• 한국미생물·생명공학회지
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• 제38권4호
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• pp.379-384
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• 2010

수집한 전통 장류에서 세포외효소(amylase, protease, cellulase, lipase and fibrinolytic enzyme) 분비능이 우수한 미생물을 분리한 후, 16S rRNA 유전자분석과 생리활성 특성을 조사하였다. amylase와 cellulase 분비능은 모든 선발균주에서 표준균주인 Bacillus subtilis KACC 10114보다 높게 나타났다. Protease 분비능은 D2-14균주를 제외한 모든 선발균주에서 활성이 있었으며, lipase 분비능은 D8-8과 K4-1을 제외한 균주에서 활성이 나타났다. 혈전용해 활성은 D8-2를 제외한 모든 선발균주에서 활성이 나타났으며, D8-8과 K4-1이 가장 높은 활성을 나타냈다. 선발균주인 K3-2, K4-1, K11-1-4, K11-1-6, K11-7, K12-3 와K14-9은 그람 양성세균과 그람 음성세균 그리고 효모에서도 높은 항균활성을 나타내었다. 간장 및 된장에서 분리한 균주들을 동정하기 위해 분자수준에서 16S rRNA 유전자 염기서열을 분석한 결과, 거의 Bacillius sp.로 나타났다. 발효과정에서 세포외효소 분비능과 생리활성이 우수한 미생물을 분리, 확보함으로써 전통 장류의 고급화 및 품질향상과 제조공정의 표준화가 가능할 것으로 여겨진다

• Mycobiology
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• 제39권2호
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• pp.125-128
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• 2011

Enzyme activities of Cenococcum geophilum isolates were examined on enzyme- specific solid media. Deoxyribonuclease, phosphatase, and urease were detected in all isolates, whereas cellulase was not detected in any of the isolates. Variations in enzyme activities of amylase, caseinolysis, gelatinase, lipase, and ribonuclease were observed among isolates.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제28권5호
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• pp.739-747
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• 2018

The low solubility and high-cost recovery of Propionibacterium acnes polyunsaturated fatty acid isomerase (PAI) are key problems in the bioproduction of high value-added conjugated linoleic acid (CLA). To improve the solubility of recombinant PAI, six chaperone proteins were coexpressed with PAI. Introduction of GroELS proteins dramatically improved the PAI solubility from 29% to 97%, with increased activity by 57.8%. Combined expression of DnaKJ-GrpE and GroELS proteins increased the activity by 11.9%. In contrast, coexpression of DnaKJ-GrpE proteins significantly reduced the activity by 57.4%. Plasmids pTf16 harboring the tig gene and pG-Tf2 containing the tig and groEL-groES genes had no visible impact on PAI expression. The lytic protein E was then introduced into the recombinant Escherichia coli to develop a cell autolysis system. A 35% activity of total intracellular PAI was released from the cytoplasm by suspending the lysed cells in distilled water. The PAI recovery was further improved to 81% by optimizing the release conditions. The lipase from Rhizopus oryzae was also expressed in E. coli, with an extracellular activity of 110.9 U/ml. By using the free PAI and lipase as catalysts, a joint system was established for producing CLA from sunflower oil. Under the optimized conditions, the maximum titer of t-10,c-12-CLA reached 9.4 g/l. This work provides an effective and low-cost strategy to improve the solubility and recovery of the recombinant intracellular PAI for further large-scale production of CLA.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권6호
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• pp.473-478
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• 1986

미생물에 의한 천연유지의 분해자화과정을 극명함으로써 값싼 유지를 발효원으로서 착용하기 위하여 팜유자화성 유용균주인 Torulopsis candida Y-128과 Acinetobacter calcoaceticus KB-2가 생산하는 리파제의 특성과 이들 균주의 생리적인 특성을 검토하였다. T. candida Y-128은 팜유입자에 부착·자화하며 리파제의 작용에 의해 유리되는 분포화지방산을 포화지방산에 비해 쉽게 자화이용 함으로써 균체증식이 이루어지고 있었다. T. candida Y-128의 리파제는 대부분 균체내에 존재하는데 비해, A calcoaceticus KB-2는 배양시에 균체증식 대수기부터 균체외로 리파제가 생성됨을 알수 있었으며, 리파제에 의해 유리된 포화 지방산도 다른 균주에 비해 자화이용이 용이함을 알 수 있었다. 두 균주는 배양액중에 리파제를 축적하지 않고 균체생육에 필요한 정도를 생산하며 천연중지중 1(3-)-위치의 지방산에 작용하는 위치특이성을 나타내었다. 따라서 두 균주는 천연유지입자에 부착하여 1(3-)- 위치의 지방산을 분해하고, 분해생성물은 지방산대사경로를 거쳐 자화이용되는 것으로 보여진다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권4호
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• pp.604-610
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• 2007

