DNA 함량 조사는 진화의 유전적 기작을 예측하여 종분화를 파악하게 한다. 본 연구의 목적은 참전복(Haliotis discus hannai)의 DNA 함량을 측정하고 유세포분석기(flowcytometry)로 고정(fixation) 없이 DNA 함량 측정에 최적인 조직들을 파악하는 것이다. DNA 함량 (pg nucleus-1)에 있어, 원생생물에 오염된 아가미조직(2.5±0.08)은 3.2±0.02 pg nucleus-1의 DNA 함량을 보인 근육조직과 외투막조직에 비하여 유의하게 낮았고(p<0.05) standard reference보다도 낮은 반면, 근육조직과 외투막조직은 standard reference보다 높았다. 본 연구 결과들을 고려 시, 참전복에서 고정 없이 유동세포분석에 적절한 조직은 근육과 외투막이며 본 연구에 적용된 고정 과정이 없는 유세포분석법은 참전복 DNA 함량 분석 시 정확하고, 신속한 방법임이 판명되었다.
Kim, In-Cheul;Han, Deug-Woo;Lee, Sung-Won;Ryu, Jae-Weon;Choi, Eun-Ji;Son, Jung-Ho
Reproductive and Developmental Biology
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제32권2호
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pp.123-126
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2008
The objective of this study was to determine the potential hazardous effects of sorting process by flowcytometry on the quality of boar spermatozoa by flowcytometer. Freshly collected boar semen was diluted and divided into two groups; control none sorted and sorted. Sperms in sorted group were processed with flowcytometer for cell sorting with $100\;{\mu}M$ nozzle under the 20 psi pressure. Measurements on each parameter were made at two time points, 0hr (right after sorting) and 24 hr post sorting. Although there was a tendency of lower viability in sorted group than none sorted control group, the percentage of live cells in control ($75.83{\pm}6.92\;&\;59.53{\pm}10.34$) was not significantly different from sorted ($59.70{\pm}7.37\;&\;43.97{\pm}3.76$) at both 0 and 24 hr post sorting. However, sorted sperm showed significantly lower mitochondrial function compared to the control at both 0 h ($79.37{\pm}3.22\;vs.\;63.50{\pm}10.05$) and 24 hr ($67.27{\pm}3.22$ vs. $46.97{\pm}5.37$) time points (p<0.007). Sperm DNA fragmentation rate was significantly lower in control ($22.0{\pm}7.04$) than that of sorted ($32.27{\pm}7.49$) at 24 hr time point (p<0.0002). Taken together, these data suggested thatsorting process by flowcytometer may have influenced sperm motility rather than viability. Also high speed sperm sorting by flowcytometer has significant effects on DNA fragmentation on elapsed time after sorting.
목적 : 본 연구는 암환자 및 암의 유형에 따라 중요한 종양억제 조절인자로 알려져 있는 모노카인을 flowcytometry를 이용하여 분석, 비교하고자 하였다. 방법 : 연구대상은 고형종양(solid tumor)으로 진단받은 33세에서 76세 사이의 암환자 30명(유방암, 난소암, 폐암, 위암)을 대상으로 말초혈액 단구의 intracellular monokine 중 $TNF{\alpha}$, MIG, MIP를 분석한 유사실험설계 연구이다. 연구결과 : 암환자 군에서의 $TNF{\alpha}$, MIG, MIP 수치는 대조 군인 정상 군에 비해서 유의하게 증가되었으며 특히, 유방암과 난소암 환자 군에서의 $TNF{\alpha}$ 수치는 폐암과 위암의 대상자에 비해 의미 있는 차이를 보여주었다. 논의 : 본 연구에서 제시된 암환자 군에서의 모노카인 수치는 선행연구의 결과와 통일하게 종양 대상자의 면역에 중요한 역할을 하는 것으로 규명 되었으나, $TNF{\alpha}$는 고형종양 중에서도 여성생식기계 암환자 군에서 더 증가하였다. 이에 따라 종양 유형에 따른 모노카인의 역할과 호르몬과의 상호작용기전 규명에 대한 추후 연구가 필요하다.
정교배체인 각시붕어, Rhodeus uyekii (♀)${\times}$떡납줄갱이, R. notatus (♂) 잡종, 그리고 상반교배체인 떡납줄갱이 (♀)${\times}$각시붕어(♂) 잡종을 대상으로 혈액도말을 통한 적혈구 크기, flowcytometry를 통한 세포유전학적인 형질 및 truss dimension과 classical dimension에 의한 외부 계측형질에서의 특성을 부모종간의 차이를 비교하였다. 각시붕어와 떡납줄갱이의 정교배체 및 상반교배체의 계측형질은 일반적으로 이들 유도시 사용된 모계와 부계 종의 중간을 보였다. 정교배체는 14개의 계측형질이 부계의 형질과 유사하였으며 7개의 계측형질이 모계의 형질과 유사하였다. 상반교배체의 경우, 13개의 계측형질이 부계의 형질을, 5개의 계측형질이 모계의 형질과 유사하였다. 정교배체와 상반교배체의 체색소 분포는 중간을 보이나 양친 종을 닮게 나타났다(P<0.05). 적혈구 크기와 DNA 함량은 정교배체와 상반교배체 모두 모계의 적혈구 크기 및 DNA 함량을 따르는 경향이 나타났다(P<0.05). 본 연구에서 파악된 각시붕어와 떡납줄갱이의 잡종 계측형질 및 세포유전학적인 형질은 납자루아과의 관상어 개발시 종간 구별에 유용할 것이다.
