• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제9권5호
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• pp.383-388
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• 2004

The conversion of a cellulose-producing cell ($Cel^+$) from Gluconacetobacter hansenii PJK (KCTC 10505 BP) to a non-cellulose-producing cell ($Cel^-$) was investigated by measuring the colony forming unit (CFU). This was achieved in a shaking flask with three slanted baffles, which exerted a strong shear stress. The addition of organic acid, such as glutamic acid and acetic acid, induced the conversion of microbial cells from a wild type to $Cel^-$ mutants in a flask culture. The supplementation of $1\%$ ethanol to the medium containing an organic acid depressed the con-version of the microbial cells to $Cel^-$ mutants in a conventional flask without slanted baffles. The addition of ethanol to the medium containing an organic acid; however, accelerated the conversion of microbial cells in the flask with slanted baffles. The $Cel^+$ cells from the agitated culture were not easily converted into $Cel^-$ mutants on the additions of organic acid and ethanol to a flask without Slanted baffles, but some portion of the $Cel^+$ cells were converted to $Cel^-$ mutants in a flask with slanted baffles. The conversion ratio of $Cel^+$ cells to $Cel^-$ mutants was strongly re-lated to the production of bacterial cellulose independently from the cell growth.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XIII)
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• pp.253-257
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• 2003

본 연구에서는 담자균류 중에 항암효과가 입증된 Coriolus versicolor의 균사체 생육과 다당체 생성에 유리한 배지를 선정하기 위하여 flask culture를 통하여 검토하였다. 임의의 배양조건 $27^{\circ}C$, 200rpm을 선택해 여러 탄소원과 질소원을 검토하여 각각 glucose와 yeast extract를 선택하였다.

• KSBB Journal
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• 제8권4호
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• pp.382-389
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• 1993

초산이온이 대장균 성장을 저해하는 현상을 규명 하기 위해서 M9 배지, LB 배지를 사용해서 플라스 크, 발효조 배양을 수행하였다. 대장균의 초산 생성 은 높은 포도당 초기 농도, LB 배지와 같은 복합 배 지에서 활발하였고, 플라스크 배양과 같은 pH 조절 이 되지 않는 배양방법에셔는 초산의 생성에 따른 pH 감소에 따라 세포성장이 많이 저해되었다. 초산 을 외부에서 첨가하여 세포성장에 마치는 영향을 조 사하여 보았는데 LB 배지를 사용한 플라스크 배양 에서는 첨가된 초산의 농도가 2g/l 이상, M9 배지 를 사용한 플라스크 배양에서는 초산의 농도가 4g/l 이상, 그리고 M9 배지를 사용한 발효조 배양에 셔는 8g/l 이상에서 초산의 성장 저해효과가 나타 다. LB 한천 배지를 볕에 깐 LB 액체 배지의 플라스 크 배양을 수행하였다. LB 한천의 양이 증가함에 따라서 한천에서 포도당의 방출이 일어나 최종 대장 균 세포 O.D.가 증가하였다.

• 생명과학회지
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• 제12권5호
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• pp.577-583
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• 2002

$\beta$-glucuronidase 유전자를 형질전환한 담배에서 여러 조직중에서 가장 activity가 높은 줄기에서 현탁세포를 유도하여 생장 및 발현 양상을 조사하였다. Flask culture와 2.5 L bubble column culture시 세포의 성장에는 큰 차이가 없었지만 $\beta$-glucuronidase의 발현은 bubble column culture시 약 2850 U/mg으로 95배 향상되는 결과를 나타내었다. 하지만 두 경우 모두 $\beta$-glucuronidase의 생산량이 증가와 감소를 반복하는 양상을 나타내었다. 이것은 외래 단백질의 생산과 파괴가 반복적으로 일어나는 것으로 추정이 된다. 또한 bubble column culture의 생산성을 향상시키기 위해 중요한 영양분인 sucrose을 30 g/L로 두 번 첨가한 경우, 다른 영양분의 고갈로 인하여 세포의 최종 생산량은 향상되지가 않았고 $\beta$-glucuronidase는 안정적으로 생산되었지만 최종 생산량은 향상되지가 않았다. 하지만 세포의 크기가 감소하여 배양기 운전이 쉬워지는 장점이 있었고 이것은 세포의 고농도 배양을 통한 재조합 단백질 생산성을 향상시키는 유리하게 작용할 것이다.

