• The Journal of Advanced Prosthodontics
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• 제6권5호
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• pp.406-414
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• 2014

PURPOSE. The objective of this study was to investigate the biologic effects of enamel matrix derivative (EMD) with different concentrations on cell viability and the genetic expression of human gingival fibroblasts (HGF) to zirconia surfaces. MATERIALS AND METHODS. Immortalized human gingival fibroblasts (HGF) were cultured (1) without EMD, (2) with EMD $25{\mu}g/mL$, and (3) with EMD $100{\mu}g/mL$ on zirconia discs. MTT assay was performed to evaluate the cell proliferation activity and SEM was carried out to examine the cellular morphology and attachment. The mRNA expression of collagen type I, osteopontin, fibronectin, and TGF-${\beta}1$ was evaluated with the real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). RESULTS. From MTT assay, HGF showed more proliferation in EMD $25{\mu}g/mL$ group than control and EMD $100{\mu}g/mL$ group (P<.05). HGFs showed more flattened cellular morphology on the experimental groups than on the control group after 4h culture and more cellular attachments were observed on EMD $25{\mu}g/mL$ group and EMD $100{\mu}g/mL$ group after 24h culture. After 48h of culture, cellular attachment was similar in all groups. The mRNA expression of type I collagen increased in a concentration dependent manner. The genetic expression of osteopontin, fibronectin, and TGF-${\beta}1$ was increased at EMD $100{\mu}g/mL$. However, the mRNA expression of proteins associated with cellular attachment was decreased at EMD $25{\mu}g/mL$. CONCLUSION. Through this short term culture of HGF on zirconium discs, we conclude that EMD affects the proliferation, attachment, and cell morphology of HGF cells. Also, EMD stimulates production of extracellular matrix collagen, osteopontin, and TGF-${\beta}1$ in high concentration levels. CLINICAL RELEVANCE. With the use of EMD, protective barrier between attached gingiva and transmucosal zirconia abutment may be enhanced leading to final esthetic results with implants.

• 한국안광학회지
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• 제13권4호
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• pp.161-169
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• 2008

목적: 알칼리 화상 후 초기 임상적 손상반응의 진행과 치료를 위한 각막 재생의 이해를 높이기 위하여, 화학적 손상 후 동반하는 다양한 인자에 대한 면역조직화학적 변화를 조사하였다. 방법: 알칼리 화상을 입은 각막의 자가치유과정을 면역형광염색법과 H-E 염색, 그리고 TUNEL assay를 통해 면역조직화학적 측면에서 관찰하였다. 결과: 화상 후 각막의 치유는 진행되었지만 각막기질(stroma)과 내피세포의 세포사는 지속적으로 관찰되었다. 각막가장자리의 혈관신생과 손상된 각막의 ${\alpha}$-SMA의 발현은 알칼리 화상 3일 후부터 나타났으며, 각막기질에서의 콜라젠 III(collagen III)의 형성과 콘드로이친황산(chondroitin sulfate)의 발현은 ${\alpha}$-smooth muscle actin(${\alpha}$-SMA)와 transforming growth factor-${\beta}$(TGF-${\beta}$)의 발현증가와 일치하는 결과를 얻었다. 결론: 각막혼탁을 막기 위해서는 알칼리 화상 후 3일 이내에 혈관신생, 콜라젠 및 콘드로이친황산의 형성을 억제하는데 주력하는 치료가 효과적일 것이라 사료된다. 이 연구는 알칼리 화상을 입은 각막의 치유과정에 있어서의 면역조직화학적 지식을 제공함으로써, 각막의 재생을 촉진하는 치료제의 개발과 이용에 초석이 되리라 사료된다.

• 치위생과학회지
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• 제13권3호
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• pp.296-303
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• 2013

LOX는 결합조직의 세포외기질에 존재하여 교원섬유와 탄성섬유의 교차결합을 촉진시키는 핵심적인 효소이다. 뼈세포에서 세포분화 및 세포이동과 관련된 LOX의 역할은 보고되었으나, 상아모세포 분화에서 LOX에 대한 직접적인 효과는 거의 알려지지 않았다. 이 연구에서는 인간치수세포에서 상아모세의 분화과정 동안 LOX의 역할에 대해 실험하였다. 치수세포에 저 혈청 분화유도 배지를 처리하여 0, 1, 3, 7, 14일 동안 배양하였다. 세포성장은 세포계수, 분화와 관련된 유전자들은 RT-PCR, 광물화는 alrizarin red S 염색으로 각각 실험하였다. LOX 유전자 발현은 RT-PCR로 측정하였고, LOX 효소활성은 고감도 형광분석을 시행하였다. 1. 세포성장은 저 혈청 분화유도 배지에서 시간 의존적으로 증가하였다. 2. 분화표지자인 ALP, OPN, OCN, DMP1, DSPP는 시간 의존적으로 발현되었으나 초기, 중기, 말기에 대한 차별화는 이루어지지 않았다. 3. 광물화는 3일부터 관찰되기 시작하여 14일까지 증가되었다. 4. LOX와 LOXL은 mRNA 발현이 7일까지 증가되었고, 14일에서 큰 감소를 보였다. 하지만, LOXL3와 LOXL4 mRNA는 낮은 발현을 보였고, LOXL2 mRNA는 발현되지않았다. 5. Collagen type I mRNA는 7일까지 증가하다가 14일에서 의미있게 감소를 보였고, collagen type IV는 낮은 mRNA 발현을 보였다. 6. LOX 효소 활성은 분화유도기간 중 7일에서 가장 많은 발현을 보였고, 교원질 1형 기질이 교원질 IV형 기질보다 두드러진 발현을 보였다. 이상의 결과를 종합해 볼 때, LOX isoform의 발현과 LOX 효소 활성은 인간치수세포에서 상아모세포 분화과정 동안 중요한 조절자로 사료된다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제26권2호
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• pp.429-447
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• 1996

