(+)-Hernandulcin is a sweet bisabolane-type sesquiterpene first isolated from Lippia dulcis Trev. (Verbenaceae). This oily compound is 1000-1500 times sweeter than sucrose but with poor solubility in water. Microbial transformation was employed to improve its water solubility, and a variety of microorganisms were screened for their ability to convert (+)-hernandulcin to more polar metabolites. Scale-up fermentation with Glomerella cinguiata, a fungal strain, has resulted in the isolation of a more polar metabolite (2).
Background: This experiment aimed at assessing polyphenol-rich plant biomass to use in complete feed making for the feeding of ruminants. Methods: An in vitro ruminal evaluation of complete blocks (CFB) with (Acacia nilotica, Ziziphus nummularia leaves) and without (Vigna sinensis hay) polyphenol rich plant leaves was conducted by applying Menke's in vitro gas production (IVGP) technique. A total of six substrates, viz. three forages and three CFBs were subjected to in vitro ruminal fermentation in glass syringes to assess gas and methane production, substrate degradability, and rumen fermentation metabolites. Results: Total polyphenol content (g/Kg) was 163 in A. nilotica compared to 52.5 in Z. nummularia with a contrasting difference in tannin fractions, higher hydrolysable tannins (HT) in the former (140.1 vs 2.8) and higher condensed (CT) tannins in the later (28.3 vs 7.9). The potential gas production was lower with a higher lag phase (L) in CT containing Z. nummularia and the component feed block. A. nilotica alone and as a constituent of CFB produced higher total gas but with lower methane while the partitioning factor (PF) was higher in Z. nummularia and its CFB. Substrate digestibility (both DM and OM) was lower (P < 0.001) in Z. nummularia compared to other forages and CFBs. The fermentation metabolites showed a different pattern for forages and their CFBs. The forages showed higher TCA precipitable N and lower acetate: propionate ratio in Z. nummularia while the related trend was found in CFB with V. sinensis. Total volatile fatty acid concentration was higher (P < 0.001) in A. nilotica leaves than V. sinensis hay and Z. nummularia leaves. It has implication on widening the forage resources and providing opportunity to use forage biomass rich in polyphenolic constituents in judicious proportion for reducing methane and enhancing green livestock production. Conclusion: Above all, higher substrate degradability, propionate production, lower methanogenesis in CFB with A. nilotica leaves may be considered useful. Nevertheless, CFB with Z. nummularia also proved its usefulness with higher TCA precipitable N and PF. It has implication on widening the forage resources and providing opportunity to use polyphenol-rich forage biomass for reducing methane and enhancing green livestock production.
As a global regulatory gene in Streptomyces, afsR can activate the biosynthesis of many secondary metabolites. The effect of afsR on the biosynthesis of a phenazine metabolite, lomofungin, was studied in Streptomyces lomondensis S015. There was a 2.5-fold increase of lomofungin production in the afsR-overexpressing strain of S. lomondensis S015 N1 compared with the wild-type strain. Meanwhile, the transcription levels of afsR and two important genes involved in the biosynthesis of lomofungin (i.e., phzC and phzE) were significantly upregulated in S. lomondensis S015 N1. The optimization of metal chlorides was investigated to further increase the production of lomofungin in the afsR-overexpressing strain. The addition of different metal chlorides to S. lomondensis S015 N1 cultivations showed that CaCl2, FeCl2, and MnCl2 led to an increase in lomofungin biosynthesis. The optimum concentrations of these metal chlorides were obtained using response surface methodology. CaCl2 (0.04 mM), FeCl2 (0.33 mM), and MnCl2 (0.38 mM) gave a maximum lomofungin production titer of 318.0 ± 10.7 mg/l, which was a 4.1-fold increase compared with that of S. lomondensis S015 N1 without the addition of a metal chloride. This work demonstrates that the biosynthesis of phenazine metabolites can be induced by afsR. The results also indicate that metal chlorides addition might be a simple and useful strategy for improving the production of other phenazine metabolites in Streptomyces.
Kunrak, a type of Korea traditional cheese, is made using Tarak, a yogurt produced with makgeolli as the fermentation source. Kunrak is produced by removing whey from Tarak, followed by drying process for safe storage and consumption over a longer period. In this study, we produced kunrak based on the method described in "Imwonsibyukji". Prepared Kunrak was ripening for 96 hours at 20, 30, and $40^{\circ}C$. In order to study characteristics of Kunrak, physiochemical properties (pH, acidity, water contents) and contents of metabolites (organic acids, sugars, amino acids, and fatty acids) were analyzed. During ripening, water contents decreased. The main organic acids in Kunrak were citric acid and lactic acid, and the main free sugar was lactose. Main amino acids were glutamate and phenylalanine, and main fatty acid was saturated capric acid. At later ripening, all metabolites increased immediately after preparation. The sensory evaluation score of overall preference was highest for Kunrak, which was ripening at $40^{\circ}C$ for 96 hours. This study was aimed to assay metabolites of Kunrak under various ripening conditions. The results provide basic data to produce conditions for standardized manufacturing of Kunrak.