• KSBB Journal
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• 제11권2호
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• pp.254-261
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• 1996

수두 바이 러스(Varicella-zoster virus, VZV) 백신을 생산하기 위하여 약독화된 수두 바이러스 주인 Oka 주를 사용하여 정상세포인 인체 폐세 포(human lung fibroblast cells)로부터 수두 바이 러스 생산조건을 검토하였다. 숙주세포의 배양을 위 한 최적 성장배지로는 DMEM이 조사된 배지 중에 서는 가장 좋음을 알 수 있었으며 숙주세포의 성장율은 세포 age의 지표인 population doubling level (PDL) 이 46 이상인 경우 낮아지는 것무로 확인되 었으며 따라서 수두바이러스 생산을 위해서는 PDL 4 46 이하의 young cell을 사용해야 할 것으로 사료된 다 한편 수두바이러스 생산을 위한 최적 증식조건 으로는 배양온도 $37^{\circ}C$, 혈청농도 2%, MOl 1:5였다. 숙주세포를 대량배양하기 위한 기본조건을 검토 하기 위하여 미 럽담체 (Cytodex-3)를 이용한 spm­n ner flask culture를 시행하였다. 미럽담체에서의 숙 주세포 성장은 T -flask와 비하여 별다른 차이가 없었으나 VZV의 증식은 T-flask 배양에서보다 훨씬 낮았다. 이는 미립담체배양에서의 높은 전단응력 과 미립담체끼리의 영김현상 때문으로 생각된다.

• KSBB Journal
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• 제13권3호
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• pp.231-237
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• 1998

세계보건기구 (WHO)가 백신 생산에 권장하고 있는 표준세포 주인 Vero 세포에 약독화 일본뇌염바이러스인 SA14-14-2 ( (PDK)를 연속 계대배양을 통해 적응(adaptation)시켜, tIter가 $10^7$pfu/mL을 넘는 SA-14-14-2(Vero)을 분리하였다 바이러스 배양 최적온도는 $35^{\circ}C$이며, T -flask에서 배양된 바이러스의 최고 tIter는 감염 후 4일째에 $4\times10^7$ pfu/mL로 관찰되었다. 또한 무혈청배지에서도 바이러스 증식이 활발하여 2% 혈청이 보충된 정우와 거의 비슷한 바이라스 tIter를 보였다. 바이러스 대량 배양을 위해 roller bottle culture와 미 립 담체 플 이용한 spinner flask culture 가능성에 대하여 고찰하였다 바이러스 감염을 위한 미립담체에서의 Vera cell monolayer는 초기 세포 농도 $4\times10$ cells/mL로 접종하여 50 rpm에서 7일간 배양하여 얻을 수 있었다. 바이러스의 roller bottle 배양이 spinner flask 배양보다 바이러스 tIter변에서 2배 내지 3배 높 았고, $10^7$pfu/mL을 넘는 배양 기간도 하루 죄었다. 하지만 두 배양 방법 모두 T -flask 배양에서와 같이 무혈청 배지를 사용 하여도 바이라스 증식이 활발했고, 최고조의 tIter를 보이는 배 양기간은 감염 후 2일째로써 T -flask 배양에서 보다 2일 빨랐다. Roller bottle culture의 경우, 감염 후 3일부터 17일까지 2 일 간격으로 배양액을 무혈청 EMEM으로 100% 교체하면서 매 양을 지속한 결과 3일부터 9일까지 $10^7$pfu/mL을 념는 tIter가 유지되는 것이 확인되어 바이러스의 multi-harvest가 가능한 것 로 고찰되었다. 상기의 결과는 생산성 면에서 매우 유리한 결 과로 제품의 생산 단가플 낮추고 작업 노력을 절감하는 기대 효 과가 클 것으로 예측된다.