Transforming growth factor $-{\beta}$ is one of the polypeptide growth factors that mediate the activity of mesenchymal cells and regulate wound healing process via cell proliferation, migration and extracellular matrix formation. The purposes of this study is to evaluate the effects of transforming growth factor $-{\beta}$ on the protein synthetic activity of human periodontal ligament cells and human gingival fibroblasts. The cells which were prepared were primary cultured gingival fibroblasts and periodontal ligament cells from humans, and the fourth or sixth subpassage were used in the experiments. Cells were seeded and at a confluent state, 0, 0.5, I, 2.5, 5, 10 ng/ml $TGF-{\beta}$ and $2{\mu]Ci/ml\;[^3H]$ proline were added to the cells and cultured for 24 hours. Then, 1 and 5 ng/ml concentrations were selected and added to confluent cells and cultured for 24 and 48 hours. They were labeled with $2{\mu}Ci/ml\;[^3H]$ proline for 24 hours and a collagen assay was done by the Peterkofsky and Diegelman method. The results were presented as the mean disintegration per minute (dpm) per well and S.D. of four determinations, The results were as follows. : The total protein, collagen and noncollagenous protein synthesis in periodontal ligament cells and gingival fibroblasts were increased dose- dependently by transforming growth factor-p to 2.5-5 ng/ml concentration and decreased at 10 ng/ml concentration. The percent of collagen was slightly changed according to the concentration of transforming growth factor-po The effect of transforming growth $factor-{\beta}$ was not specific for collagen synthesis since it increased the total, noncollagenous and collagenous protein, simultaneously. In the comparison of protein synthetic activity between the human periodontal ligament cells and human gingival fibroblasts, the human gingival fibroblasts had higher activities than the human periodontal ligament cells at all times and concentrations of $TGF-{\beta}$. In the comparison of protein synthetic activity between the 24 hour effect and the 48 hour effect of $TGF-{\beta}$, the 48 hour cultured cells' synthetic activity decreased more than the 24 hour cultured cells at human periodontal ligament cells and human gingival fibroblasts. In conclusion, $TGF-{\beta}$ has important roles in the stimulation of protein synthesis in human periodontal ligament cells and human gingival fibroblasts. Thus, it may be useful for clinical application in periodontal regenerative procedures.

• 대한한방종양학회지
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• 제4권1호
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• pp.131-146
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• 1998

To examine the effect of Shiquandabutang on the metastasis of cancer, the following experiments were made. Before the main experiments, the cytotoxicity was measured by putting Shiquandabutang sample in HT1080. Then zymography was made to examine the change of gelatinolytic activity. And western blotting was carried out to examine the changes of Fos, Jun, Ets, the transcription factors of MMP-2, MMP-9, and Erk, JNK on signal transduction pathway to AP-1. Third, in vitro invasion assay with transwells coated by collagen and matrigel was carried out. From the results of the above the following conclusions were obtained. 1. The experimental result about cytotoxicity of Shiquandabutang against HT1080 was as below. The stained cell count after being treated by Shiquandabutang sample $400{\mu}g/ml$ for 24 hours was 0.9% of total cells, and the stained cell count by Shiquandabutang sample $100{\mu}g/ml$ was 1.5% of total cells. Both were near the level of control group which showed 0.6% stained. 2. The result of collagenase assay was as below. In Shiquandabutang sample $400{\mu}g/ml$, MMP-2 was reduced as compared with TPA control group, and the band of MMP-9 induced by TPA disappeared. In Shiquandabutang sample $800{\mu}g/ml$, both bands of MMP-2 and MMP-9 disappeared. 3. The results of western blots for Jun, Fos, Ets, Erk, JNK were as below. In Shiquandabutang sample $200{\mu}g/ml$, Ets was reduced, and Fos were increased. 4. The result of invasion assay was as below. The number of cells which migrated across transwell membrane in Shiquandabutang-treated group was less than that of +TPA control group. From the above results, it was concluded that Shiquandabutang might control the appearing and acting of collagenase not by the MMP-2, -9 promoter but by other way.

