A combination of magnolol or honokiol with lysozyme isolated from the egg white of the Korean Ogol fowl (Korean natural monument No.265) exhibited synergistic effect of bactericidal activity against a typical cariogenic bacterium, Streptococcus mutans OMZ 176. The synergistic ratio increased with time dependence.
이온교환 크로마토그래피에서 주요 변수로 샘플 투입량, 용출 NaCl 농도, 용출액 pH를 변화시켜 lysozyme 크로마토그라피 실험을 하였다. 그리고 Aspen Chromatography simulator를 이용하여 위의 변수 변화에 대한 모사된 크로마토그렘을 얻고 그 모사결과들을 실험 결과와 비교하였다. 용출 용액 NaCl의 농도가 높아질수록 단백질의 머무름 시간이 감소하며, 최대 피크의 높이가 높아졌다. pH가 증가함에 따라 최대 피크 높이가 증가하며, 분리 시간이 앞으로 이동하였다. 단백질의 주입량에 따라 분리 시간에 상관없이 최대 피크 높이만 비례적으로 증가하는 것을 확인하였다. 그리고 실험을 통해 얻어진 결과와 시뮬레이션 결과의 비교를 통해 같은 경향을 보임을 확인하였다.
양이온 교환수지를 이용하며 추출한 난백 lysozyme의 분리방법에 따른 역가측정과 역가 측정방법에 따른 차이를 비교 검토하고 pH와 열에 대한 안정성을 구명하였다. Lysozyme의 역가를 측정하는데 있어서 시료 무게당 lysozyme량으로 정의할 경우는 순도 높은 표준품의 구입이 필요하나 반복에 따른 측정 오차의 범위가 적었다. 반면 시료 무게당 units으로 할 때 오차의 범위는 조금 넓었지만 간편 신속하게 측정할 수 있었다. 난백 lysogyme을 pH6.3인 0.066M 인산염 완충액에 넣어 $37^{\circ}C$에서 2시간동안 항온시켰을 때 Micrococus lysodeiktius의 용균작용이 가장 활발히 일어났다. CM Sephadex C-25로 O.D. 1.0이상의 용액에서 회수한 lysozyme의 역가는 36,000units/mg으로 처리구 중 가장 높았다. 추출 lysozyme은 가열함에 따라 역가가 감소하였으며 인산염 완충액에서 $100^{\circ}C$, 15분간 가열하였을 때 35%이상이 감소하였다. 추출한 lysozyme용액을 pH별로 $100^{\circ}C$에서 15분간 가열했을 때 산성영역에서는 매우 안정되었으나 pH6.0 이상의 알칼리 영역에서 급격히 불활성화 되었다.
본 연구에서는 난백에 포함된 라이소자임의 컬럼 크로마토그래피에서의 breakthrough behavior 실험을 통해 최적 크로마토그래피 분리조건을 결정하였다. 다양한 양이온 교환수지의 라이소자임 breakthrough behavior를 비교한 결과 Cellufine C-200(Amicon, USA)이 라이소자임 흡착에 가장 우수한 성능을 보였다. Cellufine C-200 수지에서 이온강도, pH, 선속도 등이 난백 라이소자임의 breakthrough behavior에 미치는 영향을 비교한 결과 conductivity 2.75 mS/cm, pH 7, 선속도 0.635cm/min의 최적 조건을 얻었다. 본 최적조건에서 prep 규모 컬럼 크로마토그래퍼를 이용 난백으로부터 라이소자임을 분리하였다. 정제된 라이소자임과 Sigma 라이소자임의 specific activity는 비슷하였으며 SDS-PAGE 분석 결과 본 연구에서 정제된 라이소자임이 Sigma 라이소자임보다 impurity 단백질들을 적게 포함하고 있음을 확인하였다.
타액에 존재하는 여러 항균물질은 상호작용을 통하여 부가적이거나 상승작용을 나타내고 때로는 저해작용을 나타내는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 in vitro 상에서 lysozyme과 peroxidase 사이의 상호작용을 효소활성 측면에서 조사하고자 시행되었다. Lysozyme과 peroxidase의 상호작용은 hen egg-white lysozyme(HEWL)과 bovine lactoperoxidase(bLP)를 혼합하는 방법으로 조사되었고, peroxidase system이 lysozyme에 미치는 영향은 potassium thiocyanate와 hydrogen peroxide를 추가적으로 첨가하는 방법으로 조사되었다. Lysozyme 활성은 Micrococcus lysodeikticus 기질용액의 혼탁도 변화를 측정하는 방법으로 측정되었고, peroxidase 활성은 NbsSCN 법으로 측정되었다. Wilcoxon signed rank 법을 이용하여 lysozyme과 peroxidase 효소활성 변화를 대조군과 비교하였다. 생리적 농도범위에서 bLP는 HEWL의 효소활성을 증가시켰으며(P < 0.05), 그 효과는 bLP의 농도증가에 따라 영향을 받았다. 하지만 HEWL는 bLP의 효소활성에 영향을 주지 못하였다. Thiocyanate는 HEWL의 효소활성에 영향을 주지 못하였고, potassium thiocyanate와 hydrogen peroxide를 추가한 peroxidase system도 HEWL 효소활성의 추가적인 상승을 유도하지는 못하였으며, hydrogen peroxide의 농도변화도 영향을 미치지 못하였다. 본 연구의 결과는 타액 항균 물질을 포함하고 있는 구강건강용품이나 구강에서 lysozyme과 peroxidase의 상호작용을 이해하는데 필요한 중요한 정보를 제공해준다.
