Cryopreservation of epididymal spermatozoa offers a potential tool for rescuing genetic material from males of genetically elite populations. Castration, catastrophic injury, sudden death or any other event that makes semen collection or mating impossible may prematurely terminate a stallion reproduction. Stallion epididymal spermatozoa vary widely in the loss of progressive motility, acrosomal integrity, and viability during freezing and thawing. The objective of this work was to investigate the effect of (1) freezing package types on cryopreservation efficiency, (2) thawing temperatures (37, 56 or $70^{\circ}C$) on Computer Assisted Sperm Analysis (CASA) parameters and (3) post-thawing incubation time (0, 1, 2 or 4h) on castrated stallion epididymis. Post-thawed sperm motility ranged between 59.69% and 64.28% ($56^{\circ}C$ and $37^{\circ}C$) in various thawing temperatures. When stallion epididymis sperm was frozen, straw was better than freezing tube on VCL (Velocity of Curvilinear Line) and VAP (Velocity of Average Path) parameter. Higher percentage of motility was observed at $37^{\circ}C$ thawing temperature even though no significant difference was observed among various temperatures. The motility, VCL, ALH (Amplitude of Lateral Head displacement), VAP, BCF (Beat-Cross Frequency) and STR (Straightness index) parameter of post-thawed sperm were significantly decreased by increasing the incubation time for all thawing temperatures. The present study showed that type of freezing package (Straw vs. Freezing tube) was not significantly different on cryopreservation efficiency. Furthermore, stallion epididymal spermatozoa frozen-thawed at $37^{\circ}C$ for 1 min resulted the highest proportion of motility and velocity movement. In addition, motility and viability of frozen-thawed stallion epididymal spermatozoa were also decreased by incubation.
우리는 고지방식이에 의해 유도된 비만 마우스의 몸무게, 부고환 지방조직 무게, 부고환 지방조직의 지방세포 크기 및 혈장 지질 농도에 약용식물 물 추출물들(MPWEs) 혼합식이가 어떤 영향들을 미치는지 연구하였다. MPWEs 혼합식이의 항비만 효과를 알아보기 위하여 C57BL/6J 마우스는 11주 동안 고지방식이를 섭취시켰다. 마지막 6주 동안, 계속해서 고지방식이(HFD)만 섭취시키거나 고지방식이에 MPWEs(5 g/kg, HFD+MPWEs)이나 고지방식이에 orlistat[0.5 g/kg, HFD+orlistat(항비만 약)]을 섞어 섭취시켰다. HF-free군은 11주 동안 일반 식이를 섭취시켰다. 11주간 고지방식이를 섭취한 군은 일반식이군과 비교하여 혈장 지질 수준, 몸무게, 간 무게 및 부고환 지방조직 무게가 현저하게 증가하였다. MPWEs를 함유하고 있는 식이는 몸무게, 간 무게 및 부고환 지방조직 무게와 마찬가지로 혈장 총콜레스테롤, LDL 콜레스테롤, 중성지방 그리고 혈당 농도를 현저하게 감소시켰다. 혈장 중성지방 수준은 6주 동안 orlistat를 함유한 고지방식이군(HFD+orlistat)에서 현저히 낮았고 MPWEs를 함유한 고지방식이군(HFD+MPWEs)의 그것과 유사하였다. 고지방식이군 마우스의 지방세포크기가 일반식이군의 그것에 비해 현저하게 증가하였고, MPWEs와 orlistat(positive control)는 부고환 지방세포 크기를 현저하게 감소시켰으나 orlistat가 MPWEs보다 약간 더 영향력이 있었다. 이들 결과들은 MPWEs 섭취는 몸무게 증가, 지방세포 형성 및 지방세포 크기 증가를 저해함으로써 항비만 효과가 있을 것이라는 것을 시사하고 있다.
본 연구는 티모시 건초와 농후 사료 위주의 사료를 급여한 한우 씨수소 정소상체 정자 체외수정 효율 조사를 통해 정자의 활용 가능성을 조사하였다. 농후 사료는 체중의 1.8%를 급여하고 양질의 티모시 건초를 자유채식 시킨 14개월령 거세우의 정소에서 분리된 정소상체 미부의 정자를 회수하고 동결 흉해 후 체외수정을 실시한 결과는 다음과 같다. 웅성전핵과 자성전핵이 형성(2PN)된 난자는 정상수정으로, 1개의 전핵(1PN), Expanded Sperm Head (ESH), Polyspermy 형태는 비정상적인 수정의 형태로 평가하였다. 정상적으로 수정된 난자의 비율은 정소상체 정자의 경우 전체 침투율은 49.7% 그리고 정상적인 2PN을 가진 난자는 18.5%를 보였으며, 대조구 정자의 전체 침투율은 54.4%로서 정소상체 정자 보다 높은 결과를 보였으나 유의적인 차이를 보이지는 않았다. 정상적으로 2PN을 형성한 비율은 36.7%로서 정소상체 정자를 이용한 정자 보다 높았으나 유의적인 차이는 없었다. 체외수정 후 발달률 조사에서 정소상체 정자의 분할률은 81.2%, 대조구 정자는 82.7%로 유사한 결과를 보였으나, 배반포 발달률은 정소상체 정자 24.4%와 대조구 정자 12.2%로 정소상체 정자를 사용한 난자의 발달에서는 유의적으로 높았다(p<0.05).
