착시켰으며, 항원으로서는 est r one-3- gl ucuronyI-6-aminoethyl-ethyl-isoluminol 을 항원 (antigen) 에 labeI 시킨 것이다. 시험 대상물인 뇨는 매일아침뇨(early morning urine) 을 희석 (1:1000 V/V)한 후 100mcl 를 취하여 이를 각기 이중분석액으로 택하였다. 시험관 내에서 결합반응 (1 hour at $4^{\circ}C)이 일어난 후에는 시험관내의 액체를 전부 흡입 폐기시켰으며, 항체반응이 일어난 후 ( antibody-bound fraction )에는 완충액 (400mcl)으로 한번 세척시켰다. 그후 염화수산화물(2N , 200mcl)을 가지고 $22^{\circ}C$에 60 분간 방치 혼합케 한 후 효소(microperoxidase) 와 과산화수소를 가하면서 산화작용에서 발생되는 발광양을 10초동안 측정하여 그 결과를 분석하였다. 위에 기술한 분석방법을 평가하면 다음과 같은 결론을 얻었다. Calibration curve sensitivity$3.12{\pm}0.75$ PG/tube ($mean{\pm}SD$)였고, lntra-assay precision(CV%) 9.52 (20 replicates;$38.4{\pm}3.66$nmol/1) 와 8.81 (15 replicates; $102.4{\pm}8.82$nmol/1)였다. Inter-assay precision(CV%) 은 11.9 (mean of 4 pools-7.03, 23.16, 52.11 과 117.53 nmol/1)로 2개월 동안에 걸쳐 시행되었고, 평균 비이어스(mean bias)는 -0.78 로 28에서 448 nmol 범위로서 매일아침 "뇨"의 차이분(different aliquots)은 좋은 결과를 얻었다. 건강한 여성으로부터 채취된 뇨중 Oestrone-3-glucuronide 의 농도(nmol/1)를 보면 월경주기의 여포기와 배난기 및 황체기에 있어서 각기 $40.2{\pm}9.9$ , $102.3{\pm}39.4$와 $84.3{\pm}13.3$nmol/1였다. 이와같은 결과는 동일한 검사뇨를 방사면역학적 방법(RIA)으로 측정 (6 menstrual cycle)한 결과와 유사한 측정치를 얻으므로서 간편하고 진보된 좋은 방법중의 하나라고 사료되는바이다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제24권2호
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• pp.177-186
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• 1986

