In vertebrates, there are two variants of eukaryotic peptide elongation factor 1A (eEF1A; formerly eEF-$1{\alpha}$), eEF1A1 and eEF1A2, which have three well-conserved domains ($D_I$, $D_{II}$, and $D_{III}$). In neurons, eEF1A1 is the embryonic type, which is expressed during embryonic development as well as the first two postnatal weeks. In the present study, EGFP-tagged eEF1A1 truncates were expressed in cortical neurons isolated from rat embryo (E18-19). Live cell images of transfected neurons showed that $D_{III}$-containing EGFP-fusion proteins (EGFP-$D_{III}$, -$D_{II-III}$, -$D_{I-III}$) formed clusters that were confined within somatodendritic domains, while $D_{III}$-missing ones (EGFP-$D_I$, -$D_{II}$, -$D_{I-II}$) and control EGFP were homogeneously dispersed throughout the neuron including axons. In dendrites, EGFP-$D_{III}$ was targeted to the heads of spine- and filopodia-like protrusions, where it was colocalized with $SynGAP{\alpha}$, a postsynaptic marker. Our data indicate that $D_{III}$ of eEF1A1 mediates formation of clusters and localization to spines.
Moon, Il Soo;Cho, Sun-Jung;Lee, HyunSook;Seog, Dae-Hyun;Jung, Yong Wook;Jin, IngNyol;Walikonis, Randall
Molecules and Cells
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제25권4호
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pp.538-544
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2008
Activity-dependent local translation in the dendrites of brain neurons plays an important role in the synapse-specific provision of proteins necessary for strengthening synaptic connections. In this study we carried out combined fluorescence in situ hybridization (FISH) and immunocytochemistry (IC) and showed that more than half of the eukaryotic elongation factor 1A (eEF1A) mRNA clusters overlapped with or were immediately adjacent to clusters of PSD-95, a postsynaptic marker, in the dendrites of cultured rat hippocampal neurons. Treatment of the neurons with KCl increased the density of the dendritic eEF1A mRNA clusters more than two-fold. FISH combined with IC revealed that the KCl treatment increased the density of eEF1A mRNA clusters that overlapped with or were immediately adjacent to PSD-95 clusters. These results indicate that KCl treatment increases both the density of eEF1A mRNA clusters and their synaptic association in dendrites of cultured neurons.
Phosphorylation of the eukaryotic elongation factor 2 (eEF-2) blocks the elongation step of translation and stops overall protein synthesis. Although the overall rate of protein synthesis in mitosis reduces to 20% of that in S phase, it is unclear how the protein translation procedure is regulated during the cell cycle, especially in the stage of peptide elongation. To delineate the regulation of the elongation step through eEF-2 function, the changes in phosphorylation of eEF-2, and in activity of corresponding $Ca^{2+}$/calmodulin (CaM)-dependent protein kinase III (CaMK-III) during the cell cycle of NIH 3T3 cells, were determined. The in vivo level of phosphorylated eEF-2 showed an 80% and 40% increase in the cells arrested at G1 and M, respectively. The activity of CaMK-III also changed in a similar pattern, more than a 2-fold increase when arrested at G1 and M. The activity change of the kinase during one turn of the cell cycle also demonstrated the activation at G1 and M phases. The activity change of cAMP-dependent protein kinase (PKA) was reciprocal to that of CaMK-III. These results indicated: (1) the activity of CaMK-III was cell cycle-dependent and (2) the level of eEF-2 phosphorylation followed the kinase activity change. Therefore, the elongation step of protein synthesis might be cell cycle dependently regulated.
Deumaya Shrestha;Eunbin Kim;Krishna K. Shrestha;Sung-Suk Suh;Sung-Hak Kim;Jong Bae Seo
Journal of Animal Science and Technology
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제66권1호
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pp.204-218
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2024
Elsholtzia fruticosa (EF) is present in tropical regions throughout South Asian countries as well as the Himalayas. Although it has been used as a traditional medicine to treat digestive, respiratory, and inflammatory issues, its effect on preadipocyte differentiation is unknown. In this study, we examined the effects of a methanol extract prepared from EF on the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes. Cell differentiation was assessed by microscopic observation and oil-red O staining. The expression of adipogenic and lipogenic genes, including PPARγ and C/EBPα, was measured by western blot analysis and quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR), to provide insight into adipogenesis and lipogenesis mechanisms. The results indicated that EF promotes the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes, with elevated lipid accumulation occurring in a concentration-dependent manner without apparent cytotoxicity. EF enhances the expression of adipogenic and lipogenic genes, including PPARγ, FABP4, adiponectin, and FAS, at the mRNA and protein levels. The effect of EF was more pronounced during the early and middle stages of 3T3-L1 cell differentiation. Treatment with EF decreased C/EBP homologous protein (CHOP) mRNA and protein levels, while increasing C/EBPα and PPARγ expression. Treatment with EF resulted in the upregulation of cyclin E and CDK2 gene expression within 24 h, followed by a decrease at 48 h, demonstrating the early-stage impact of EF. A concomitant increase in cyclin-D1 levels was observed compared with untreated cells, indicating that EF modulates lipogenic and adipogenic genes through intricate mechanisms involving CHOP and cell cycle pathways. In summary, EF induces the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes by increasing the expression of adipogenic and lipogenic genes, possibly through CHOP and cell cycle-dependent mechanisms.