A psychrotrophic strain 7195 showing extracellular lipolytic activity towards tributyrin was isolated from deep-sea sediment of Prydz Bay and identified as a Psychrobacter species. By screening a genomic DNA library of Psychrobacter sp. 7195, an open reading frame of 954 bp coding for a lipase gene, lipA1, was identified, cloned, and sequenced. The deduced LipA1 consisted of 317 amino acids with a molecular mass of 35,210 kDa. It had one consensus motif, G-N-S-M-G (GXSXG), containing the putative active-site serine, which was conserved in other cold-adapted lipolytic enzymes. The recombinant LipA1 was purified by column chromatography with DEAE Sepharose CL-4B, and Sephadex G-75, and preparative polyacrylamide gel electrophoresis, in sequence. The purified enzyme showed highest activity at $30^{\circ}C$, and was unstable at temperatures higher than $30^{\circ}C$, indicating that it was a typical cold-adapted enzyme. The optimal pH for activity was 9.0, and the enzyme was stable between pH 7.0-10.0 after 24h incubation at $4^{\circ}C$. The addition of $Ca^{2+}\;and\;Mg^{2+}$ enhanced the enzyme activity of LipA1, whereas the $Cd^{2+},\;Zn^{2+},\;CO^{2+},\;Fe^{3+},\;Hg^{2+},\;Fe^{2+},\;Rb^{2+}$, and EDTA strongly inhibited the activity. The LipA1 was activated by various detergents, such as Triton X-100, Tween 80, Tween 40, Span 60, Span 40, CHAPS, and SDS, and showed better resistance towards them. Substrate specificity analysis showed that there was a preference for trimyristin and p-nitrophenyl myristate $(C_{14}\;acyl\; groups)$.

• 미생물학회지
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• 제50권2호
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• pp.119-127
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• 2014

남극 로스해의 퇴적물로부터 배양을 통해 분리한 균주의 분류 및 생리학적 특성 분석을 수행하였다. 분리 세균 63균주의 16S rRNA 유전자 염기서열을 이용한 계통분류학적 분석 결과, 이들은 Actinobacteria, Bacteroidetes, Alphaproteobacteria 및 Gammaproteobacteria 내의 21개의 파일로타입(phylotypes)에 속하였다. 98.65% 염기서열 유사도를 기준으로, 약 49%의 균주가 잠재적으로 신종 또는 신속 후보인 것으로 나타났다. 분리된 균주 중, 각각 46%, 25% 및 32%의 균주가 세포외 단백질분해효소, 지질분해효소 및 외부다당체 생성에 대한 활성을 나타냈다. 43개의 균주는 최소 1개의 세포외 분비 물질을 생산하였고, 이들 중 21개 균주는 최소 2개의 세포외 단백질분해효소, 지질분해효소 또는/및 세포외다당체를 생성하였다. 이러한 결과는 남극 로스해 퇴적물 내의 배양된 세균 군집이 해당 환경에서 탄소와 질소와 관련된 유기물질의 가수분해에 영향을 미치고 있다는 것을 시사한다.

• 미생물학회지
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• 제41권3호
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• pp.164-167
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• 2005

Lepista nuda DGUM 26501의 균사 생육을 위한 배양조건 및 세포외 분비 효소 활성을 조사하였다. 균사 생육을 위한 최적 온도는 $24^{\circ}C$였고, pH$7.0\~8.0$에서 최적 균사 생육을 나타내었다. 적정 균사생육을 위한 산소분압은 $10\%$이상이었다. 최소배지로 Czapek-Dox 한천배지에 탄소원을 변경하여 첨가시, maltose, sucrose, manitol, xylitol 등이 우수하였다. 유기산으로 gluconate가 가장 우수한 균사 생육을 보여주었다. 전반적으로 유기질소원이 무기질소원보다 균사 생육이 더 우수하였으며, 유기질소원으로 corn steep liquor(CSL), soytone, protease peptone을 사용하였을 때 균사생육이 우수하였다. 사용한 인산원 중 ammonium phosphate, 비타민원으로 pyridoxine, riboflavin, nicotinic acid 첨가시 우수한 균사 생육을 보여주었다. $24^{\circ}C$에서 10일간 배양된 L. nuda DGUM 26501의 균사외 분비효소 중 $\alpha-amylase$의 활성도가 다른 효소에 비해 상대적으로 높았으며, lipase의 활성도는 미미하게 나타났다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제50권4호
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• pp.202-210
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• 2007

