흡착제 생산균주를 선별하기 위하여 토양시료에서 분리한 홉착제 생산균주중 가장 뛰어난 흡착물질을 생산하는 균주, SK3l을 선별하였으며 분리균주 SK3l은 Bacilus속으로 동정되었다. Bacillus sp. SK3l에 의하여 생산된 흡착물질(생물흡착제 SK3l)은 ethanol 침전과 cetylpyridinium(CPC)침전을 통하여 정제하여 아연과 납 이온에 대한 흡착특성을 조사하였다. 생물흡착제 SK3l의 아연과 납 이온의 흡착량은 각각 52 mg/g과 112 mg/g이었다. Bacillus sp. SK3l 균주가 흡착제를 생산하기위한 flask수준에서의 배양조건들이 조사되었다. 흡착제 생산을 위한 최적 pH와 최적온도는 각각 7.5와 $30^{\circ}C$로 나타났다. 흡착제 생산시 주요한 탄소원과 질소원은 glucose와 ammonium nitrate이었다. 최적화된 배지에서의 흡착제 생산은 기초배지에서 보다 약 3배 증가하였다. Jar fermentor배양에서 배양 60시간에서 가장 많은 흡착제를 생산하였으며, 흡착제의 생산량은 9.2 g/$\ell$이었다.
젓갈에서 분리된 Lactococcus lactis SA72균주로부터 유용 박테리오신인 lacticin SA72의 생산을 최적화하기 위해 배양용 배지 및 배양조건을 검토하였다. 유산균의 대표적인 배양 배지인 BHI, MRS, Ml7배지에 대해서 검토한 결과, 이중 MRS배지가 최적 배지로 결정되었다. 이 MRS배지에 0.5% glucose를 첨가한 경우, 더 높은 활성을 얻을 수 있었다. pH의 영향을 검토하였을 때는, 초기 pH에서는 pH 7이었고, 발효조에서의 배양기간 동안 pH 6으로 조절할 때가 높은 활성을 보였다. 배양온도는 $32^{\circ}C$로 유지할 때가 활성이 우수하였다. 회분식 배양에서는 최대 3,200AU/m1을 얻을 수 있었으며, 유가식 배양으로 10g/1 glucose를 주기적으로 공급하였을 때 , 약 6,400 AU/ml로 가장 높은 활성을 얻을 수 있었다.
Kim, Byung-Chun;Deshpande, Tushar R.;Chun, Jongsik;Yi, Sung Chul;Kim, Hyunook;Um, Youngsoon;Sang, Byoung-In
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권2호
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pp.189-194
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2013
In a study of hydrogen-producing bacteria, strain T4384 was isolated from rice field samples in the Republic of Korea. The isolate was identified as Enterobacter sp. T4384 by phylogenetic analysis of 16S rRNA and rpoB gene sequences. Enterobacter sp. T4384 grew at a temperature range of $10-45^{\circ}C$ and at an initial pH range of 4.5-9.5. Strain T4384 produced hydrogen at 0-6% NaCl by using glucose, fructose, and mannose. In serum bottle cultures using a complete medium, Enterobacter sp. T4384 produced 1,098 ml/l $H_2$, 4.0 g/l ethanol, and 1.0 g/l acetic acid. In a pH-regulated jar fermenter culture with the biogas removed, 2,202 ml/l $H_2$, 6.2 g/l ethanol, and 1.0 g/l acetic acid were produced, and the lag-phase time was 4.8 h. Strain T4384 metabolized the hydrolysate of organic waste for the production of hydrogen and volatile fatty acid. The strain T4384 produced 947 ml/l $H_2$, 3.2 g/l ethanol, and 0.2 g/l acetic acid from 6% (w/v) food waste hydrolysate; 738 ml/l $H_2$, 4.2 g/l ethanol, and 0.8 g/l acetic acid from Miscanthus sinensis hydrolysate; and 805 ml/l $H_2$, 5.0 g/l ethanol, and 0.7 g/l acetic acid from Sorghum bicolor hydrolysate.
In this work, mass production of Bacillus licheniformis SCD121067 through medium optimization by statistical experimental method was studied. First, galactose, yeast extract and potassium phosphate dibasic were selected as carbon, nitrogen and phosphate sources for mass production of B. licheniformis SCD121067 by using one factor at a time method. Second, according to the result of Plackett-Burman experimental design, key factors was yeast extract and $K_2HPO$. Finally, the response surface methodology was performed to obtain the optimum concentrations of two selected variables. The optimized medium composition consisted of 20 g/L galactose, 36 g/L yeast extract, 0.41 g/L $K_2HPO4$, 0.25 g/L $Na_2CO_3$, 0.4g/L $MgSO_4$ and 0.01g/L $CaCl_2$. Dry cell weight (15.4 g/L) by optimum production medium were increased 10 times, as compared to that determined with basic production medium (1.5 g/L). Fermentation conditions were examined for the mass production of B. licheniformis. The effect of temperature, agitation speed, pH and aeration rate on the mass production of B. licheniformis were also studied in a batch fermenter which was carried out in a 2.5 L bioreactor with a working volume of 1.5 L containing optimized production medium. As a result, dry cell weight of batch culture was 30.7 g/L at $42^{\circ}C$, 300 rpm, pH 8.0 and 2 vvm.