Di- and tri-methylation of lysine 4 on histone H3 (H3K4me2 and H3K4me3, respectively) are epigenetic markers of active genes. Complex associated with Set1 (COMPASS) mediates these H3K4 methylations. The involvement of COMPASS activity in secondary metabolite (SM) biosynthesis was first demonstrated with an Aspergillus nidulans cclA knockout mutant. The cclA knockout induced the transcription of two cryptic SM biosynthetic gene clusters, leading to the production of the cognate SM. Monascus spp. are filamentous fungi that have been used for food fermentation in eastern Asia, and the pigment Monascus azaphione (MAz) is their main SM. Monascus highly produces MAz, implying that the cognate biosynthetic genes are highly active in transcription. In the present study, we examined how COMPASS activity modulates MAz biosynthesis by inactivating Monascus purpureus cclA (Mp-cclA) and swd1 (Mp-swd1). For both ${\Delta}Mp-cclA$ and ${\Delta}Mp-swd1$, a reduction in MAz production, accompanied by an abated cell growth, was observed. Suppression of MAz production was more effective in an agar culture than in the submerged liquid culture. The fidelity of the ${\Delta}Mp-swd1$ phenotypes was verified by restoring the WT-like phenotypes in a reversion recombinant mutant, namely, trpCp: Mp-swd1, that was generated from the ${\Delta}Mp-swd1$ mutant. Real-time quantitative Polymerase chain reaction analysis indicated that the transcription of MAz biosynthetic genes was repressed in the ${\Delta}Mp-swd1$ mutant. This study demonstrated that MAz biosynthesis is under the control of COMPASS activity and that the extent of this regulation is dependent on growth conditions.
Nitrate-nitrite-nitric oxide (NO) pathway is a major alternative source of NO and is essential for NO - dependent physiological functions in body. Food supplements having nitrate/nitrite can improve metabolic syndromes including hypertension through antioxidant activity or vasodilation. The purpose of this study was to observe the effects of fermented garlic (F. garlic) having high concentration of NO2- on changes in blood flow and nitric oxide synthesis in the cerebral cortex of rodents. The generation of nitric oxide detected by a chemi-luminescence detector was higher in F. Garlic compared with NaNO2 solution under artificial gastric juice with pH 2.0. Ether F. garlic or NaNO2 diluted with artificial cerebrospinal fluid was directly applied into around the needle probe of laser Doppler flow meter that was located on epidural surface of the cortex. Direct application of F. garlic resulted in increase of cerebral blood flow detected by a laser Doppler flow meter with a dose-dependent manner. Compared with NaNO2 solution, F. garlic produced changes in cerebral blood flow at lower concentration of NO2-. Pretreatment of methylene blue, a guanylyl cyclase inhibitor prevented upregulation of cerebral blood flow by the treatment of F. garlic. In addition, the application of F. garlic with 250, 500ppm of NO2- caused significantly the production of NO in the cortical tissue but NaNO2 solution with 500ppm of NO2- did not. In summary, these results suggested that F. garlic with high content of NO2- induce increase in cerebral blood flow through nitric oxide-dependent signal pathway.
본 연구에서는 고문헌인 임원십육지의 제조법을 바탕을 이용하여 계피 및 한약재에 누룩을 발효원으로 넣어 발효시킨 음청류인 계장을 제조하였다. 계장은 $10^{\circ}C$, $20^{\circ}C$, $30^{\circ}C$에서 7일간 발효한 후 경시적으로 시료를 채취하여 이화학적 품질특성 및 유기산, 유리당, 유리아미노산 함량을 조사하고 관능평가를 실시하였다. 그 결과 lactic acid, acetic acid, shikimic acid 등의 유기산의 생성으로 인해 pH는 낮아지고 산도는 증가하여 계장의 상큼한 맛과 시큼한 맛이 증가하였다. 전체적인 기호도가 가장 우수한 $20^{\circ}C$에서 3일 발효한 시료는 0.5387 mg/mL lactic acid, 0.3810 mg/mL acetic acid, 0.0016 mg/mL shikimic acid를 함유하였으며, 38.18 mg/mL glucose, 7.99 mg/mL maltose, 52.88 mg/mL fructose, 1.64 mg/mL mannitol을 함유하였다. 아미노산 중에서는 계장의 쓴맛에 영향을 주었을 것이라 여겨지는 tryptophan이 가장 많이 함유되어 있었고 이외에도 asparagines, proline, arginine, aspartate 등의 함량이 높게 나타났다. $20^{\circ}C$에서 3일간 발효한 계장은 36.70 mg/L tryptophan을 함유하고 있었다. 전체적인 유기산, 유리당, 아미노산의 함량은 $30^{\circ}C>20^{\circ}C>10^{\circ}C$ 순으로 나타났다. 관능평가 결과 $10^{\circ}C$에서 3일간 발효한 계장의 향의 기호도가 가장 높게 나타났으며 $20^{\circ}C$에서 3일간 발효한 계장의 맛 기호도와 종합적 기호도가 가장 높은 것으로 나타나 전통 음청류 계장의 재현을 위해서는 제조 후 $20^{\circ}C$에서 3일간 발효하는 것이 가장 우수할 것으로 판단되었다. 따라서 계장의 맛과 관련된 발효 대사물에 관한 본 연구를 바탕으로 계장의 맛과 향을 살리면서 현대인의 입맛에 맞는 다양한 발효조건과 활용방안을 탐색한다면 전통 발효음청류 계장의 대중화가 실현될 것이라 사료된다.
