The present study was performed to identify changes of plasminogen activator (PA) and plasminogen activator inhibitor (PAI) in porcine oviduct epithelial cells (POECs) during the estrous cycle. POECs obtained from ovary in pre-ovulatory (Pre-Ov), early to mid-luteal stage (Early-mid L) and post-ovulatory stage (Post-Ov). For the examine of PA activity, $1{\times}10^5$ fresh cells of POECs were cultured in DMEM/Ham F-12 containing 10% FBS and 0.2% amphotericin under humidified atmosphere of 5% $CO_2$ in air and $38^{\circ}C$. The urokinase-type PA (uPA) was observed at 7 days of POECs culture. PA activity was measured with culture prolonged of 0, 3, 6, 12 and 24 h after culture of 7 days. The PA activity were high significantly (p<0.05) at 12 h of culture, but PA activity were decreased with culture periods increased. The PA activity in POECs of Post-Ov stage were higher significantly (p<0.05) than that of Early-mid L and Pre-Ov stage. When PAI-1 and PAI-2 were added during the POECs culture, the PA were observed significant low activity (p<0.05). The PA activity and protein expression were decreased by PA inhibitor. This results suggest that PAI-1 and PAI-2 have a suppressive action on change of PA activity during the estrous cycle of pigs. Specifically, this study using PA inhibitor was effect the PA activity and PAI expression in oviduct epithelial cells in pigs.
HSP70 has widely been induced in in vivo hyperthermia conditions in various organisms to study gene regulation and recently neuroprotectve roles of the induced gene expression under varying conditions. We investigated different responses among various tissues in zebrafish under heat shock to evaluate whether spatial and temporal expression pattern of zebrafish (z) hsp70 in transcriptional and translational level under heat shock stress in different brain regions. Heat shock groups were given for 1 h at $37^{\circ}C$ after recovery by transferring the treated animals back to $28^{\circ}C$ for 1, 2 and 24 h for recovery, respectively. Control (CTRL) group was kept at $28^{\circ}C$. At the end of treatments, five animals were collected and used for isolation of total RNAs and peptides from the corresponding tissues. Expression of zhsp70 mRNA showed different patterns in recovery periods in the tissues including the brain, eye, intestines, muscles, heart and testis by RT-PCR. Unlike the RT-PCR analysis, Northern blot analysis demonstrated nearly 30-fold increase in zhsp70 at 1 h heat shock, suggesting that RT-PCR may not be appropriate in unmasking regulation of the time-dependent zhsp70 expression. In the experiment involving different brain regions, the cerebellum showed gradual activation at 1 h to R1h and decreases in R2h and R24h, while the medulla oblongata and optic tectum showed gradual increase at R1h and decrease at R24h, indicating that different brain tissues respond specifically to heat shock in inducing zhsp70 and recovering from the heat shock status. Western blot analysis also demonstrated that the intracellular levels of zHSP70 in three different brain regions including the cerebellum, medulla oblongata and optic tectum are differently induced and recovered to normal state. These results clearly demonstrate that different regions of the body and the brain tissues are responding differently to heat shock in the aspects of its level of expression and speed of recovery.
As a preliminary experiment to establish the process on the sexing of mouse embryos by chromosomal analysis, present studies were carried out with inbred (ICR, C57BL) and F1 hybrid [(ICR${\times}$C57BL) = F1 ${\times}$ ICR] mice to investigate the blastomere numbers and mitotic indices (M.I.) to the developmental stage of embryos recovered, the optimum periods of anti-mitotic agent administration, the successful rates of sexing and sex-ratio. The results obtained were summarized as follows: 1. The blastomere numbers (mean${\pm}$S.E.) of the morula and blastocyst were 18${\pm}$0.4 and 54${\pm}$0.7, respectively. 2. Whereas the M.I. of F1 hybrid (16${\pm}$0.2%) was higher than that fo inbred ICR (15${\pm}$0.1%) and C57BL (12${\pm}$0.6%) in the different strains, the morula (7${\pm}$0.6%) was higher than that of blastocyst (6${\pm}$0.4%) in the case of embryo stages. 3. Following to anti-mitotic agents treated, the M.I. of embryos cultured with Colcemid (17${\pm}$1.1%) was superior to that fo embryos cultured with Velban (12${\pm}$0.9%) and the Colcemid injection (7${\pm}$0.4%). 4. The successful rate of sexing in the blastocyst (38.7%; 124/320) was superior to the morula (35.9%; 52/145), and the F1 hybrid (48.1%) was higher than that of inbred ICR (42.4%) and C57 BL (28.2%). 5. In the successful rate of sexing to the methods of administration, the embryos cultured with Colcemid (46.0%) was superior to that of embryos cultured with Velban (39.0%) and the Colcemid injection (38.8%). 6. Of 98 embryos sexed after culture with Colcemid, 89(90.8%) were observed between 2 and 4 hrs. In the case of Velban treatment, 83.1% (74/89) was observed between 2$\frac{1}{2}$ and 4$\frac{1}{2}$ hrs. 7. Out of 761 prepared embryos it was possible to sex 311; 157 were male and 154 were female, i.e.a sex-ratio of 50% a, pp.oximately.
