Amylase, protease, polygalacturonase and $\beta$-galactosidase activities were monitored during salting of Chinese cabbage and kimchi fermentation at 1$0^{\circ}C$. A part of enzymes in the tissue of Chinese cabbage were eluted during salting, and other remained enzymes activities were decreased in proportion to the amount of elution. But total enzyme activities were increased during salting. Amylase, protease and polygalacturonase activities decreased at the early fermentation stage but increased at the late fermentation stage. $\beta$-Galactosidase activity was continuously increased during all periods of fermentation. Enzymic actions at the early fermentation stage come from Chinese cabbge and at the late fermentation stage come from major microorganisms in kimchi fermentation. Kimchi fermentation involves the activation of the enzymes by salting; hydrolysis of micromoleculars such as polysaccarides cell wall composed polysaccarides and proteins of cell wall during early fermentation of kimchi; overripening of the kimchi caused by propagation of homofermentative lactic acid bacteria which demand autotroph.
The insecticidal compound priduced by Streptomyces SS-4993 strain was indicated to be a relatively stable small compound by pancreatin treatment. The active compound was adsorbed on HP20 and eluted with 70% acetone. Then, the eluate was extracted with ethyl acetate. The content of the extract was determined by thin layer chromatography (Silica gel 60 F254, hexane-ethyl ether-acetic acid,80 : 20 :1). Three active bands (Rf 0.08, 0.07, 0.88) were identified by dermal application using Bombyx mori larvae. Electrophoretic analysis revealed that the injection of strain SS-4993 culture broth into B. mori larvae induce the reduction of the hemolymph proteins level. Especially, the level of apolipophorin-I was decreased drastically.
실리카 입자를 기공 형성제로 사용하여 물리적 강도와 단백질 결합용량이 높은 다공성 키토산 및 키틴 친화 막을 제조하였다. 키토산 친화 막의 BSA 단백질 결합용량은 최대 21.8mg/mL이었으며, 키틴 친화 막의 lysozyme 효소 결합용량은 최대 26.1mg/mL이었다. 제조된 다공성 키토산 및 키틴 친화 막을 사용하여 단백질 용액의 loading 유량, loading 양 및 농도 변화에 따른 BSA와 lysozyme의 친화 막 여과 크로마토그래피 분리 실험을 수행하였다. 친화 막 여과 크로마토그래피 분리 실험을 통해 얻어진 loading/washing/elution의 단계로 구성된 일련의 크로마토그램으로부터 단백질 용출량과 결합수율을 구하였다. 키토산 및 키틴 친화 막에의 BSA 및 lysozyme 단백질의 결합량과 결합수율은 loading용액의 유량이 작을수록, 주입량 및 농도가 클수록 증가하였다. 이 결과로부터 실리카 입자를 기공 형성제로 사용하여 제조된 다공성 키토산 및 키틴 막은 단백질의 대규모 여과 크로마토그래피 분리를 위한 친화 막으로서 효과적인 활용이 기대된다.
민들조개에 의해 흡수된 방사성 동위원소의 조직내 분포와 생화학적 거동을 알아 보기 위해 민들조개를 $^{65}Zn,\;^{54}Mn,\;^{137}Cs$ 용액에 7일간 노출시킨 후 조직을 잘라내서 방사능을 측정하고 간과 콩팥을 균질화시켜서 Sephadex G-75 유리판을 통한 젤투석 실험을 하였다. 방사성 동위원소의 조직내 분포는 방사성 동위원소에 따라 서로 다른 조직내 축적경향을 나타냈으며 특히 다른 조직에 비해 간과 콩팥에 아주 높게 농축되었다. 방사능이 농축된 간과 콩팥에서 방사성 동위원소와 결합하고 있는 단백질을 조사하기 위해서 간과 콩팥을 균질화시킨 상등액을 Sephadex G-75 column chromatography로 분리 한 결과 $^{65}Zn,\;^{54}Mn,\;^{137}Cs$가 서로 다른 유출 패턴을 나타냈고 또한 $^{65}Zn$과 $^{54}Mn$은 간과 콩팥에서 서로 다르게 유출되었다. 본 실험의 결과 방사성 동위원소의 종류와 조직에 따라서 결합하고 있는 단백질의 종류가 서로 다른 것을 알 수 있었다.
