The purposes of this study were to optimize the in vitro maturation (IVM) and culture (IVC) systems of rabbit oocytes. Cytoskeletal structures in the germinal vesicle stage (GV) and during IVM are also investigated. Ovaries were transported from local slaughterhouses and the cumulus-oocyte complexes (COCs) were collected from ovarian follicles (${\geq}1mm$). COCs were randomly allocated to TCM199-based medium ($T_1$, TCM-199) supplemented with $NaHCO_3$, glucose, sodium pyruvate and FSH ($T_2$), $T_2+E_2+LH$ ($T_3$), $T_3+FBS$ ($T_4$), or $T_1+E_2+LH+FSH+FBS$ ($T_5$), for IVM. In Experiment 1, COCs were retrieved from the follicles and 51 GV oocytes were fixed in the fixative (MTSB-XF) for nuclear and cytoplasmic examinations. In Experiment 2, progressive changes of both the nucleus and the cytoskeleton were examined at 0, 6, 16, and 20 h after IVM. Maturation (MR) and developmental rates were assessed in Experiment 3. Cytoplasmic microtubules (MT) were clearly observed in rabbit GV oocytes. To our knowledge, this is the first report that describes the appearance of MT structures in the GV stage ooplasm. Tremendous variations in cytoskeletal alterations were observed among treatments with the exception of the vitelline ring (VR), which is constantly visible and unchanged during maturation. Germinal vesicle breakdown (GVBD) does not occur at 6 h after onset of maturation culture. When the oocytes for IVM were collected within 2 h, results from Experiment 3 showed that rates of nuclear maturation were 42, 8, 42, 37 and 65% at 16 h of IVM for $T_1$ through $T_5$, respectively, in which $T_1$, $T_4$ and $T_5$ had significantly greater MR than those in other groups (p<0.05). Morula/blastocyst development after parthenogenetic activation ranged from 20 to 63% with significantly greater rates in $T_3$, $T_4$ and $T_5$ (p<0.05). These results suggested that oocytes recovered from slaughterhouse ovaries can be matured and parthenogenetically activated in vitro, but the MR remained low in this study. Addition of $E_2$ and LH in the medium may be beneficial for cytoplasmic maturation, but FBS exerts a nega- tive role in the subsequent development of parthenogenetic embryos when energy substrates are provided in the IVC media. More studies are required for improving the MR and further development of the GV stage rabbit oocytes.
1981년부터 최 등이 재래종 옥수수의 수집종 가운데서 병발한 한계통(MET)을 분얼이 많이되고 또한 개체당 이삭(수)수도 많아서 사료용 옥수수의 육종재료로 가치가 있다고 생각되었으나 이 옥수수에 대한 유전적 분석이 확실히 되어 있지를 않았다. 따라서 본연구에서는 MET와 비분얼성이며 이삭도 하나 밖에 달리지 않는 수원 19호 (Mo17$\times$B68) 교잡종을 이용하여 F$_1$, F$_2$, BC$_1$, 세대를 양성하고 Mather의 세대평균분석법에 의하여 분석한 결과 MET 계통의 다수.다얼성은 염색체상의 유전인자에 의한 다기 보다 세포질적 유전인자에 의한다는 것을 확인하였다. 이같은 결론은 MET계통을 모계로 하여 교잡한 려잡종 세대에서 확실히 얻을 수가 있었다. 즉 MET 계통을 모계로 이용했을 때의 평균분얼과 이삭수는 MET를 부계로 이용했을 때의 분얼수와 이삭수 보다 많았는데 이는 이같은 특성들이 모계유전을 하기 때문이다. 그러나 이같은 특성들이 F$_1$이나 F$_2$에서 나타나지 않은 것은 F$_1$에서 특히 보여주는 잡종강세현상 때문에 옥수수의 정부우세성이 매우커서 상반적으로 분얼이나 이삭의 발달이 억제되었기 때문이라고 생각된다. 그리고 분얼이나 이삭의 절대수가 모계로 이용했던 MET에서 보다 잡종세대가 진전될수록 적어지는 것은 잡종강세외에도 MET계통의 세포질약 내지 유전인자적 축적량(Dose)이 적어지기 때문이라고 생각되어진다. 이같은 MET계통의 특성은 려교잡에 의한 MET계통의 세포질을 유지하거나 축적하므로써 사료용 옥수수의 육종에 이용될 수 있을 것으로 보여졌다.