The objective of this study was to examine the effect of thymidine treatment during $in$$vitro$ maturation (IVM) of porcine follicular oocytes on blastocyst development. Porcine oocytes were treated with thymidine (10 mM, 20 mM and 30 mM) for 2 or 6 hr in the preiods of IVM I and/or II. The survival rates of the blastocysts in the 6 hr treatment groups of 10 mM and 20 mM during IVM I period were significantly higher than those of control group ($p$<0.05). However, the survival rate of the blastocysts in the 2 hr treatment group of 20 mM during IVM II period was significantly higher than control group ($p$<0.05). Furthermore, the survival rate of the blastocysts in the 6 hr treatment group of 30 mM during IVM II period was significantly lower than control group ($p$<0.05). Consistent with the previous result, blastocyst development of both IVM I and II treatment group was also showed as similar pattern. Total and apoptotic cell numbers of blastocysts derived from thymidine treated porcine oocytes were examined by using Tunel assay. The results showed that there was no significant differences in total cell number of blastocysts between thymidine treated and untreated groups. However, apoptosis-positive cells in the thymidine treated group (6 hr IVM I) were significantly lower than those of other groups ($p$<0.05). Taken together, these results indicate that high quality oocytes were selected by DNA synthesis mechanism according to high concentration thymidine treatment during porcine oocyte maturation. Therefore, we concluded that presumptive selected oocytes by thymidine treatment during maturation periods improved the further embryo development and embryonic quality of IVF embryos by decreasing the incidence of apoptosis in preimplantation porcine embryos.
The purpose of this study was to test that motor skill training enhance motor function and cerebellar development. Using an animal model of fetal alcohol syndrome-which equates peak blood alcohol concentrations across developmental period-critifical periods for the effect of alcohol on body and cerebellar weigh was examined. The effect of motor skill training on motor function and cerebellar development of rat exposed alcohol on postnatal days 4 through 10 were studied. Newborn rats were assigned to one of two groups: (1) Control group (CG), via artificial rearing to milk formula and (2) experimental groups (EG), via 4.5g/kg/day of ethanol in a milk solution. After completion of the treatments, the pups were fostered back to lactating dams, and wearing they were raised in standard caged until they were postnatal 48 days. Rats from experimental group of postnatal treatment then spent 10 days in one of two groups: Experimental group II (EGII) was had got motor skill training (training traverse a set of 6 elevated obstacles) for 4 weeks. Experimental group I (EGI) was not trained. Before sacrificing, the rat got examined two behavioral test, body weigh and cerebellar weigh, then coronal sections were processed. The section was investigated the Purkije cell in the cerebellum using light microscope. The results of this study were as follows. 1. In body weight test, the outcome of alcohol groups were significantly lower than the normal group. 2. In cerebellar weight test, the outcome of EGI were significantly lower than CG and EGII. 3. In motor behavioral test, the outcome of EGI was significantly lower than NG and EGII. 4. In Purkinje cells counting test, the outcome of EGI was significantly lower than the NG and EGII. These result suggest that improved motor function induced by motor skill training after postnatal exposure is associated with dynamically altered expression of Purkinje cells and that is related with cerebellar function. Also, these data can potentially serve as a model for therapeutic intervention.
