젖산균을 접종하여 감귤 분쇄액을 발효시켜 얻은 감귤발효물의 어류양식 사료 첨가제로의 가능성을 넙치(Paralichthys olivaceus) 양식에서 검토하였다. 김치에서 항균활성이 우수한 젖산균 W-44를 분리한 후 16S rDNA 염기서열 분식을 통하여 Lactococcus lactis W-44로 동정하였다. L. lactis W-44를 이용하여 감귤 분쇄액 발효를 수행한 결과, 생리활성이 우수한 무배당체 flavonoids인 naringenin, hesperitin의 함량이 각각 약 10과 6배 증가함을 확인하였다. L. lactis W-44를 이용하여 발효된 감귤발효액을 양식넙치의 사료첨가제로 투여한 결과, 감귤발효액을 투여하지 않은 대조구의 평균 전장 및 체중 증가율과 현격한 차이가 있었다. 또한 0.2% (v/v)의 감귤발효액을 투여한 실험군에서 넙치의 성장이 가장 우수한 것으로 나타났다. 이러한 결과로부터 젖산균의 감귤발효산물을 넙치 양식에서 기능성 사료첨가제로 사용할 수 있는 가능성을 확인하였다.
For the development of probiotics in aquaculture of marine organisms, three strains having psychrophilic and salt tolerant characteristics were isolated from Kimchi. Amng the isolated strains. MG19, MG89 and MG208 were identified as Lactobacillus brevis, Enterococcus faecium and Lactobacillus plantarum, respectively. The neutralized culture broth of isolated strains were tested in order to evaluate the antibactrial activity, 조초 showed high antibacterial activity against Edwardsiella tarda, Vibrio cholerae andPseudomonas fluorescens. In mixed culture of pathogens and isolated strain,pathogens were signifi-cantly inhibited after 2 days of cultivation but the isolated strains showed normal growth. When the Edwardsiella tarda was cultured with three isolated strains, its growth was completely inhibited after 254 hours of cultivation. The effect of isolated three strains as probiotics was investigated based on the changes in body weight of aquacultured flounder. After 50 days feeding trial, it was found that the mean body weight gain of the tested group fed freeze-dried isolated cells was significantly greater than that of the control group. These results suggest that these isolated strains can play an important role as probiotics in aquaculture.
제주도내 넙치양어장에 빈발하여 피해를 입히는 에드와드병의 원인균인 Edwardsiella tarda의 출현 시기와 분포를 알기 위하여, 1997년 6월부터 1998년 5월가지 제주도내 5개 넙치양어장에서 사용하고 있는 해수(주입수, 사육수, 배출수)와 사육중인 넙치의 장기조직 (간장, 비장, 신장, 장)을 조사하였다. 조사 방법은 해수인 경우는 DSSS배지에 직접 도말하는 방법과, 증균 배양후 도말하는 방법으로 균수를 계수하였고, 장기 조직은 각 장기를 호모게나이져 한 후 10배 희석계열을 만들어 DSSS한천배지에 도말하고 균수를 계수하였다. 그 결과를 요약하면 5개 넙치양어장의 해수에서 E. tarda의 검출은 주입수에서는 1997년 7월, 9월, 11월과 1998년 2월, 3월, 4월에 검출되었고, 사육수 및 배출수에서는 연중 검출되었으며, 특히 고수온기인 6월에서 9월 사이에 다른 달에 비하여 검출량이 높게 나타났다. 양어장에 따른 장기조직 내에서 E. tarda의 분포는 순환율이 낮고, 배설물과 찌꺼기 배출이 잘 되지 않은 장타원형 수조인 B양어장에서 검출량이 높게 나타났으며, 순환율이 높고 유기물 배출이 잘되는 A양어장은 전혀 검출이 안 되었으며, 동일조건인 양어장에서는 낮게 나타났다. 넙치 장기조직에 따른 E. tarda의 검출은 간장과 장에서 대체로 검출량이 높게 나타났으며, 특히 고수온기인 6월과 9월 사이에 높게 검출되었다.
본 연구에서는 넙치(Paralichthys olivaceus)에서 N-(4-(4-Fluorophenoxy)-3-methylphenyl) acetamide 주사 투여에 따른 넙치 비장의 NK cell 활성을 평가하기 위하여 120, 150, 200 mg/kg 용량으로 설정하고 3일에 1회, 30일 동안 총 10회의 주사를 투여하였다. 표적세포(Target cell)로는 쥐의 임파종 세포인 YAC-1 cell과 넙치의 HINAE cell을 사용하였고, 넙치 비장의 NK cell과의 공배양 시간은 4시간과 18시간을 선정하여 실험을 실시하였다. YAC-1 cell을 사용하여 실험의 경우 4시간과 18시간 공배양 실험 모두 200 mg/kg 용량 구간의 실험군에서 가장 높은 세포독성을 대조군 대비 최대 3.06배 높은 세포독성을 보였다. HINAE cell을 사용한 실험의 경우 4시간 공배양한 실험에서만 유의적인 차이를 보였으며, YAC-1 cell과 마찬가지로 200 mg/kg 용량 구간의 실험군에서 가장 높은 세포 독성을 보여 대조군 대비 2.3배 높은 세포독성을 보였다. 추가적으로 넙치의 두신 조직에서 IL-12b의 발현량을 확인하였고, 세포독성 실험과 일치하는 결과를 보였고, 200 mg/kg 용량 구간의 실험군에서 가장 높은 발현량을 보여 대조군과 비교하여 6.62배 높은 수치를 보였다. 이러한 결과는 N-(4-(4-Fluorophenoxy)-3-methylphenyl) acetamide가 넙치의 NK cell 활성에 영향을 줄 수 있다는 것을 보여준다.
2003년 북제주 지역의 육상양식장에서 양식중인 넙치에서 새로운 타입의 스쿠티카섬모충을 분리하였다. 이 충은 환경에 따라 ciliate와 cyst로 변태하며 장기간 생존하였는데, ciliate stage의 크기는 영양상태가 양호한 시기 기준 평균 길이 41.8, 폭 21.0 ${\mu}m$ 이었으며, cyst stage는 평균 길이 17.0 ${\mu}m$, 폭 13.5 ${\mu}m$ 이었다. 변태하는 주 원인은 먹이 양이었다. 먹이가 부족하면 cyst로 변태하여 장기간 생존이 가능하며, 먹이가 풍부해지면 ciliate로 재변태하여 활발히 증식하였다. In vitro 배양시험 결과 MS BHI 배지에서 비브리오균 (V. lentus)을 먹이로 하여 15$^{\circ}C$에서 최고 2.9${\times}$105 ${m\ell}^{-1}$의 고밀도로 배양되었다. 환경에 대한 적응시험 결과 ciliate는 염분농도 1-55 ppt, 온도 2.5-30$^{\circ}C$, pH 6-9 범위에서 증식이 가능하였다. 특히 0$^{\circ}C$에서도 7일 이상 장시간 생존이 가능하여 환경에 대한 적응력이 매우 뛰어났다. cyst는 먹이가 없는 상태에서 장시간 생존이 가능하였는데, 5$^{\circ}C$에서는 320일 동안 생존하였으며 온도가 높아질수록 생존기간은 짧아졌다. 화합물을 이용한 in vitro 구제시험에서는 포르말린과 과산화수소 모두 200 ppm/1시간 약욕으로 구제효과가 있었으나 화합물의 약욕농도와 시간에 따라 효과가 달랐다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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