This study was investigated to test whether the zygote recognized the topoisomerase II beta (TOP2B) mediated DNA fragmentation in epididymal spermatozoa or the nuclease degradation in vas deferens spermatozoa by testing for the presence of gammaH2AX (γH2AX). The γH2AX is phosphorylation of histone protein H2AX on serine 139 occurs at sites flanking DNA double-stranded breaks (DSBs). The presence of γH2AX in the pronuclei of mouse zygotes which were injected with DNA broke epididymal spermatozoa was tested by immunohistochemistry at 5 and 9 h post fertilization, respectively. Paternal pronuclei that arose from epididymal spermatozoa treated with divalent cations did not stain for γH2AX at 5 h. On the other hand, in embryos injected with vas deferences spermatozoa that had been treated with divalent cations, γH2AX was only present in paternal pronuclei, and not the maternal pronuclei at 5 h. Interestingly, both pronuclei stained positively for γH2AX for all treatments and controls at 9 h after sperm injection. In conclusion, the embryos recognize DNA that is damaged by nuclease, but not by TOP2B because H2AX in phosphorylated in paternal pronuclei resulting from spermatozoa treated with fragmented DNA from vas deferens spermatozoa treated with divalent cations, but not from epididymal spermatozoa treated the same way.
Lepidium meyenii, known as Maca, is traditionally employed in the Andean region for its supposed properties to improve energy and fertility. In the present study, we investigated the effects of gelatinized and fermented Maca on improvement of physical stamina and epididymal sperm counts, and on blood biochemical parameters related to fatigue and tissue injury: creatine phosphokinase, aspartate transaminase, lactate dehydrogenase, blood urea nitrogen, glucose, total cholesterol and total proteins. Adult male mice was divided at random into two main groups (resting and excercise groups). The excercise group was separated into three subgroups (exercise only, exercise with gelatinized Maca and fermented Maca-treatment groups). Gelatinized or fermented Maca (800 mg/kg) were orally administered for 30 days. All animals in exercise groups were subjected to daily 30-min swimming for 28 days 30 min after Maca treatment. Daily exercise decreased the body weight gain, and fermented Maca further attenuated the body weight increase. Gelatinized and fermented Maca significantly increased the maximum swimming time on 14 and 28 days of treatment (p<0.05), respectively, suggestive of a long-term stamina-enhancing effect of fermented Maca. Both Maca fully or significantly recovered blood parameters of energy as well as muscular and hepatocytic injuries changed by repeated exercise and maximum swimming performance (p<0.01). Moreover, gelatinized and fermented Maca increased epididymal sperm counts 22.0% and 32.0%, respectively. In conclusion, the results indicate potential benefits of Maca for improving both physical stamina by minimizing muscular and hepatic damage and preserving energy during swimming exercise and male reproductive function by increasing epididymal sperm counts.
Kim, Kang-Hyeon;Shin, In-Sik;Lim, Jeong-Hyeon;Kim, Sung-Hwan;Park, Na-Hyeong;Moon, Chang-Jong;Kim, Sung-Ho;Shin, Dong-Ho;Kim, Jong-Choon
Toxicological Research
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제25권4호
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pp.203-207
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2009
Present study was conducted to investigate potential effects of epichlorohydrin on testicular and epididymal function in male rats. The test chemical was administered to adult male rats by gavage at dose levels of 0, 3.125, 12.5, and 50 mg/kg/day for 7 days. Testicular and epididymal function were assessed by measurement of reproductive organ weight, testicular spermatid count, epididymal sperm count, motility and morphology, and histopathology in rats. At 50 mg/kg, a decrease in the sperm motility and an increase in the incidence of sperm abnormalities were observed. Histopathological examinations revealed an increase in the incidence of histopathological changes including cell debris in the ducts, vacuolization of the epithelial cells, oligospermia, and epithelial disruption in the proximal caput epididymidis. At 12.5 mg/kg, an increase in the incidence of histopathological changes of the epididymidis was found. There were no treatment-related effects at 3.125 mg/kg. These results show that 7-day repeated oral administration of epichlorohydrin to male rats results in adverse effects on sperm motility, sperm morphology, and epididymal histology at $\geq$ 12.5 mg/kg/day.