A fully automated high performance liquid chromatography with column-switching was developed for the simultaneous determination of KR60436, a new reversible proton pump inhibitor, and its active metabolite O-Demethyl-KR60436 from rat plasma samples. Plasma sample (50$\mu$l) was directly introduced onto a Capcell Pak MF Ph-1 column ($10{\times}4$ mm I.D.) where primary separation was occurred to remove proteins and concentrate target Substances Using acetonitrile-Potassium Phosphate (PH 7, 0.1 M) (2 : 8, v/v). The drug molecules eluted from MF Ph-1 column were focused in an intermediate column ($10{\times}2$ I.D.) by the valve switching step. The substances enriched in intermediate column were eluted and separated on a Vydac 218MR53 column ($250{\times}3.2$ I.D.) using acetonitrilepotassium phosphate (pH 7, 0.02 M) (47:53, v/v) at a flow rate of 0.5 ml/min when the valve status was switched back to A position. The method showed excellent sensitivity (detection limit of 2 ng/ml) with small volume of samples ($50{\mu}$l), good precision and accuracy, and speed (total analysis time 24 min) without any loss in chromatographic efficiency. The response was linear ($r^2{\geq}0.797$) over the concentration range of 5-500 ng/ml.
탈지미강으로부터 피틴산을 추출 및 정제하기 위한 최적조건을 설정하였다. 탈지미강을 10배수의 0.5% HCl 용액으로 1시간 처리하였을 때 피틴산의 추출효율이 가장 좋았으며 중화제로는 0.5% NaOH 용액이 적합하였다. 피틴산의 정제를 위하여 Diaion HP20 흡착 컬럼을 이용하여 불순물을 제거한 후 여러 가지 이온교환수지를 이용하여 피틴산을 정제하였을 때 Amberlite IRA-416 이온교환수지의 회수율이 가장 높았다. Amberlite IRA-416 이온교환수지를 이용하여 피틴산을 수지에 흡착시킨 다음 0.5% NaOH 용액으로 용출시켰을 경우 89%의 회수율을 나타내었다. 정제된 피틴산의 총단백질 함량은 0.14%(w/w)로 대부분의 단백질이 제거됨을 확인하였다.
난백에 있는 40여 가지의 단백질의 기능적 특성에 대한 연구가 폭 넓게 진행되고 있지만, 그 특성이 모두 확인되지 않았다. 난백에서 순수하면서 변성되지 않은 단백질을 분리하는 방법을 연구하기 위해 본 연구에서는 난백 중 함량이 많은 lysozyme, ovotransferrin, ovalbumin을 분리했다. 난백에서 단백질을 다른 분리 방법보다 선택적으로 분리가 가능한 이온 교환 크로마토그래피를 이용했다. 그리고 분리된 단백질을 동정하기 위해서 Reversed-phase HPLC (RP-HPLC)를 사용했다. 이온 교환 크로마토그래피에서 HI Trap ion exchange cartridge (GE Healthcare, USA)를 사용했고, 그 중에서 양이온 교환 수지 SP (완충용액 pH 8.0, pH 5.2)와 음이온 교환 수지 Q (완충용액 pH 8.0)로 난백 단백질을 분리하였다. 분리한 난백 단백질들의 동정용 RP-HPLC에서는 C18 컬럼(Phenomenex, USA)을 사용했고 등용매 용리에서 이동상으로 acetonitrile (ACN)/distilled water (DW)/trifluoroacetic acid (TFA)의 부피비를 50/50/0.1로 사용했다. 이온 교환 크로마토그래피에 의해 각 단계에서 분리된 용출용액을 RP-HPLC으로 분석한 크로마토그램과 표준시료의 크로마토그램의 체류시간을 비교하여 난백에 포함된 ovotransferrin, ovalbumin, lysozyme이 순차적으로 용출됨을 알았다.
최근 전통적인 액체상 공정을 대체하는 기술로서 고체 담체와 단백질 사이의 '생물인식' 기능을 이용하는 새로운 생물공정기술이 개발되고 있다. 통상 고체 담체로는 표면에 특정한 기능기가 노출되어 있는 크로마토그래피용 담체를 사용한다. 단백질의 반응이나 상호작용이 단백질이 담체 표면에 부착되어 있는 상태에서 일어나기 때문에 이 '고체상 기술'은 액체상 기술에 비해 뚜렷한 장점을 갖고 있다. 고체상 재접힘은 변성제에 의해 용해된 내포체 형태의 재조합 단백질을 이온교환수지 표면에 흡착시켜 시작한다. 변성제를 단백질 주위로부터 서서히 제거시키면서 고유의 3차 구조로 재접힘시킨다. 재접힘이 완료되면 염 구배와 같은 전통적인 방법에 의해 재접힘된 단백질을 정제된 상태로 용출시킨다. 이 개념은 '확장층 흡착 재접힘'에도 연장 적용된다. 세포파쇄액에 변성제를 첨가하여 용해한 내포체 단백질은 확장층 흡착 크로마토그래피용 Streamline 담체에 흡착되고 세포찌꺼기와 불순 단백질들은 확장층 사이로 빠져 칼럼 밖으로 제거된다. 흡착된 목적 단백질은 고체상 재접힘 방법에 의해 재접힘 된 후 용출된다. 수년간 연구 발전되어 온이 새로운 재접힘 기술은 정제수율 향상, 공정 단계 감축, 공정 시간 및 부피 감소에 따라 생물의약공정의 경제성을 크게 향상시킬 수 있는 것으로 증명되고 있다. 본 논문에서는 실험실에서 수행한 여러 생물의약용 단백질들을 대상으로 한 연구 실험 자료를 바탕으로 고체상 재접힘 기술의 적용 사례를 서술하였다.