Salmonellosis is a major bacterial zoonosis that causes self-limited enteritis in animals and foodborne disease and typhoid fever in humans. Recently, multi-drug-resistant strains of Salmonella spp. have increased and caused more serious problems in public health. The present study investigated the antibacterial effects of egg-white lysozyme (EWL) against Salmonella (S.) Typhimurium and the therapeutic effects of EWL for murine salmonellosis. Evaluation of the antibacterial effects of EWL against S. Typhimurium revealed a minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of EWL of 6.25 and $300{\mu}g/mL$, respectively. In the bacterial growth inhibition test, EWL at 300 (p < 0.05) and $600{\mu}g/mL$ (p < 0.01) significantly inhibited the growth of S. Typhimurium at 4 h post-incubation. EWL administration at MIC (LYS-1), MBC (LYS-2) and $2{\times}MBC$ (LYS-3) for 14 days resulted in mortality of mice infected with S. Typhimurium of 70, 40 and 10%, respectively, while that of control mice (CON) was 90%. Counts of S. Typhimurium in murine spleens were significantly lower in LYS-2 and LYS-3 than CON (p < 0.05). The results of this study indicate that EWL has the potential for treatment of ICR mice infected with S. Typhimurium.
Liu, Xian De;Han, Rong Xiu;Jin, Dong-Il;Lee, Soo-Kee;Jo, Cheo-Run
Journal of Animal Science and Technology
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제51권6호
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pp.521-526
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2009
Irradiation of egg white increased foaming ability significantly. To investigate the protein modification by irradiation responsible for the increase of foaming ability, 3 major egg white proteins were purchased and mixed (7.7 g/L ovalbumin, 1.8 g/L ovotransferrin, 0.5 g/L lysozyme) as a model system and irradiated at 0, 2.5, and 5 kGy. The different protein expressions were evaluated using 2-D electrophoresis and it was found that ovotransferrin was cleaved by irradiation and molecular weight and isoelectric point were changed. In addition, many uncharacterized proteins were found and it indicated that irradiation modified proteins randomly but mainly fragmentation was observed. Therefore, it can be concluded that protein fragmentation of 3 major egg white proteins responsible for foaming ability may be the main reason for the improvement of foaming ability.
오골계 난백 lysozyme의 용균특성을 조사하고, 이를 식품보존료로 이용하기 위한 자료를 얻고자 오골계 난백으로부터 추출 분리한 lysozyme의 각종 미생물에 대한 용균성을 조사하였다. 그 결과, 공시균중 Gram 양성균인 Staphylococcus aureus phage type 29와 Bacillus subtilis ATCC 6633에 대하여는 용균성이 인정되었으나, Gram 음성균인 E. coli를 비롯한 여타의 균종과 Staphylococcus aureus phage type 57은 lysozyme에 대한 용균 감수성이 인정되지 않았다. 분리된 lysozyme은 S. aureus phage type 29를 공시균주로 하여 이를 육즙배지에 접종하고, $37^{\circ}C$에서 24시간 정치배양하여 세포를 회수한 후 540nm에서 흡광도가 0.6이 되도록 0.05M 초산완충액(pH 4.5)에 현탁시켜, 여기에 0.05%의 lysozyme을 가하여 $30^{\circ}C$, 30분간의 조건으로 반응시킬 때 용균성이 가장 좋았다. 또한 0.05%의 lysozyme은 반응액 중에 glycine(1%)을 첨가하므로서 공시균에 대한 용균효과가 양자의 상승작용에 의하여 그 단용시보다 현저히 증대(<50%) 되었으나, 기타 다른 첨가제와 금속이온 및 lysozyme과의 혼용효과는 인정되지 않았다.
Bovine mastitis is an important microbial disease in the dairy industry. We investigated the frequencies of bacterial pathogens in 62 farms and pathogen antibiotic resistance from mastitis samples (n = 748). We tested the antimicrobial activity of chicken and duck egg white and lysozyme purified from chicken egg white. Moreover, we compared the microbiomes of normal and mastitic raw milk obtained by 16S rRNA gene pyrosequencing and culture methods. The results showed that the frequencies of Gram-positive pathogens (Enterococcus faecalis 37% and Staphylococcus aureus 36%) were higher than that of a Gram-negative pathogen (Escherichia coli 15%). Resistance frequencies to ampicillin and norfloxacin were lowest in Staphylococcus aureus (21%), Enterococcus faecalis (23%), and Escherichia coli (33%), and the antimicrobial activity of chicken egg white was higher than those of lysozyme and duck egg white. Pyrosequencing results revealed clear differences between the microbiomes of mastitic and normal raw milk samples and revealed a slightly similar, but clearly different, composition of pathogens compared to that from the culture method. Thus, pyrosequencing may be useful for elucidating changes in microbiomes during mastitis progression and treatment. A chicken egg white and antibiotic combination may help with mastitis treatment; however, further studies are needed.
강낭콩 잎에서 에틸랜에 의하여 유도되는 분자량 30KD인 염기성 키틴분해효소를 정제하고 그 항균활성을 연구하였다. 이 단백질은 chitinase 활성과 lysozyme 활성을 가졌으며, Aspergillus fumigatus, Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani의 균사 생장을 억제하였다. 그러나 함께 실험한 2종류의 미생물 chitinase, 달걀 lysozyme, 파파야 protease는 이들에 대한 항균작용을 갖지 않았다. 이상의 결과는 lysozyme 활성을 가진 식물 chitinase가 병원균의 균사생장을 억제하여 자신을 방어할 수 있음을 시사한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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