• Nutrition Research and Practice
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• 제8권3호
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• pp.278-283
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• 2014

BACKGROUND/OBJECTIVES: Due to its beneficial health effects, use of buckwheat has shown a continuous increase, and concerns regarding the allergic property of buckwheat have also increased. This study was conducted for evaluation of the hydrolytic effects of seven commercial proteases on buckwheat allergens and its allergenicity. MATERIALS/METHODS: Extracted buckwheat protein was hydrolyzed by seven proteolytic enzymes at individual optimum temperature and pH for four hours. Analysis was then performed using SDS-PAGE, immunoblotting, and competitive inhibition ELISA (ciELISA) with rabbit antiserum to buckwheat protein, and direct ELISA with pooled serum of 21 buckwheat-sensitive patients. RESULTS: Alkaline protease, classified as serine peptidase, was most effective in reducing allergenicity of buckwheat protein. It caused decomposition of the whole buckwheat protein, as shown on SDS-PAGE, and results of immunoblotting showed that the rabbit antiserum to buckwheat protein no longer recognized it as an antigen. Allergenicity showed a decrease of more than 50% when pooled serum of patients was used in ELISA. Two proteolytic enzymes from Aspergillus sp. could not hydrolyze buckwheat allergens effectively, and the allergenicity even appeared to increase. CONCLUSIONS: Serine-type peptidases appeared to show a relatively effective reduction of buckwheat allergenicity. However, the antigenicity measured using rabbit antiserum did not correspond to the allergenicity measured using sera from human patients. Production of less allergenic buckwheat protein may be possible using enzymatic hydrolysis.

• 한국식품영양과학회지
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• 제29권6호
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• pp.1030-1034
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• 2000

계란의 방사선 조사 여부를 효소면역 측정법에 의해 판별 가능한지를 검토하기 위해, 방사선에 대해 가장 민감한 것으로 알려진 오브알부민의 항 오브알부민 19G에 대한 반응성을 경합효소면역측정법 (cELISA)에 의해 검토하였다. 계란은 난각이 있는 상태에서 조사선량은 0~7 kGy로 조사하였다. 항 오브알부민 IgG에 대한 오브알부민의 반응성은 조사선량이 증가함에 따라 감소하였는데, 감소 정도는 조사선량 의존적으로 변화되어 7 kGy에서 가장 크게 감소하였다. 방사선 조사에 의한 반응성감소 정도는 1.5배 (0.5 kGy)~3.7배 (7 kGy)이었다. 가장 조사선량이 낮은 0.5 kGy에서도 반응성의 감소가 측정 가능했기 때문에 cELISA는 저선량 조사된 계란의 검출에 유용한 방법으로 사용될 수 있을 것으로 사료된다. 방사선 조사에 의한 오브알부민의 반응성 감소는 오브알부민의 부분적 분해에 의해 구조적 변화가 일어났기 때문으로 사료된다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제8권4호
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• pp.213-219
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• 2005

Vitellogenin (VTG) was purified from the blood plasma of estradiol-17$\beta$ ($E_2$)-treated male marbled sole (Limanda yokohamae) using gel filtration and anion exchange chromatography. The purity of the marbled sole VTG (msVTG) was confirmed by polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and N-terminal amino acid sequencing. The purified msVTG was used to produce monoclonal and polyclonal antibodies in mice and rabbits, respectively, and the specificity of the polyclonal antisera for msVTG was confirmed by Western blot analysis. The antibodies cross­reacted with a protein of molecular mass approximately 160 kDa in the plasma samples of mature female marbled sole. No cross-reactivity was observed with the plasma of male fish. A direct non-competitive sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed using the monoclonal anti-msVTG and polyclonal anti-msVTG antibodies, with purified msVTG as the standard protein. The values of the intra- and inter-assay variations were within the ranges of $8.l-9.8\%$ and $8.5-12.2\%$, respectively. The sensitivity was about 0.3 ng/mL. Serial dilutions of plasma from mature female sole reacted with the msVTG-antibodies in the sandwich ELISA, whereas the plasma from male fish did not. The results indicate that the maturation status of female marbled sole can be identified using a sandwich ELISA for msVTG.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제18권3호
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• pp.374-382
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• 2011