고지혈증 치료제인 lovastatin을 Aspergillus terreus로부터 생산하기 위해 발효조 배양설험에서 교반속도와 pH에 대한 영향올 조사하였다. 최적 교반속도는 400 rpm이었고 pH는 5.8로 유지하였을 때 lovastatin 생산이 최대였으며, 교반속도 보다 pH가 lovastatin 생산에 더 많은 영향을 미치는 것으로 나타났다 L-tryptop뼈n과 L-histi빼le의 첨가시기에 따른 lovastatin 생산량을 실험한 결과, 둘다 발효초기부터 첨가하여 배양하 는 것이 효과적이었다 L-tryptophan을 발효초기에 첨가한 최 적배지와 최적 환경조건인 교반속도 400 rpm, pH 5.8에서 회 분식 배양을 수행한 결과 기본배지를 이용하여 실험한 배양 결과보다 약 10배 정도 많은 836 mg/L이었고, 생산성은 3.5 mg/L.hr였다
본 연구에서는 프로바이오틱 생균인 비스루트균의 최적 배지 탐색을 위해 탄소원, 질소원 그리고 아포형성의 극대화를 위한 인산염의 최적 농도를 검토하였다. 500 mL baffle flask 에서 배양을 실시한 결과, 탄소원 영향 실험에서는 포도당 2%(w/v)와 전분 2%(w/v)가 첨가되었을 때 최대 총균수$(4.7{\times}10^9\;CFU/mL)$와 활성아포수$(4.3{\times}10^9\;CFU/mL)$를 보였으며 아포형성율은 91%이었다. 질소원 영향 실험에서는 대두분이 5%(w/v) 첨가되었을 때 최대 총균수$(5.9{\times}10^9\;CFU/mL)$와 활성아포수$(5.7{\times}10^9\;CFU/mL)$를 나타내었다. 그리고, 인산염 실험에서는 최대 총균수$(6.3{\times}10^9\;CFU/mL)$와 활성아포수$(6.0{\times}10^9\;CFU/mL)$를 $KH_2PO_4$를 1%(w/v) 첨가되었을 때 얻을 수 있었으며 아포형성율은 95%를 보였다. 5L 발효조에서 최적 배지인 KH5 배지를 이용하여 $32^{\circ}C$의 온도에서 통기량 1 vvm, 교반속도 450 rpm, pH $7.0{\pm}0.1$로 맞추어 회분식 배양을 실시한 결과 최대 총균수는 $3.3{\times}10^{10}\;CFU/mL$을 보였으며 최대 활성아포수는 $3.0{\times}10^{10}\;CFU/mL$을 나타내었고, 아포형성율은 94%를 나타내었다. 이때 아포 생산성은 $5{\times}10^8\;spores/mL/h$이었다.
효모를 이용하여 높은 생산성으로 고농도의 erythritol을 생산하기 위하여 ‘세포 성장단계’와 ‘erythritol 생성단계’로 나누어 2 단계 유가식 배양을 수행하였다. 세포 성장 단계에서는 pH-stat 유가식 배양을 수행하여 3.62 g/L-H의 생산성으로 76 g/L의 균체 농도를 얻을 수 있었다. pH-stat 유가식 배양을 수행하여 고농도의 균체 농도를 얻은 후에 멸균되지 않은 분말형태의 glucose를 발효조에 400 g/L가 되도록 공급하여 세포에 osmotic stress를 가해준 결과 41%의 수율로 187 g/L의 erythritol을 생산할 수 있었으며, 이때의 생산성은 2.79 g/L-h로서 기존에 보고된 어느 결과보다도 높은 값을 얻을 수 있었다. Production phase에서 erythritol 생산에 대한 삼투압의 영향을 알아 본 결과 glucose의 농도가 증가할 수록 생성되는 erythritol 농도가 증가하였으며 세포 농도에 따른 erythritol 생산 수율은 큰 차이는 없었으나 세포 농도가 증가할수록 이에 비례하여 erythritol 생산성이 크게 증가하였다. Erythritol 생산에서 용존 산소량에 관계없이 butyric acid가 생성되었으며 40%의 DO 미만에서는 citric acid가 생성되고, 40% 이상의 DO에서는 gluconic acid가 생성되어 용존 산소량에 의하여 metabolic shift가 유도되었다. 고 농도의 glucose 첨가 후 용존 산소량을 20%로 조절하면서 pH를 3.0으로 낮춘 결과 citrate synthetase의 활성이 억제되어 citric acid가 생성되지 않았으며 gluconic acid 농도는 $KH_2PO_4$에 의하여 증가하고 $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ 또는 $(NH_4)_2SO_4$에 의하여 감소되었다. Butyric acid 농도는 $KH_2PO_4$ 또는 $(NH_4)_2SO_4$에 의하여 감소되었으며 synergic effect에 의하여 억제되었다