멸구류 알기생봉인 Anagrus incarnotus Haliday의 알, 유충, 용, 성충의 각 발육단계별로 이의 형태적 특징을 관찰한 결과는 다음과 같다. A. incarnatus의 알은 sausage형으로 가늘고 긴 자루모양의 알자루가 있으며 길이는 0.215 mm, 幅은 0.057 mm였다. 1令幼蟲은 자루모양으로 마디가 없으며 중앙부위보다 머리와 꼬리부위가 좁고 蟲體 自體는 움직이지 않았다. 꼬리부위는 혹처럼 되어 있고 알껍질도 이 부위에 붙어 있었으며 길이는 0.290 mm, 폭은 0.082 mm였다. 2令幼蟲은 圓雜形의 모양으로 한 雙의 가늘고 긴 큰 턱을 갖고 있으며 "Histriobdellid" 形이었다. 길이는 0.535 mm, 폭은 0.110 mm였다. 번데기 시기는 머리, 가승, 배의 區分이 확실하였으며 더듬이와 배를 비교하여 암수의 구별이 가능하였다. 성충의 경우 암컷의 더듬이는 9마디, 숫컷은 13마디였다. 특히 암컷의 경우 끝부분이 根律形이고 첫째 채찍마디는 매우 짧고 球彩 또는 半球形이다. 3번째 채찍마디는 4번째 채찍 마디보다 약간 길고 한 개의 感覺 癸起가 있다. 앞날개의 중앙부위에는 8~9줄의 털이 散在해 있다. 體長은 암컷이 0.660 mm, 습컷은 0.650 mm였다..650 mm였다.
Harderian glands are the unique organs in several mammals, which human and non-human primates do not have. We report the ultrastructural changes in the postnatal developmental periods of Harderian glands in Mongolian gerbil(Meriones unguiculatus). Male and female Mongolian gerbils were sacrificed on days 3, 10, 30 and 60 after birth and their Harderian glands were observed by transmission electron microscope. The obtained results were summarized as follows; 1. In 3-day-old Mongolian gerbils, Harderian gland was composed of one excretory duct and immature tubules which have two type cells, dark and light cells, identified electron-dense and electron-lucent respectively. 2. In 10-day-old Mongolian gerbils, small lipid vacuoles began to be found in the cytoplasm of the secretory cells of the Harderian gland. Mitochondria, Golgi apparatus, polysomes and slash were more abundant in the cytoplasm of dark cells than those of light cells. The arrangement of tubules in the gland was much more condensed than that of 3-day-old Mongolian gerbils. 3. In 30-day-old Mongolian gerbils, the secretory cells of the tubule were typically columnar in shape and there was one type cell in the tubule. Most of the columnar secretory cells contained various size vacuoles. 4. In 60-day-old Mongolian gerbils, the Harderian gland possessed the typical structural characteristics of adults. The mature glandular structures were more significant than those of 30-day-old animals.
Choi, Na Young;Park, Yo Seph;Ryu, Jae-Sung;Lee, Hye Jeong;Arauzo-Bravo, Marcos J.;Ko, Kisung;Han, Dong Wook;Scholer, Hans R.;Ko, Kinarm
Molecules and Cells
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제37권6호
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pp.473-479
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2014
Spermatogonial stem cells (SSCs, also called germline stem cells) are self-renewing unipotent stem cells that produce differentiating germ cells in the testis. SSCs can be isolated from the testis and cultured in vitro for long-term periods in the presence of feeder cells (often mouse embryonic fibroblasts). However, the maintenance of SSC feeder culture systems is tedious because preparation of feeder cells is needed at each subculture. In this study, we developed a Matrigel-based feeder-free culture system for long-term propagation of SSCs. Although several in vitro SSC culture systems without feeder cells have been previously described, our Matrigel-based feeder-free culture system is time- and cost-effective, and preserves self-renewability of SSCs. In addition, the growth rate of SSCs cultured using our newly developed system is equivalent to that in feeder cultures. We confirmed that the feeder-free cultured SSCs expressed germ cell markers both at the mRNA and protein levels. Furthermore, the functionality of feeder-free cultured SSCs was confirmed by their transplantation into germ cell-depleted mice. These results suggest that our newly developed feeder-free culture system provides a simple approach to maintaining SSCs in vitro and studying the basic biology of SSCs, including determination of their fate.
담배나방의 월동생태를 규명하기 위하여 휴면 유기시기에 지역별로 유충을 채집하여 휴면용을 얻은후 수원과 진주등에 묻고 월동용의 생존욜과 발육기간을 조사하였다. 휴면용의 월동 중 생존육은 5%미만으로 매우 낮은 반면, 인공사육용기에 담아서 흙에 묻었을 경우 60%이상의 높은 생존율을 나타냈다. $25^{\circ}C$ 항온조건에서 발육기간은 지역이나 시험연도 또는 보관환경에 따라 20.4일에서는 43.9일로 개체간 변이가 컸다. 월동양상은 30일 이내에 우화하는 개체들과 30일이상 걸리는 개체로 구분할 수 있었으며 30일 이상인 개체의 비율은 중부지방이 남부지방보다 높았다. 반면 중부지방에서 채칩한 개체를 남부지역인 진주 야외조건에 보관할 경우 그 비율은 감소하는 경향을 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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