Atlatoxin은 Aspergillus속 곰팡이로부터 생성되며 사람에게 있어서 간독성, 및 간암을 유발하는 잠재력을 가진 대표적 곰팡이 독소이며, 생체에 섭취된 $AFB_1$은 여러 가지 대사경로를 거쳐 동물 조직 내에 축적되는 것으로 알려져 있다. 방사선은 수술, 항암약물요법과 더불어 임상 시 중요한 치료방법이나 정상세포에 방사선을 조사하였을 때 반응성이 높은 활성산소와 과산화라디칼($OH{\bullet}$)을 생성하여 세포막의 불포화 지방산을 지질 과산화물로 변성시켜 세포 산화적 손상을 일으킨다. 본 연구는 곡류를 주식으로 하는 우리나라 사람들의 경우 $AFB_1$에 노출되기 쉽고 이들 중 일부는 위, 간, 담도 암과 같은 상복부 암으로 진단되어 간을 포함하는 부위에 대해 방사선 치료를 받을 수 있는 경우를 생각하여 흰쥐에게 $AFB_1$을 투여하거나 방사선과 $AFB_1$을 병합처리하여 vitamin C가 흰쥐의 혈청중의 $AFB_1$ 잔류량에 미치는 영향을 조사하기 위하여 수행되었다. X-ray 조사는 실험기간 내 단 1회로 실험사육기간 첫 일에 조사 하였고 X-ray 조사 후 vitamin C를 투여하였으며 vitamin C 투여 1시간 후 $AFB_1$을 투여하였다. vitamin C와 AFB은 모두 복강투여로 실험 사육 첫 일부터 1회 시작하여 3일에 한번씩, 5회 반복 투였으며 실험동물 사육기간은 총 15일로 하였다. 실험이 끝난 마우스 혈청 중 $AFB_1$은 indirect competitive ELISA와 HPLC법으로 측정 후 비교하였다. ELISA 법에 의한 흰쥐의 혈청 중 $AFB_1$ 의 함량은 ELISA 실험에서 AFB1 단독 투여한 2군에서는 $5.17{\pm}0.34$ ng/mL 였으며, 2군에 vitamin C를 투여한 3군에서는 $3.23{\pm}0.76$ ng/mL로 감소하는 경향이었다. 또한 X선 조사와 $AFB_1$ 병합처리한 4군의 혈청 중 $AFB_1$ 함량은 $5.62{\pm}0.44$ ng/mL 이었으며 여기에 vitamin C를 함께 투여 한 5군에서는 $4.84{\pm}0.36$ ng/mL로 약간 감소하는 결과를 나타내었다. 한편 HPLC 결과에서도 ELISA와 같은 결과를 나타내었으며, $AFB_1$ 단독 투여군(2군)과 X선 조사와 $AFB_1$ 병합처리군(4군)에서의 혈청 중 $AFB_1$ 함량은 각각 $4.82{\pm}0.17$ ng/mL, $5.36{\pm}0.42$ ng/mL 이었으나 여기에 vitamin C를 함께 투여한 3군과 5군에서는 각각 $2.77{\pm}0.23$ ng/mL, $4.33{\pm}0.14$ ng/mL로 유의적인 감소를 보여 vitamin C가 흰쥐의 혈청 중 $AFB_1$ 잔류량을 감소시키는 것으로 나타났다.

• 대한수의학회지
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• 제54권4호
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• pp.197-201
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• 2014

In Korea, brucellosis has been reported periodically in cattle and rarely in dogs; however, it has not previously been screened in domestic animals such as elk, pigs and goats. To investigate the serological prevalence, serum samples were taken from the aforementioned animals annually during 2007-2013 and screened by the rose-bengal test (RBT) or modified RBT, after which positive sera were evaluated by the standard tube agglutination test (STAT). Finally, RBT and STAT-positive sera were confirmed by competitive-ELISA. Brucella abortus biovar 1 was isolated from three elk that were shown to be positive serologically in 2008. There was no evidence of brucellosis in pigs. Based on serological monitoring and investigation of etiological agents, there is no evidence of outbreak of brucellosis in elk, pigs or goats of Korea since 2008. However, the possibility for brucellosis from cattle to affect these other livestock exists; therefore, extensive and continuous serological monitoring is required to maintain their brucellosis-free status.