Fructose와 galactose를 배지에 동시에 사용하였을 때 catabolite repression에 의한 PAFS생산성 저해 현상을 극복하기 위해서 본 연구에서는 두 가지 탄소원의 공급량과 유속을 달리하는 유가식 배양으로 PAFS 생산성을 향상시키고자 하였다. 또한 통계적으로 성공률이 매우 높다고 밝혀진 실험방법에 의해 모균주로부터 고생산변이주를 선별하여 생산성이 가장 우수한 것으로 판명된 AP-20 균주를 생물반응기를 이용한 회분식 배양 및 유가식 배양 실험에 이용하였다. 생물반응기에서의 유가식 배양이 회분식 배양에서보다 PAFS생산성이 약 4배 이상 향상되었음을 확인할 수 있었다. 또한 생산균주의 배양생리학적 특성으로서 Pseudomonas aeruginosa는 galactose를 이용해서 세포성장과 이차대사산물 생합성과 관련된 유전자의 발현을 하고 fructose를 이용하여 PAFS를 생합성하는 것으로 추론되며, 너무 느린 탄소원의 공급은 세포성장에 제한요소로 작용하여 이차대사산물의 생합성을 저해하는 것으로 판단되었다. 한편 유가식 배양일지라도 배양 조건에 따라 그 생산성이 뚜렷이 차이가 나는 것으로 관찰되었다 즉 galactos의 초기량이 20g/L이고 fructose 30g/L를 0.032 mL/min의 속도로 공급했을 경우의 PAFS생산량을 100%로 정의했을 때, 초기부터 40 g/L의 galactose가 존재하고 20 g/L의 fructose를 0.032 mL/min의 속도로 공급한 경우에 PAFS생산성이 약 580%향상된 것으로 나타났다.
UDP-glucose는 ${\beta}$-1,3-glucan 합성의 중요한 전구체로 이를 측정함으로써 세포 내의 glucan synthesis 대사의 활성도를 추정할 수 있는 중요한 지표가 됨을 본 연구 결과를 통하여 알 수 있었다. UDP-glucose는 세포 성장기에 다량 생산되다가 ${\beta}$-1,3-glucan 합성하는 시기에 일정한 농도가 되며 ${\beta}$-1,3-Glucan 합성 메카니즘에서 glucose를 운반하는 중요한 역할을 하는 것으로 나타났다. 2단 연속 발효조를 이용하여 세포 성장 발효조와 ${\beta}$-1,3-glucan 생산 발효조에서 UDP-glucose 변화를 관찰하여 ${\beta}$-1,3-glucan 생산시 농도가 높음을 관찰할 수 있었다. ${\beta}$-1,3-Glucan 생산 발효조의 pH를 5.5로 조절함으로써 UDP-glucose의 농도를 증가시킬 수 있을 뿐만 아니라 ${\beta}$-1,3-glucan의 생산 속도를 최적화할 수 있었다.
A dynamic model of lactic acid fermentation using Lactococcus lactis was constructed, and a metabolic flux analysis (MFA) and metabolic control analysis (MCA) were performed to reveal an intensive metabolic understanding of lactic acid bacteria (LAB). The parameter estimation was conducted with COPASI software to construct a more accurate metabolic model. The experimental data used in the parameter estimation were obtained from an LC-MS/MS analysis and time-course simulation study. The MFA results were a reasonable explanation of the experimental data. Through the parameter estimation, the metabolic system of lactic acid bacteria can be thoroughly understood through comparisons with the original parameters. The coefficients derived from the MCA indicated that the reaction rate of L-lactate dehydrogenase was activated by fructose 1,6-bisphosphate and pyruvate, and pyruvate appeared to be a stronger activator of L-lactate dehydrogenase than fructose 1,6-bisphosphate. Additionally, pyruvate acted as an inhibitor to pyruvate kinase and the phosphotransferase system. Glucose 6-phosphate and phosphoenolpyruvate showed activation effects on pyruvate kinase. Hexose transporter was the strongest effector on the flux through L-lactate dehydrogenase. The concentration control coefficient (CCC) showed similar results to the flux control coefficient (FCC).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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