폐(肺)디스토마증(症)의 면역혈청학적(免疫血淸學的) 진단(診斷)에 사용(使用)하는 성충항원(成蟲抗原)을 몇가지 생화학적(生化學的) 방법(方法)으로 분획(分劃)하여 정제항원(精製抗原)으로서의 가치(價値)를 검토(檢討)하고자 하였으며, 실험적(實驗的)으로 폐(肺)디스토마 피낭유충(被囊幼蟲)을 감염(感染)시킨 고양이에서 감염강도(感染强度), 감염경과(感染經過) 및 치료(治療)에 따른 ELISA 항체가(抗體價)의 변동(變動)을 추적(追跡)하였다. 폐(肺)디스토마 조항원(粗抗原)은 ammonium sulfate precipitation, ion exchange chromatography 및 gel permeation을 거쳐 5개(個)의 분획항원(分劃抗原)으로 나누었으며 폐(肺)디스토마 피낭유충(被囊幼蟲)을 60개(個)(60mc군(群)), 30개(個)(30mc군(群)), 15개(個)(15mc군(群)) 그리고 5개(個)(5mc군(群))씩 각각(各各) 고양이 10마리에 경구투여(經口投與)하고, 5마리씩에는 150일후(日後)에 praziquantel을 100mg/kg로 2회(回) 1일(日) 투여(投與)하였으며 혈청(血淸)은 10일(日) 간격(間隔)으로 채취하였다. 항원(抗原)은 $2{\mu}g/ml$의 농도(濃度)로 사용(使用)하고 실험혈청(實驗血淸)은 100배(倍) 희석(稀釋)하여 ELISA법(法)을 실시(實施)하여 다음의 결과(結果)를 얻었다. 1. Ammonium sulfate precipitation에 의(依)해 분회(分劃)된 항원(抗原)들의 양성혈청(陽性血淸)에 대(對)한 ELISA값은 $51{\sim}55%$ ammonium sulfate 농도(濃度)에서의 침전분획(沈澱分劃)(PA2)이 가장 높았고 다음이 $0{\sim}5%$ 침전분획(沈澱分劃)(PA1), $66{\sim}80%$ 침전분획(沈澱分劃)(PA3)의 순(順)이었으며 $81{\sim}90%$ 침전분획(沈澱分劃)(PA4) 및 침전(沈澱)안된 분획(分劃)(PA5)은 ELISA값이 매우 낮았다. 2. PA1, PA2 및 PA3 분획(分劃)들을 DEAE-cellulose column에 통과(通過)시켜 얻은 분획(分劃)들은 ELISA값에서 유의(有意)한 차이(差異)가 없었다. 3. Sephadex G-200 gel을 통과(通過)한 PA1과 PA2 분획(分劃)들은 분자량(分子量)이 큰 배분(部分)(PA1-I, PA2-I)과 분자량(分子量)이 작은 배분(部分)(PA1-II, PA2-II)에서 높은 ELISA갖을 보였으며 PA3 분획(分劃)은 분자량(分子量)이 큰 배분(部分)(PA3-I)에서만 ELISA값이 높게 나타났다. 4. 전기영동(電氣泳動)의 결과(結果) PA1-I 분획(分劃)은 주(主)로 분자량(分子量) $270K{\sim}196K$ dalton의 단백질(蛋白質)로 되어있고 220K dalton의 단백질(蛋白質)이 가장 많았으며 PA2-I 분획(分劃)은 $255K{\sim}225K$ dalton의 단백질(蛋白質)들로, PA3-I 분획(分劃)은 $235K{\sim}240K$ dalton의 단백질(蛋白質)들로 구성(構成)되어 있었다. 그리고 PA1-II 및 PA2-II 분획(分劃)들은 30K dalton의 단백질(蛋白質)로 이루어져 있었다. 5. 폐(肺)디스토마 감영경과(感染經過)에 따른 ELISA값을 보면 감염후(感染後) $10{\sim}20$일(日) 부터 상승(上昇)하여 $140{\sim}180$일(日)에 최고치(最高値)에 달하며 이후(以後) $0.05{\sim}0.1$정도 하강(下降)한 값으로 계속 유지(維持)되었다. 그리고 폐(肺)디스토마 감염강도(感染强度)에 따른 ELISA값의 차이(差異)는 볼 수 없었다. 6. 고양이에 폐(肺)디스토마를 감염(感染)시킨 150일후(日後)에 praziquantel로 치료(治療)하였을 때 60mc 투여군(投與群)은 치료후(治療後) 150일(日)까지 양성범위(陽性範圍)의 ELISA값을 유지(維持)하였으나 치료전(治療前)에 비(比)하여는 유의(有意)하게 ELISA값이 하강(下降)하였다. 30mc, 15mc 및 5mc 투여군(投與群)의 경우에는 치료후(治療後) $60{\sim}80$일(日)에 ELISA값이 피낭유충(被囊幼蟲) 투여전(投與前)과 비슷한 수준(水準)으로 떨어졌다. 7. 각(各) 항원(抗原)에 따른 ELISA값은 PA1-I 분획항원(分劃抗原)이 가장 높았고 PA2-I 분획항원(分劃抗原)이 다음이었다. PA1-I, PA2-II 및 PA3- I 분획항원(分劃抗原)들은 서로 비슷한 ELISA 값으로 그 다음이었으며 조항원(粗抗原)이 가장 낮은 값을 나타내었다. 특(特)히 PA1-II 분획(分劃)은 감염초기(感染初期)부터 ELISA값이 급격(急激)히 상승(上昇)하여 감염(感染) $20{\sim}30$일후(日後)에는 양성범위(陽性範圍)의 값을 나타내었다. 그리고 Praziquantel로 치료(治療)한 후(後)의 ELISA값은 각(各) 항원(抗原)에 따라 차이(差異)를 볼 수 없었다.

• Advances in Traditional Medicine
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• 제3권2호
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• pp.90-99
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• 2003

There are several data in the literature indicating a great variety of pharmacological activities of Polypodium genus, which exhibit antiinflammatory and immunomodulatory activities. Since one of our main interests is to obtain natural immunoregulatory agents devoid of pharmacological adverse effects, we used flow cytometry analysis to highlight relative contributions of a water-soluble fraction of different concentrations of Polypodium rhizome extracts on lymphocyte subpopulations, NK and LAK activity. To measure their potential immunoregulatory activity a T cell proliferation assay in response to phytohemaglutinin (PHA) and mixed lymphocyte reactions were chosen. As a confirmatory bioassay we studied the effect of our extracts on CD45RO and CD95 antigen expressions. The results indicate that CD95 expression dramatically increases after peripheral blood lymphocyte activation and treatment with Polypodium leucotomus, cambricum and vulgare extracts, suggesting a powerful intrinsic pro-apoptotic effect.