• 한국균학회지
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• 제26권4호통권87호
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• pp.487-495
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• 1998

우리 나라에 중요한 식품의 원료인 메주에 대한 균독소($Aflatoxin\;B_1$와 Ochratoxin A) 생성 여부를 인위적인 혹은 자연적인 환경에서 조사하였다. 채집된 메주에서 균을 분리하여 접종함으로, 인위적인 환경인 독소생성 배지와 콩을 이용한 배지를 이용하여 균독소 생성을 관찰하였다. 조선 전통메주에서 채집된 메주 균인 불완전 진균들은 몇 몇 균이 독소를 생성하였으나, 멸균된 날 콩에는 다만 $2{\sim}3$개의 분리균들이 $Aflatoxin\;B_1$와 Ochratoxin A를 분비하였다. 그러나, 언급된 두 개의 균독소가 함께 생성하는 분리균은 관찰되지 않았다. 그러나, 조선 전통메주에서는 어떤 채집된 메주에서도 위의 균독소가 $0.01{\sim}100\;ng$ 범위에서 관찰되지 않았다. 이러한 결과로 메주 제조에 관련된 메주 균에서 털곰팡이(Mucor species)가 메주 제조에 초기에 작용한 균으로 전통 메주의 발효와 균독소 생성과 관계에서 중요한 것으로 사료된다.

• 한국식품조리과학회지
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• 제13권2호
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• pp.168-172
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• 1997

체내 소화효소에 대한 안정성을 검토하기 위해 competitive ELISA를 이용하여 항원 결합력의 변화를 조사하였다. YIgG는 펩신에 대해 상당히 불안정하여 pH 2.0에서 30분간의 반응에 의해 항원 결합력이 소실되었다. 한편 yIgG 용액에 50%(w/v) saccharose를 첨가하여 펩신과 30분 반응시킨 결과 native yIgG에 비해 항원 결합력이 6.7배 정도 저하되었으나 미첨가시에 비해 항원 결합력이 상당히 유지되었으므로, 펩신에 대한 yIgG의 안정성은 saccharose에 의해 상당히 증가되었음을 알 수 있다. YIgG는 트립신 및 키모트립신과 반응 후 항원 결합력의 큰 저하는 나타나지 않아 펩신에 비해 상당히 안정한 것으로 생각된다. 트립신과 8시간 반응 후 yIgG의 항원 결합력은 native yIgG에 비해 2배 감소되었으나 키모트립신과 8시간 반응 후 yIgG의 항원 결합력은 1.5배 감소되었다. 그러므로 yIgG는 키모트립신 대해 가장 안정하였다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제4권3호
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• pp.171-176
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• 1989

영남지방 곡류에 오염되어 있는 Aflatoxin B1을 측정하기 위해 식속하고 정확한 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA) 법을 응용하였다. 생산된 Antibody 는 aflatoxin B2와 강한 corss reaction을 보였고, 정량적으로 표준곡선을 보인 aflatoxin B1 범위는 1-100ppb이었으며, methanol-PBS-dimethylformamide로 spike시킨 쌀 추출물이 ELISA 반응에 약간의 간섭반응을 보였다. ELISA법에 의한 쌀 65종, 보리 116종의 aflatoxin 분석결과는 다음과 같다. 즉, 쌀시료 65개 중 3개의 시료가 positive 반응을 보였으며, 그중 R-18이 $7.5\;\mu\textrm{g}/kg$, R-30이 $3.6\;\mu\textrm{g}/kg$, R-59가 $3.3\;\mu\textrm{g}/kg$ 순으로 aflatoxin B1 함량을 나타내었고 시료의 4.6%가 aflatoxin B1에 오염되었음을 보였다. 보리 116종 중 겉보리에서 4개의 시료가 positive 반응을 나타내었으며, 그 중 겉보리 UB-37이 $9.6\;\mu\textrm{g}/kg$의 함량으로 가장 높은 함량을 나타내었고, 그의 UB-35, UB-54순이었으며 전체 시료의 3.4%가 aflatoxin B1에 오염되었음을 보였다.