영지버섯(Ganoderma lucidum WK-003) 균사체의 액체 배양에 의하여 세포외 생물고분자 물질의 산업적 생산을 위한 최적 조건을 검토하였다. 세포외 고분자물질 생산을 위한 산업용배지의 최적 농도는 molasses 5%와 CSL 2.5%에서 균사체 생장(12.4 g/l)과 균체외 다당체 생산(3.6g/l)이 최대를 나타났으며, 5 l 발효조 배양시에는 균사체 생장이 합성배지(8.1g/l)일때가 산업용배지(7.3 g/l)보다 높게 나타났으나, 균체외 다당체 생산은 합성배지(7.2 g/l)보다 산업용 배지(11.2 g/l)일 때가 더 높게 나타났다. 간 보호 효과는 합성배지와 최적화된 산업용 배지에서 생산된 균체외 다당체를 $CCl_4$ 독성이 유발된 rat에 경구 투여하였을 때 주요 지표를 나타내는 GPT활성은 산업용배지에서 생산된 균체외 다당체 인 경우 704IU/L에서 356IU/L로 낮추었으며, 합성배지에서 생산된 균체외 다당체는 704IU/L에서 349IU/L로 낮춘 결과를 보였다. 따라서 합성배지와 산업용 배지에서 생산된 균체외 다당체의 간 보호 작용은 거의 차이가 없는 것으로 나타났다.
Ampelomyces quisqualis 94013(AQ94013)는 오이 흰가루병에 대한 생물적 방제를 위하여 효과적인 기생균으로 선발되었다. AQ94013균의 대량배양기술을 개발하기 위하여 보리쌀, 쌀, 기장, 현미, 수수, 볍씨의 6종의 곡류를 이용하여 실험하였다. 그 중에서 보리쌀은 AQ94013의 생장과 포자형성에 가장 좋은 배지였다. 대량배양의 최적온도는 $25^{\circ}C$이였으며, $20^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 순이었다. 암배양 보다 광을 하루에 12시간 주기로 조사한 보리쌀배지에서 포자수가 적어서 광은 AQ94013의 포자형성을 억제하였다. 그러나 $30^{\circ}C$에서 형성된 포자는 오이 흰가루병균(Sphaerotheca fusca)에 대하여 30일간 기생력을 유지하였다. 보리 AQ94013의 배양방법은 30l-발효조를 이용하여 쌀분말(40g/l)을 첨가한 보리쌀분말액체배지에서 $25^{\circ}C$에서 5일간 암배양이 포자대량배양에 매우 효과적이었다.
내열성 {\alpha}$-amulase를 생산하는 미생물을 분리하기 위하여 각종 분리원으로 시료를 채취하여 55$^{\circ}C$ 이상에서 생육하고 가장 내열성 {\alpha}$-amulase 생산능이 우수한 균주를 분리, 동정한 결과 thermophilic Bacilus 속으로 추정되었다. 균체생육과 효소생산의 최적온도는 60~$65^{\circ}C$였고, 초발 pH8.0에서 가장 높은 효소생산능을 보였다. {\alpha}$-amulase 생산에 가장 양호한 탄소원은 soluble starch, dextrin, prtato starch, corn starch 등의 다당류이었으며 glucose, fructose 등의 단당류에서는 효소생산이 미약하거나 억제를 받았다. {\alpha}$-amulase 생산에 가장 중요한 질소원은 yeast extract이었따. 0.1% $CaCl_2{\cdot}2H_2O$, 0.001%의 Tween-80의 첨가는 {\alpha}$-amulase 생산성을 증가시켰다. 본 공사균이 생산한 조효소액의 특성을 검토해 본 결과, 8$0^{\circ}C$에서 최적 효소활성을 보였으며, 10$0^{\circ}C$에서도 23%의 잔존활성을 나타내었다. 최적 pH는 5.0이었다. $Ca^{2+}$은 효소활성 증진에는 영향을 미치지 않았다. 공시균으로부터 분리한 genomic DNA를 중온성 BAcillus subtilis KCTC 1024에 형질전환시킨 결과, transformant는 wild type에 비하여 약 2배의 효소활성이 증가되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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