• 한국균학회지
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• 제27권1호통권88호
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• pp.1-9
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• 1999

느타리버섯 8품종의 균사생장은 $25{\sim}30^{\circ}C$의 온도 범위와 $5.5{\sim}6.5$의 pH 범위에서 가장 우수하였다. 영양원의 선발시험에서 탄소원으로서는 황백당, 밀가루 및 옥수수가루가, 그리고 질소원으로서는 대두분이 공시균주의 균사생장이 가장 우수하였다. 농업적으로 이용성이 우수한 황백당 3%, 대두분 0.3%, 인산칼륨 0.05%, 황산마그네슘 0.05%를 배지 조성으로 하는 농업용 액체배지를 선발하였다. 삼각플라스크 배양에서는 250 ml의 erlenmeyer flask에서 보다는 250ml의 shake flask에서 직경 6 mm의 균사절편을 2개 접종하여 배양액량 100ml에서 배양했을 때 공시균주의 균사체 생산이 우수하였다. 그리고 erlenmeyer flask에서 배양방법을 달리하여 느타리버섯의 균사를 배양하였을 때, $45^{\circ}$ 경사배양한 처리구에서 균사체 생산이 가장 우수하였으며, 길이 $50mm{\times}$ 직경 10mm의 유리막대를 넣고 배양한 처리구에서는 균체량이 가장 적었지만 펄프형의 균사생육을 유도할 수 있었다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2000년도 춘계학술발표대회
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• pp.235-238
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• 2000

Paecilomyces japonica의 균체 생육 및 다당체 생성에 미치는 기본배지 및 물리적인 조건에 대한 영향을 조사하였다. 기본배지로는 균체량과 다당체 생성이 가장 좋은 YMP medium로 결정하였고 배양온도는 $27^{\circ}C$, pH는 9, 접종량은 2%로 선택하였다.

• KSBB Journal
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• 제19권3호
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• pp.241-244
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• 2004

진탕플라스크 배양액의 균 증식도를 자동측정하기 위하여 자동화 FIA장치를 경제적으로 제작하였으며, 이를 이용하여 대장균을 Nutrient broth 배지에 접종하여 배양하면서 그 증식도를 자동측정하였다. 멸균 NB를 이송용액으로 하고 10분 간격으로 자동측정하였을 때 큰 오차 없이 증식양상을 세밀하게 측정할 수 있었다. 증류수를 이송용액으로 사용한 경우에는 NB를 이송용액으로 사용한 경우에 비하여 측정오차가 더 컸으며, 특히 배양후반부에서의 오차가 크게 나타났다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제5권3호
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• pp.187-191
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• 2003

This paper reported the establishment of mass production system of adventitious roots of Eleutherococcus sessiliflorus through the shake flask and bio-reactor culture. Induction of adventitious roots was started from the explants of germinated somatic embryos on half-strength Murashing and Skoog (MS) solid medium. The frequency of adventitious root formation was better in the explants comprising the basal hypocotyl parts than root explants alone. Among the different auxins tested (NAA, IBA and IAA), frequency of adventitious root induction was highest on medium with 0.5 mg/L NAA, and produced $16.3\pm1.9$ roots per explant. In shake-flask culture, deletion of $NH_4NO_3$ of MS medium was effective for induction of adventitious root compared with both full and half-strength MS media. Fresh weight increase of induced adventitious roots was performed well in medium with 0.5 mg/L IBA. When adventitious roots produced in shake-flask culture were transferred to 10-liter bioreactor, 5.5 times of fresh weight increase was gained after one month of culture. HPLC analysis revealed that the amount of eleutheroside E and E1 was higher in in vitro cultured adventitious roots than the 3 year-old field cultivated root barks of Eleutherococcus sessiliflorus. The content of eltutheroside B was much lower in adventitious roots than that of field cultivated one.