일산화질소 (NO) 는 면역계에서 세포내 외의 신호전달에 관여하는 물질로 생물의 생리적, 병리학적 기작을 조절한다. 본 연구는 바지락 혈구의 NO 농도 측정을 위해 4,5-diaminofluorescein diacetate (DAF-2 DA) 를 이용한 DAF assay의 적용이 가능한지 확인하고자 화상분석법, 형광흡광도 측정법 및 유세포분석 기법 등을 이용하였다. 연구결과 인위적인 바지락 혈구의 NO 생성을 위해 L-arginine을 첨가한 경우 대조구에 비하여 NO 생성이 유의적으로 증가하였고, 반대로 NO 저해제인 L-NAME를 첨가한 경우 NO 생성은 급격히 감소하였다. 이러한 결과는 본 조사에 이용된 화상분석법, 형광흡광도 측정법 및 유세포분석 기법 등 모든 조사 방법에서 동일하게 확인되었다. 특히 3가지 측정 방법 중 유세포 분석법은 측정의 신속성, 신뢰성 및 정확성을 담보할 수 있는 유용한 방법으로 판단된다. 따라서 유세포 분석기를 이용한 NO 측정은 향후 바지락의 생리적 병리적 특성을 확인하는데 유용한 마커로써 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
Background : Mesenchymal stem cells (MSCs) are present in most of the tissue matrix, taking part in their regeneration when injury or damage occurs. The aim of this study was to investigate the presence of cells with pluripotential characteristics in human subchondral bone and the capacity of these cells to differentiate to osteoblast. Methods : Human subchondral bone were digested with collagenase. Isolated cells were cultured with a-MEM, 15% FBS, 10-8M dexamethasone and 50 ng/mL ascoric acid. Cells from 0 day(isolated cells), 7 day (first subculture) and 14 days (third subculture) were used to carry out phenotypic characterization experiments flowcytometry analysis with 11 monoclonal antibodies) and osteogenic differentiation experiments. Osteogenic differentiation of cells was assessment by quantification of bone extracellular matrix components by following analysis: alkaline phosphatase(ALP) stains to detect ALP activity, RT-PCR and western blot to detect osteocalcin (OCN), osteopontin (OPN) and type I collagen(Col I), and Alizarin red stains to detect calcium deposition. Results : Flowcytometry analyses showed that in our population more than 98% of cells were positive for MSC markers: SH-2(CD105, 99%), CD29 (95%), CD73 (95%). Cells were negative for hematopoietic markers (CD11b, CD34, and CD45). Furthermore, cells showed positive stain to multipotent markers such as CDl17 (c-kit) (15.1%), and CD166 (74.9%), and cell adhesion molecules such as CD54 (78.1%) and CD106 (63.5%). The osteogenic specific marker analyses showed that the culture of these cells for 7 and 14 days stimulates ALP, OCN, OPN and Col I synthesis by RT-PCR and Western blot analysis. Also, after 14 days in the culture of MSCs induces mineralization by Arizarin red stain. Conclusion : In this work, we demonstrated a new and efficient method for osteoblastic differentiation of human subchondral bone stem cells. As MSCs takes part in reparative processes of adult tissues, these cells could play an important role in osteogenesis.
Lee, In Yong;Lee, Joonhee;Park, Weon Seo;Nam, Eui-Cheol;Shin, Yung Oh;Choe, Jongseon
IMMUNE NETWORK
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제1권1호
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pp.26-31
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2001
Background : Follicular dendritic cells (FDCs) play key roles during T cell-dependent humoral immune responses by allowing antigen-specific B cells to survive, proliferate, and differentiate within the FDC networks of secondary follicles, i.e., germinal centers (GC). Methods: A novel monoclonal antibody, 3C8, was generated by immunizing with an FDC line HK, in order to understand the molecular signals involved in the FDC-B cell interactions in the microenvironment of the GC. Results: The 3C8 antibody did not bind to mononuclear cells, including T cells, B cells, and monocytes. Murine L929 and human skin fibroblasts exhibited no or little reactivity to 3C8. However, 3C8 specifically recognized HK cells by flowcytometry. Furthermore, the antigen recognized by 3C8 was restricted to the GC of the human tonsil. Dendritic networks of the GC were intensely stained by 3C8, but cells outside the GC were not. Conclusion: Our results suggest that the antigen 3C8 may play some unique role on FDCs during the GC reactions.
The study examines the anti-cancer effects of the hot water extract of Mylabris phalerata(MP) using SNU-C5 cell lines. Microscopic analysis showed that 12 hours after MP treatment, the number of dead cells increased prominently. Significant cell death was observed 12, 24, and 48 hours after MP treatment through trypan blue exclusion testing. This suggests that MP is time-dependently cytotoxic. Mitotracker Red CMXRos staining and flowcytometry revealed that MP decreased mitochondrial membrane potentials. The absence of peaks on PI staining showed that DNA damage occurred in MP treated cells. Taken together, measurements suggest that MP has a strong anti-cancer effect on SNU-5 cell lines, and that this is likely to be due to the destruction of mitochondria and DNA damage.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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