• 한국식품과학회지
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• 제40권3호
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• pp.343-348
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• 2008

여러가지 방법으로 난백을 처리하고 난백 중 주요한 알레르겐인 OM의 알레르기성 변화를 계란 알레르기 환자의 IgE 항체를 이용한 간접경합 ELISA로 조사하였다. 12종의 효소를 이용한 가수분해, 방사선조사, succinic anhydride 처리는 OM의 알레르기성을 효과적으로 감소시키지 못 하였다. OM의 당쇄를 제거하는 TFMS의 처리는 OM의 알레르기성을 1/20 정도로 감소시켰다. $100^{\circ}C$에서 10분간의 열처리는 알레르기성을 감소시키지 못하였으나 $121^{\circ}C$(10분)의 처리는 난백 중 OM의 알레르기성을 1/100정도로 감소시켰다. NaOH 단독 처리는 3%(w/v) 이상에서 알레르기성이 대부분 사라졌고, NaOH(0.3%(w/v) 이상)와 열($70^{\circ}C$,15 min)의 복합처리는 알레르기성을 1/10,000 이하로 낮춤으로써 가장 효과적인 감소를 보였다. 본 연구에서 환자의 IgE 항체를 이용한 ELISA 분석결과와 동일 시료에 대한 토끼 IgG 항체의 ELISA 결과는 대체적으로 비슷한 결과를 보였지만, TFMS 처리물에 대한 반응성은 후자에서 훨씬 많이 감소되어(1/10,000) 대조적이었다. 이는 식품의 항원성과 알레르기성 간에는 약간의 차이가 있음을 시사하였다.

• Journal of Veterinary Science
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• 제23권4호
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• pp.55.1-55.12
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• 2022

Background: ASF was first reported in Kenya in 1910 in 1921. In China, ASF spread to 31 provinces including Henan and Jiangsu within six months after it was first reported on August 3, 2018. The epidemic almost affected the whole China, causing direct economic losses of tens of billions of yuan. Cause great loss to our pig industry. As ELISA is cheap and easy to operate, OIE regards it as the preferred serological method for ASF detection. P54 protein has good antigenicity and is an ideal antigen for detection. Objective: To identify a conservative site in the African swine fever virus (ASFV) p54 protein and perform a Cloth-enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detecting the ASFV antibody in order to reduce risks posed by using the live virus in diagnostic assays. Method: We used bioinformatics methods to predict the antigen epitope of the ASFV p54 protein in combination with the antigenic index and artificially synthesized the predicted antigen epitope peptides. Using ASFV-positive serum and specific monoclonal antibodies (mAbs), we performed indirect ELISA and blocking ELISA to verify the immunological properties of the predicted epitope polypeptide. Results: The results of our prediction revealed that the possible antigen epitope regions were A23-29, A36-45, A72-94, A114-120, A124-130, and A137-150. The indirect ELISA showed that the peptides A23-29, A36-45, A72-94, A114-120, and A137-150 have good antigenicity. Moreover, the A36-45 polypeptide can react specifically with the mAb secreted by hybridoma cells, and its binding site contains a minimum number of essential amino acids in the sequence 37DIQFINPY44. Conclusions: Our study confirmed a conservative antigenic site in the ASFV p54 protein and its amino acid sequence. A competitive ELISA method for detecting ASFV antibodies was established based on recombinant p54 and matching mAb. Moreover, testing the protein sequence alignment verified that the method can theoretically detect antibodies produced by pigs affected by nearly all ASFVs worldwide.