생쥐가 성숙하는 동안 부정소 상피세포의 분화와 부정소액의 분비 및 흡수와 관련된 미세구조의 변화를 알아보고자, 생후 10, 20, 35 그리고 80일 된 생쥐에서 부정소 상피세포를 전자현미경으로 관찰하였다. 생쥐 부정소의 분화과정은 미세구조의 특징에 따라 생후 20일가지의 미분화기, 생후 35일 전후의 성장 및 분화기, 그리고 성체의 성숙기로 구분되었다. 각 시기는 정소에서 세정관의 강소 형성시기 그리고 정소액과 더불어 정자가 부정소에 유입되는 시기와 밀접한 관계가 있었다. 성체의 부정소 상피세포 중 주세포는 두부 부정소 기부에서 흡수 기능을 갖는 구조였고, 두부의 말부와 체부 그리고 미부에서는 조면소포체와 골지체가 발달되어 단백질 합성과 분비가 왕성한 구조로 관찰되었다. 투명세포는 주로 체부와 미부에 존재하였으며 세포질내에 흡수과립이 많이 존재하였고, 그 속에는 정자에서 분리된 세포질 잔기로 사료되는 막구조물이 관찰되었다. 부정소 부위에 따라 상피세포의 종류와 분포가 달랐고, 동일한 종류이 상피세포라도 부위별로 미세구조가 다르게 관찰되었다.
생쥐 정자의 수정능력 획득과정 및 첨체반응을 전후로 정자표면과 albumin의 상호작용을 조사하였다. 부정소 정자를 체외에서 배양하는 과정에서 정자표면에서 이탈된 단백질의 분석과 함께 FITC-bovine serum albumin으로 정자를 형광염색하여 정자표면에 대한 albumin의 결합양상의 변화를 조사하였다. 90분간 정자를 배양한 수 정자를 제거한 후 농축한 배양액내에 정자 또는 부정소액에서 기원한 여러종의 단백질가 함께 albumin이 다량으로 발견되었다 정자의 체외배양 과정에서 일어나는 albumin의 이탈은 배양액내의 $Ca^2$+과 무관하게 일어났다. BSA-FITC는 정소내 정자의 두부표면에 미약하게 결합한 반면 미부부정소 정자의 첨체표면에는 다량 결합하였다. $Ca^2$+-ionophore인 A23187으로 첨체반응을 유발한 정자의 두부 표면에서는 후첨체부위만이 강하게 염색되었다. 이러한 결과는 정소 및 웅성 생식수관니에서 정자표면에 부착된 albumin이 자성 생식수관을 거치는 동안 이탈됨을 시사하며 이러한 현상은 정자의 수정능력획득과 밀접한 관련이 있는 것으로 사료된다.
In Oriental medicine, there has been a theory that the deficiency of the Qi(氣) and the Phlegm(濕)-Damp(痰) bring Obesity. And so a clinically representative herb-medicine of the obesity treatments is Chegameyiin-tang . We observed the effects of Chegameyiin-tang on the fat tissues and what the function of Chegameyiin-tang is. These experimental studies were designed to investigate the effects of Chegameyiin-tang on the weight and lipid metabolism of obesity rats induced by high fat diet. And what is changed in the blood and how the leptin and uncoupled protein is affected. The measurement has been performed on (1) the weight of obese rats fed high fat diet, (2) the average size and number of epididymal fat cells, (3) the total cholesterol, triglyceride, glucose. and free fatty acids in the blood. and (4) the leptin and uncoupled protein in the blood are observed. The results are as follows; 1. In the sample group, the weight decrease occured significantly throughout the whole research period than that of control group. 2. In the sample group, epididymal fat weight showed significantly decrease in the 8th and 14th weeks than that of control group.3. In the sample group, epididymal fat cell size was decreased significantly in the 8th and 14th weeks than that of control group. 4. In the sample group, total cholesterol. triglyceride and glucose increased rather than control group in 8 weeks, those decreased significantly in 14 weeks. 5. In the sample group, free fatty acids and insulin increased rather than control group in 8 weeks. those showed some decrease in 14 weeks . 6. In the sample group, leptin decreased significantly than control group in 8, 14 weeks. Uncoupled protein showed some decrease in 8 weeks. that decreased significantly in 14 weeks.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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