A total of 45 bacterial strains were isolated from the traditional Korean soybean-fermented food, Chungkookjang. Among these strains, seven strains were selected and identified based on morphological, physiological, and biochemical characteristics, as well as phylogenetic analysis using 16S rDNA sequences. All strains were Gram-positive, aerobic, motile, oxidase-positive, rod-shaped, and endospore-forming bacteria, and produced extracellular enzymes such as amylase, cellulase, lipase, protease, and xylanase. The isolates were grown in the presence of 0-11% (w/v) NaCl. Growth was optimal at pH 6-9 and at temperatures of $30-45^{\circ}C$. According to VITEK automicrobic system tests and supplementary tests, the isolates were similar to several species of the genus Bacillus. The phylogenetic analysis of seven bacterial strains based on comparisons of 16S rDNA sequences, revealed that the strains were closely related to Bacillus species. The identification of strains that produced surfactin was also carried out, based on PCR screening of the sfp gene. Among the seven isolated strains, six yielded a surfactin-positive result with PCR.

• 한국어병학회지
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• 제21권2호
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• pp.81-91
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• 2008

Vibrio harveyi, one of the major causal agent of vibriosis, affects a diverse range of marine vertebrates and invertebrates over a wide geographical area. The aims of this study were to investigate the characteristics of extracellular products (ECPs) from an isolate of the pathogenic non‐luminous V. harveyi and the luminous V. harveyi. And ECPs of V. harveyi were examined the pathogenicity to the black rockfish, Sebastes schlegeli, and histopathological traits of internal organs injected by ECPs. Four strains of V. harveyi cultures produced ECPs showing various enzymatic activites (caseinase, gelatinase, phospholipase, lipase, haemolysin). The ECPs showed strong cytotoxicity on macrophages of black rockfish, Sebastes schlegeli and olive flounder, Paralichthys olivaceus. Especially, the virulence of ECPs from the isolate of V. harveyi FR 2 was higher in the intraperitoneally injected black rockfish. Also, the ECPs of V. harveyi FR 2 caused the expansion of sinusoids in the liver, the activation of ellipsoid in the spleen and the sloughing of the epidermal cell in the intestine. It was suggested that the ECPs from V. harveyi play an important role in the pathogenicity process of the V. harveyi.

• 미생물학회지
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• 제52권2호
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• pp.192-201
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• 2016

최근 북극해의 축치해(Chuckchi Sea)로부터 저온지질분해 효소활성을 보이는 Psychrobacter sp. ArcL13 균주가 분리되었다. 그러나 낮은 발현 양 때문에, 이 효소의 다양한 분야에서의 활용에 제약을 받아왔다. 따라서 유전자 재조합 기술을 이용하여, 이 효소를 대량생산하는 기술개발이 필요하였다. 재조합 지질분해효소를 만들기 위해서는 우선 해당 유전자의 동정이 필요하였기 때문에, Psychrobacter sp. ArcL13 균주로부터 PCR을 이용한 gene prospecting 방법으로 새로운 지질분해효소 유전자인 ArcL13-Lip을 분리하고 전체 염기 서열을 규명하였다. 염기 서열 분석결과 ArcL13-Lip은 일부 Psychrobacter 속 박테리아 유래의 지질분해효소들과 염기 서열의 유사성은 낮지만, 84-90%의 아미노산 서열 유사성을 보였다. ArcL13-Lip 전체 유전자를 대장균에서 발현시키고 전기영동으로 분석한 결과, 재조합 ArcL13-Lip은 약 35 kDa의 분자량을 보였으며 단백질 봉입체 형태로 발현되었다. Unfolding된 ArcL13-Lip을 다양한 첨가물이 포함된 완충용액에서 refolding 시킨 결과, glucose에 의해서 refolding 효율이 가장 크게 증가하였다. Refolding된 재조합 ArcL13-Lip은 다양한 p-nitrophenyl ester 중 p-nitrophenyl caprylate과 p-nitrophenyl decanoate에 대해 가장 높은 효소활성을 보였다. 온도에 따른 효소활성을 조사한 결과 ArcL13-Lip은 $40^{\circ}C$에서 최고의 활성을 나타내었고, $10^{\circ}C$와 $20^{\circ}C$에서 각각 최고 활성 대비 약 40%와 73%의 효소활성을 나타내었다. 이와 같이 ArcL13-Lip은 전형적인 저온활성 효소의 특징을 보여주었다.