This experiment was carried out to confirm the stability of bar gene introduced into petunia plant through Agrobacerium-mediated transformation. Twenty-five transgenic plants T$_{0}$ plants, back cross (BC$_1$) populations to wild type and F$_1$plants between different T$_{0}$ plants were prepared, and polymerase chain reaction(PCR), PCR-Southern blot analysis, and field test with 0.1% Basta treatment were done. The results of PCR, PCR-Southern blot hybridization, and field test indicated that NPTII and bar gene introduced into the genome of petuina plants were stably transmitted to their progenies, and conferred the plants resistance to herbicide, Basta.sta.
Toxin protein from Ustilago maydis virus SH14 isolated in Korea was purified using ethanol precipitation, cation exchange, gel filtration and anion exchange chromatography. The molecular weight of the purified protein was estimated to be 8.3 kDa by SDS-PAGE analysis. The Nterminal sequence of the protein is L-G-I-N-C(K)-R-G-S-S-Q--C(K)-G-L-S-G which is highly homologous with that of P4 toxin, but the amino acid composition and electrophoretic mobility in a native PAGE of the toxin protein were totally different from those of P4 toxin respectively. The SH14 toxin was shown to have immunological cross-reactivity about 50% with P4 toxin when examined by Western hybridization.
Flower industry is now growing due to the development of economy in many countries. Simultaneously, needs from consumers in flower market are varied widely. To satisfy the needs from consumers and deal with a variety of diseases from a lots of pathogens as well as climate change, new elite flower cultivars should be released in flower market. For this purpose, conventional and biotechnological techniques can be employed to make good cultivar. Therefore, this review describes the general overview of flower breeding techniques including cross-hybridization, mutation breeding and genetic transformation systems. Also, breeding systems for ornamentals derived from plant tissue culture such as embryo culture, in vitro fertilization, ovary/ovule culture and haploid production were reviewed. Furthermore, in this study recent development of the generation of new flower cultivars using marker-assisted breeding, plant transformation including particle bombardment and Agrobacterium tumefaciens as well as genome-editing technology were described. This review will be contributed to the development and releasement of new flower cultivars with horticulturally useful traits in the future.
To understand the molecular structure and pathogenesis mechanism of Korean garlic viruses (GV), virus particles were isolated from field-grown garlic leaves and RNA genome was isolated from them. It was used for constructing cDNA library for GV. Several cDNA clones for GV were isolated and classified into 4 different groups on the basis of cross Southern hybridization. Northern blot analysis of GV RNA with one of these cDNA clones shows that the clone is a cDNA for GV RNA.
KF 116 was TMV resistant tobacco plant and KB 301 was PVY resistant plant transformed with TMV CP gene and PVY CP gene, respectively. These resistant plants were cross-fertilized and the 4 lines of the TMV-PVY resistant plants were selected from F1 hybrid plants. The rate of PVY-resistant plant in these hybrids was 100 percent and that of TMV-resistant plants including delay type was 90-98 percent at 4 weeks after virus inoculation. It was confirmed that the TMV and PVY CP genes were integrated into the genome of hybrid plants by genomic PCR, and Southern blot hybridization. The genome of F1 hybrid plants had one copy and 4 copies of PVY-CP gene and TMV-CP gene, respectively, and CaMV 35S promoters were not methylated, regardless of the difference symptom development to TMV.
Nicotiana repanda has resistance to many important tobacco diseases but no tobacco cultivars are currently available that carry risistance genes derived from this species. Numerous attempts to hybridize N, repanda with commercial tobacco cultivars have been largely unsuccessful because of cross incompatibility or the uncovering of lethal genes. In vitro pollination of placenta attached ovules was useful in by passing prezygotic barriers for interspecific hybrid combination between N.tabacum cv. NC82 and N. repanda. Six days after in vitro pollination of N. tabacum cv. NC82×N. repanda, enlarged ovules on plancenta were removed and transferred into ovule culture medium of kitsch and kitsch (1969). Within 15 days of ovule culture, germination occurred. Most of the hybrid seedlings obtained had poor root system and finally died, while few of them had good root system and grew well.
Kim Young Ju;Kang Ji Hee;Kim Su Mi;Park Soo Il;Kim Sang Bong;Lee Myung Suk
Fisheries and Aquatic Sciences
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제8권3호
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pp.122-127
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2005
A DNA chip that rapidly and accurately detects the viral genes in rhabdovirus-infected fish was developed. The N, Ml, and G proteins of three rhabdovirus strains, infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV), viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), and flounder rhabdovirus (HIRRV), were selected for use as probes. The sequences of the corresponding genes were obtained, and probes were prepared by PCR using specific primer sets. The specificity of the probes was confirmed by cross PCR. The prepared probes were spotted on poly-L-lysine- or aminosilane-coated glass slides and hybridized with target DNA under several different conditions in order to determine the optimal hybridization temperature, glass-slide coating, and target cDNA concentration.