중공의 CGMS (cytoplasmic-genetic male sterility)를 한국품종으로 이전하여 그들을 MS유지계통으로 쓸 경우 이들이 임성회복친과 교잡되어 발현될 것으로 기대되는 수중의 잡종강 세정도를 중공의 CGMS계통 및 그 유지계통들과의 잡종과 대비하여 조사검토하였다. 그 결과는 다음과 같이 요약된다. 1. 수량의 잡종강세는 heterosis(F$_1$/MP)로 표현하여 113~221.1% 전체평균 150.5%이었고 hetero-beltiosis(F$_1$/better p)로 표현하여 86.1~179.8%전체평균 125.3%이였다. 품종군별로는 중공계통들이 가장 높았는데 유지계통들은 MS계통들보다 높았다. 다음으로 높은 것은 임성회복친들이었고 한국품종으로 유지계통들은 가장 낮은 잡종강세를 보였다. 2. 수량구성요소별로 잡종강세를 heterobeltiosis로 표현해 보면 수수는 전체평균 92.7%로 감소되었고 수당입수는 120.0%로 증가했으며 임실율은 103.0%로 유의할만한 변화가 없었고 천립중은 112%로 증가하였다. 증수에 크게 기여한 수당입수와 천립중의 heterobeltiosis를 품종군별로 보면 수량의 그것과 비슷한 경향이었다. 3. 수량구성요소가 수량에 기여한 정도를 임성회복친별 교배조합군별로 검토하기 위하여 경노계수를 계산하였더니 밀양46, 수원294 및 수원287 조합 모두에서 다같이 수당입수가 0.8073~0..8649로 가장 컸고 다음은 천립중으로 0.2000~0.5032이었다. 4. 품종군별 잡종조합의 수량을 교배조합능력이라고 간주하고 이것을 전체평균에 대한 비율로 계산하여 비교했는데 임성회복친 중 밀양46과 수원294는 일반조합능력은 비슷하나 특수조합능력은 차가 있고 S. 287은 일반조합능력이 떨어진다. 유지계통별로는 중공의 유지계통이 가장 높았고 한국유지계통이 가장 낮았다. 중공의 CGMS를 한국품종으로 이전하는데 있어서의 문제점을 검토하였다.
The morphological study on different types of cells of reproductive organ including spermatogenesis in the adult planaria was performed to observe their cytochemical and ultrastructural characteristics. 1. Spermatogenesis The circular luminated material appears immediately inside the nuclear envelope of early spermatid and is found also in the nucleus of sperm, but typical acrosomal structures cannot be observed. Approximately ten of small-sized mitochondria occur around the nucleus in the transitional phase from primary spermatocyte to secondary spermatocyte, but in sperm a long mitochondrion is closely associated with nucleus, parellel to long axis of it. The sperm has a relatively long head connected with two tails via hollow neck. 2. Reproductive organ The penis bulb and the bursa stalk were observed. (1) Penis bulb The cells constituted penis bulb are classified into six types on the basis of ultrastructure of the cells and cytochemistry of the cytoplasmic granules. 1) A-type cells: These cells exhibiting low electron density are mainly occupied by large nucleus. These cells possess two different types of granules: highly electron-dense round granules with an average size of $0.9{\mu}m$, and electron-dense granules exhibit PAS-positive reaction. 2) B-type cells contain PAS-positive granules with the size of about $0.4{\mu}m$. They are rich in free ribosomes and mitochondria. 3) C-type cells are found to be dark cells due to high electron-density. These cells are largely occupied by large nucleus. 4) D-type cells: These cells are seen as light cells which have poorly developed cell organelles. 5) E-type tells: These cells contain a large number of glycogen granules which occupy most of cell. 6) F-type cells: These arc parietal epidermal cells surrounding the genital antrum. These cells are characterized by their finger-like shapes and the presence of a number of electron-dense, irregularly-shaped structures inside cells. The relatively large electron-lucent granules can be also found. The F-type cells possess numerous microvilli on their free surfaces. (2) Bursa stalk The cells constituted bursa stalk are classified into 3 types on the basis of cell shapes and presences of electron-dense or electron-lucent granules. 7) G-type cells with a long cytoplasmic process. They have large nuclei and poorly developed cell organelles. 8) H-type cells: These cells are characterized by the presence of a long cytoplasmic process and relatively highly electron-dense cytoplasmic profile. They have poorly developed cell organelles. 9) I-type cells contain large electron-lucent granules which exhibit negative reactions with three kinds of cytochemical staining methods used in this experiment. The fine electron-dense structures can be found inside these granules.