Hepatitis B virus (HBV) genome P-encoded protein HBV DNA polymerase (Pol) has long been known as a reverse transcriptase during HBV replication. In this study, we investigated the impact of HBV Pol on host cellular processes, mainly apoptosis, and the underlying mechanisms. We showed a marked reduction in apoptotic rates in the HBV Pol-expressed HepG2 cells compared to controls. Moreover, a series of assays, i.e., yeast two-hybrid, GST pull-down, co-immunoprecipitation, and confocal laser scanning microscopy, identified the host factor eEF1A2 to be associated with HBV Pol. Furthermore, knockdown of eEF1A2 gene by siRNA abrogated the HBV Pol-mediated anti-apoptotic effect with apoptosis induced by endoplasmatic reticulum (ER) stress-inducer thapsigargin (TG), thus suggesting that the host factor eEF1A2 is essential for HBV Pol's anti-apoptosis properties. Our findings have revealed a novel role for HBV Pol in its modulation of apoptosis through integrating with eEF1A2.
To study the effects of EF(Eriobotryae Folium) herbal acupuncture on asthma, we injected EF-HAS into Jok-samni(ST36) of C57BL/6 mice Objective : The aim of this study was to investigate the effect of EF-HA(herbal acupuncture) at ST36 on ovalbumin-induced asthma in mice Methods : C57BL/6 mice were sensitized and challenged with OVA(ovalbumin) for 12 weeks(once a week). Experimental groups were treated with concentrations(1%) of EF-HA at Jok-samni(ST36) for the later 8 weeks(3times/week). Result : 1. The weight and total cells of lung of the mice group treated with EF-HA decreased significantly compared with that of Control group. 2. Total Leukocytes and Eosinophils in BALF of the mice group treated with EF-HA decreased significantly compared with those of Control group. 3. The sticking of collagen on histological analysis of lung sections, the mice group treated with EF-HA decreased significantly compared with those of Control group. 4. The concentration of IgE, IL-4, IL-5 in BALF of the mice group treated with EF-HA decreased significantly compared with those of Control group. 5. The concentration of IL-4, IL-5, IL-13 in Serum of the mice group treated with EF-HA decreased significantly compared with those of Control group. 6. The number of $Gr-1^+/CD11b^+,\;CD3^-/CCR3^+,\;CD4^+,\;CD8^+,\;CD3e^+/CD69^+$ cells in the lungs of the mice group treated with EF-HA decreased significantly compared with those of Control group. 7. The cytokine's manifestation of mRNA of the mice group treated with EF-HA with RT-PCR decreased significantly compared with that of Control group. Conclusion : We conclude that EF-HA is effective on OVA-induced asthma of C57BL/6 mouse.
Normal cells proliferate generally a limited number doublings in culture and only rarely have they been shown to overcome cellular senescence and crisis stages, and immortalize spontaneously. I have established a number of non-chemically and non-chemically immortalized embryo fibroblastic (EF) cell lines in continuous cell culture. These include the spontaneously immortalized cell line, DF-1 and several immortal EF cell lines derived from various embryonic tissues. I have previously demonstrated that all of the immortal EF cells established have rapid cell proliferation capacity compared to primary EF cells, presumably due to the deregulation of cell cycle regulators such as p53, E2F-1 and the numerous cyclins. DF-1 cells, in particular, were shown to proliferate more rapidly under normal culture conditions compared to other immortal EF cells, implicating other mechanisms may be important for regulating their growth. The possible mechanism(s) underlying the accelerated growth of DF-1 cells will be addressed in this study. (omitted)
본 연구는 Enterococcus faecalis EF-2001 사균체를 발효유에 첨가하였을 시 나타나는 생리활성을 검증하고자 실시하였다. 발효유는 같은 양의 starter만 넣은 일반발효유 NFM, E. faecalis EF-2001 사균체를 100 ㎍/mL의 농도로 첨가한 EFM1, E. faecalis EF-2001 사균체를 500 ㎍/mL의 농도로 넣은 EFM2를 제조하였다. E. faecalis EF-2001 사균체를 발효유 첨가하였을 때 나타나는 항염증 효과를 검증하기 위해 mouse 유래 대식세포인 RAW 264.7 cell을 이용하였다. RAW 264.7 cell을 이용한 세포독성 실험의 결과, 사균의 농도가 높아질수록 세포 생존율이 유의적으로 감소하였으며(p<0.05), 80% 이상의 세포 생존율을 가지는 농도인 5, 10, 15 ㎍/mL에서 실험을 진행하였다. Nitric oxide의 생성 억제능 측정결과는 LPS 처리군에 비해 발효유에서 NO 생성을 저해하는 경향을 나타냈다. 또한, 일반발효유보다 사균을 첨가한 발효유에서 NO 생성을 더욱 저해하는 결과를 나타내었다. Prostaglandin E2의 억제율 측정결과도 15 ㎍/mL의 농도에서 PGE2 분비량을 감소시킴을 확인하였으며, 일반 발효유보다 사균이 첨가된 발효유에서 더욱 억제됨을 확인하였다. 따라서, 본 연구를 통해 E. faecalis EF-2001 사균체가 발효유에 첨가되어도 염증 매개물질인 NO 및 PGE2의 생성을 감소시킴으로써 추후 사균체가 첨가된 발효유 제조 및 연구에 대한 기초 연구 결과로 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
The translation elongation factor 1A, eEF1A, catalyzes the binding of aminoacyl-tRNA to the A-site of the ribosome by a GTP-dependent mechanism. By subtractive suppression hybridization technique, we have isolated a soybean low-temperature inducible gene, SLTI100 encoding translation elongation factor 1A. Multiple sequence alignments and phylogenic analysis showed that SLTI100 and other eEF1As originated from diverse organisms are highly conserved. RNA expression of SLTI100 was specifically induced by low temperature, high salt, ABA, or drought stress. Based on the subcellular localization of the corresponding gene product fused to GFP, we were able to confirm that SLTI100-GFP was restricted to the nucleus and cytoplasm. We propose that soybean eEF1A may play an important role in translational regulation during abiotic stress responses in plants.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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