아가로오스 분해산물은 생리활성이 우수하여 의약품 및 기능성 화장품 원료로 사용될 뿐만 아니라 바이오에탄올 생산을 위한 효모 발효용 기질로 검토되고 있어 상당한 주목을 받고 있다. 이에 따라 고성능 아가레이즈 탐색에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다. 최근 본 연구팀에서는 남해안에서 신규 아가레이즈를 생산하는 미생물인 Pseudoalteromonas sp.를 분리하였다. 본 연구에서는 음이온교환수지를 이용하여 미생물 배양액으로부터 아가레이즈를 분리 정제하기 위한 크로마토그래피 조건을 최적화 하였다. 황산암모늄을 첨가하여 배양 상등액으로부터 침전된 단백질을 회수하고 이를 투석하여 조효소액을 얻었다. 음이온 교환수지인 DEAE-Sepharose 레진이 충진된 칼럼에 조효소액을 로딩하여 아가레이즈를 분리하였다. 410 ${\mu}g$의 단백질 로딩 시 흡착에 적합한 평형 pH는 7.5~8.0 이었고, 적정한 resin의 부피는 3 mL였다. 등용매 용출에서 용출액 중의 NaCl 농도가 증가함에 따라 용출되는 단백질 양이 증가하여 400 mM의 NaCl에서 최대에 달하였다. 최종적으로, NaCl 농도를 1,000 mM까지 선형적으로 증가시키며 아가레이즈를 분리하였다. Lugol 용액을 이용한 염색법으로 용리액 중의 아가레이즈의 존재를 확인하였다.
Yoon Kong;Chi- Yong Park;Shin-Yong Kang;Seung-Yull Cho
Parasites, Hosts and Diseases
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제30권2호
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pp.91-100
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1992
폐홉충의 생리식염수 추출액 내에 있는 여러 가지 성분 단백질의 생화학적 성상, 면역학적 특징 그리고 충체 내에서의 생성위치 등의 단세포군 항체나 전기영동을 이용한 연구에서 일부 밝혀졌다. 이 실험은 폐흡충 성충의 생리식염수 추출액 내에 있는 각 성분단백질이 폐흡충의 어느 부위에서 유래한 것인지를 알기 위하여 실시하였다. 먼저 생리식염수 추출액을 8% disc-PAGE로 전기영동하여 성분단백질을 분리하고 각 단백질 대(대)를 포함하는 젤을 잘라 내었다. 이어 전기영동으로 젤에서 성분단백질을 용출(용출)하였다. 각각의 단백질을 토끼에 면역시켜 성분 단백질별 항폐흡충 면역혈청을 만들고 이 항혈청으로 폐흡충 및 감염 고양이 폐의 절편에 면역효소 염색법을 시행하였다. 그 결과 성충추출액으로 면역한 항폐흡충 면역혈청은 폐흡충 성충의 충란, 장관상피세포, 장관 내용물에 강한 반응을 보였고 실질조직에도 염색이 되었다. 그러나 표피, 표피하세포, 고환, 흡판등은 반응이 없었다. 1번 Band 단백질의 항혈청은 충란내 세포에 염색이 되었고 충체에서 배출되어 폐실질 조직에 들어있는 충란에 더욱 강하게 반응하였다. 2번 Band 단백질의 항혈청은 폐홉충의 실질조직에 반응하였다. 3번 Band 단백질의 항혈청은 2번 Band 단백질과 교차반응을 일으켜 염색 반응을 관찰하지 않았다. 4번 Band 단백질의 항혈청은 폐흡충의 장관 내용물과 강한 반응을 보였고 5번 Band 단백질의 항혈청은 장관상피세포에 반응하였다. 6/7번 Band 단백질과 8번 나and 단백질의 항혈청은 각각 실질조직에 반응하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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