서론 : Laminin의 수용기로 알려진 Integrin $\alpha6\beta4$의 세포내 표현 정도는 편평상피암을 위시한 여러 악성종양의 전이능력 및 예후와 밀접한 상관관계가 없다고 알려져 있다. 이 Integrin은 Laminin과 같은 세포와 리간드와 결합하면 상피세포의 기저막 지주 구조물인 hemidesmosome의 세포체질 요소(cytoskeletal element)와 연관되어 그 결과 세포의 기저막과 세포내 케라틴을 연결하는 역할을 한다. Integrin $\alpha6\beta4$는 구조적으로 다른 많은 integrin들과 달리 $\beta$4의 세포질내 영역(cytoplasmic domain)이 특징적으로 크다. 이 세포질내 영역 $\beta$4 integrin의 기능은 아직 밝혀지지 않고 있으나 아마 세포 성장의 신호전달 및 악성종양의 특징인 침윤 전이에 관련할 것으로 보아지고 있다. 재료 및 방법: 저자들은 우선 $\beta$4 integrin의 wild type s-DNA와 $\beta$4 세포질내 영역(cytoplasmic domain) 및 $\beta$4의 tyrosine 인산화 반응 부위가 각각 결손된 c-DNA를 PCR을 통하여 합성하여 pRc/CMV 벡터에 삽입한 후 원래 $\beta$4 integrin의 발현이 결집된 인간 방광암 세포에 Calcium phosphate precipitation 방법으로 주입(transfection)시켜 형질변환된 세포를 면역형광법, Flow cytometry 및 Immunoprecipitation 방법으로 클로닝하여 wild type $\beta$4-full length(Clone FL), truncated $\beta$4-cytoplasmic domain(C1one CD), 및 mutated $\beta$4-tyrosine phosphorylation site (Clone M)을 얻었다. 암 세포의 부착 및 침투 능력의 기능적 연구로 모노 클로날 항체와 fibronectin, laminin, Matrigel을 단백질 기질로 사용하였으며 결과 비교를 위하여 pRc/CMV 벡터만 주입시켰던 클로운과 방광암 세포주를 $\beta$4 integrin 음성 대조군으로 또한 이 Integrin의 높은 발현을 보이는 두경부 편평상피암 세포주를 양성 대조군으로 이용하였다. 결과 : 세포부착능력에 있어서 온전한 $\beta$4 cytoplasmic domain이 존재하는 클로운이 laminin에 강한 부착능력을 보였으나 fibronectin의 부착정도는 $\beta$4 integrin의 표현정도와 관계없이 모든 클로운에서 비슷하였다. Matrigel을 투과하는 암세포 침윤 능력에서는 $\beta$4 integrin의 표현이 존재하는 클로운들이 투과 능력이 높았으나 세포외 리간드가 없는 control membrane을 사용하였을 때와 비교하여 투과능력의 차이를 보이지 않았다. 결론 : 유전자 주입(transfection) 방법으로 integrin의 다양한 클로운의 합성이 가능하여 이 Integrin의 암 세포의 부착 및 침투 능력에서의 기능을 규명 할 수 있게 한다. $\beta$4 integrin은 편평상피 암세포의 부착에 있어서 세포외 리간드 laminin과 특이 결합하여 부착 능력을 높이는 중요한 역할을 하며 편평상피 암세포의 침투에 있어서는 $\beta$4 integrin의 표현이 침투 능력을 높이는 역할을 하나 이때에는 laminin과 같은 리간드와의 특이 결합에 의존하지는 않는 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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