본 연구에서 한국에 자생하는 12종의 민자주방망이버섯과 13종의 프랑스, 스위스, 포루투갈, 일본 등지에서 버섯을 수집하였다. 이들 한국, 외국 품종의 민자주방망이버섯은 단핵균사를 얻기 위해 이들 버섯으로부터 단포자를 얻어 YB배지에 배양하였다. 또한 민자주방망이버섯 육종을 위하여 자실체의 형태적 특성과 단핵균주의 특성 등을 고려하여 교배 단핵균주를 선별하였다. 그 결과 선별된 11개의 교배계통($K1{\times}K2$, $K1{\times}K3$, $K1{\times}K4$, $K1{\times}K6$, $K1{\times}K5$, $K2{\times}K4$, $K2{\times}K3$, $K2{\times}K6$, $K3{\times}K4$, $K4{\times}K5$, $K4{\times}K6$)에서 clamp connection을 관찰하였으며, 또한 RAPD 패턴 분석을 통해 교배 여부를 판단하였다. 교배된 2핵균주를 다시 PDA 배지에 배양하여 교배균주의 양상을 관찰한 결과 선별된 11개의 국내 야생 민자주방망이버섯으로 이루어진 교배계통은 야생품종 2핵 균사 또는 외국 민자주방망이버섯 품종 보다 성장속도가 빠른 것을 확인 하였다. 이는 앞으로 민자주방망이버섯의 한국 고유 품종개발 시 우수 교배형 선택에 있어, 기초자료로서 유용할 것으로 판단된다.
폐가스 처리용 바이오필터의 핵심 요소 기술은 생촉매(미생물), 담체, 설계 운전 기술 및 진단 관리 기술이다. 특히, 바이오필터의 성능은 부하 조건과 바이오필터 내 미생물 군집 구조에 의해 영향을 받는다. 지금까지 바이오필터의 미생물 연구는 대부분 배양법을 기초로 하여 수행되어 왔으나, 최근에 보다 신속하고 정확하게 미생물 군집을 분석할 수 있는 방법들이 제시되고 있다. 본 논문에서는 생리적, 생화학적 및 분자생물학적 미생물 군집 분석 방법과 이를 활용한 바이오필터의 미생물 군집 특성을 조사한 연구사례를 소개하고, 미생물 군집 분석법의 바이오필터에 적용 가능성에 대해 고찰하였다. Community-level physiological profile 방법은 시료 중에 포함된 종속영양미생물의 탄소기질 이용능력을 기반으로 군집 특성을 조사하는 것이며, Phospholipid fatty acid analysis는 미생물 세포막 지방산을 분석하여 군집 특성을 조사하는 방법이다. 환경시료로부터 직접 추출한 DNA를 활용하는 분자생물학적 분석법에는 "partial community DNA analysis"와 "whole community DNA analysis"가 있다. 전자의 방법은 PCR 과정에 의해 증폭시킨 염기서열을 분석하는 것으로 ribosomal operon 유전자가 가장 많이 활용되었다. 이 방법은 다시 PCR fragment cloning 및 genetic fingerprinting으로 구분되며, genetic fingerprinting 방법으로는 denaturing gradient gel electrophoresis, terminal-restriction fragment length polymorphism, ribosomal intergenic spacer analysis 및 random amplified polymorphic DNA 방법으로 세분화된다. 추출된 전체 군집의 DNA를 분석하는 방법에는 total genomic cross-DNA hybridization, 총 추출 DNA의 열 변성/재결합 방법 및 밀도구배를 이용하여 추출한 DNA를 분획화하는 방법 등이 있다.
점액질이 풍부한 꼼치 조직에서 NIH 3T3 세포주를 이용하여 subtracted cDNA 라이브러리를 얻어 200례의 클론을 제작하였다. 이 클른 중에서 비반복성 유전자를 선택하고, RNA in situ hybridization을 실행하여 꼼치 조직에서 특이하게 발현되는 곰신 클론(C90-171)을 선택하였다. 이 클론은 사람의 타액선 조직에서도 특이하게 발현되는 유전자로서 이를 확인하기 위하여 C90-171(곰신) 항체를 제작하였다. 꼼치의 cDNA 라이브러리에서 곰신의 항체를 통하여 스크리닝한 결과 PRP(proline-rich protein)와 가장 많이 교차반응하며, 면역조직화학적 염색으로 PRP와 유사한 양성반응으로 나타나 PRP와 유사한 기능을 하는 단백질로 사료된다. 또한 타액 내에서의 꼼치 단백질의 분해에 대한 실험결과 거의 분해가 일어나지 않는 것으로 보아, 곰신은 꼼치의 몸통을 보호하는 유전물질일 뿐만 아니라, PRP와 유사하게 조직을 보호하는 안정된 새로운 기능성 단백질로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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