• 한방안이비인후피부과학회지
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• 제33권4호
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• pp.32-43
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• 2020

Objectives : The aim of this study was to investigate the anti-oxidant and anti-aging effect of the seed of Camellia japonica L. extracted by supercritical CO₂. Methods : The cell viability was performed by MTT assay. Nitric oxide (NO) production was performed by NO assay. The anti-oxidant effect was performed by beta-carotene bleaching assay and the intracellular proteome was analyzed expression of each 15 proteins by 2-D electrophoresis. Results : Fatty acid analysis of extract from Camellia japonica L. has shown oleic acid was 84%. And the antioxidant effect was about 186% compared with alpha-tocoperol(0.1%) by beta carotene bleaching assay. In 2D PAGE analysis, fifteen protein changes in five mechanisms which was collagen synthesis pathway, MMPs, ECM-cell interaction, cytokine, antioxidant enzymes were analyzed. Conclusions : On this study extract from seed of Camellia japonica L. by supercritical extraction could be used as a antioxidant and antiaging substance for the skin.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제28권1호
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• pp.39-48
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• 2024

Wogonin, extracted from the roots of Scutellaria baicalensis Georgi, has been shown to suppress collagen deposition in spontaneously hypertensive rats (SHRs). This study was performed to investigate the role and mechanism of wogonin underlying vascular remodeling in SHRs. After injection of SHRs with 40 mg/kg of wogonin, blood pressure in rats was measured once a week. Masson's trichrome staining was conducted to observe the changes in aortas and mesenteric arteries. Vascular smooth muscle cells (VSMCs) isolated from rat thoracic aortas were treated with Angiotensin II (Ang II; 100 nM) in the presence or absence of varying concentrations of wogonin. The viability and proliferation of VSMCs were examined using Cell Counting Kit-8 assay and 5-ethynyl-2'-deoxyuridine assay, respectively. The migration of VSMCs was examined using wound healing assay and transwell assay. We found that wogonin administration alleviated hypertension, increased lumen diameter, and reduced the thickness of the arterial media in SHRs. Ang II treatment enhanced the viability of VSMCs, which was inhibited by wogonin in a concentration-dependent manner. Wogonin reversed Ang II-induced increases in the viability, proliferation, and migration of VSMCs. Moreover, wogonin inhibited Ang II-induced activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling in VSMCs. Overall, wogonin repressed the proliferative and migratory capacity of VSMCs by regulating the MAPK signaling pathway, thereby attenuating vascular remodeling in hypertensive rats, indicating that wogonin might be a therapeutic agent for the treatment of vascular diseases.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제36권1호
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• pp.34-42
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• 2008

소의 혈액, 세포, 조직, 기관 등 소 유래 물질을 원료로 사용한 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제의 경우 소 유래원료 물질에 다양한 바이러스가 오염된 사례가 있기 때문에 바이러스 안전성 검증이 필수적이다. BVDV는 동물세포주, 우혈청 등에 가장 흔하게 오염되는 바이러스이다. 소 유래물질을 원료로 하는 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제 등에서 BVDV안전성을 확보하기 위해, 원료물질, 제조공정, 완제품에서 BVDV를 정량적으로 검출하고, 제조공정에서 BVDV제거 검증을 위한 시험법으로 활용이 가능한 BVDV real-time RT-PCR시험법을 확립하였다. BVDV에 특이적인 primer를 선별하였으며, 형광염료 SYBR Green I을 사용하여 BVDV RNA 정량 검출 시험법을 최적화하였다. 세포배양법에 의한 감염역가와 비교한 결과 real-time RT-PCR 민감도는 $1TCID_{50}/mL$이었다. 확립된 시험법의 신뢰성(reliability)을 보증하기 위해 시험법 검증을 실시한 결과 특이성 (specificity)과 재현성(reproducibility)이 우수함을 확인하였다. 확립된 real-time RT-PCR을 생물의약품 제조공정 검증에 적용할 수 있는지 확인하기 위하여 인위적으로 BVDV를 오염시킨 CHO 세포주와 소 유래콜라겐에서 BVDV검출 시험을 실시하였다. BVDV를 감염시킨 CHO 세포와 세포배양 상청액에서 BVDV를 정량적으로 검출할 수 있었다. 소 유래 콜라겐에서도 $10TCID_{50}/mL$까지 정량적으로 검출할 수 있었다.

• 대한소아치과학회지
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• 제35권1호
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• pp.30-38
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• 2008

치아 치수 세포는 치아 손상에 따르는 병리적인 상황에서 골과 상아질 기질을 형성하는 능력을 가진 것으로 생각된다. 본 연구에서는 MTA가 사람 치수세포의 성장에 미치는 영향과 상아질 형성에 관여하는 유전자의 발현을 유도하는지를 알아보고자 하였다. 또한 상아질 형성의 잠재적 지표인 alkaline phosphatase(ALP) activity에 미치는 영향을 평가하였다. 유전자 발현 검사를 위해 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, type I collagen, alkaline phosphatase, osteonectin(SPARC), and dentin sialoprotein primer set을 이용하여 MTA 처리 2일과 4일 후 reverse transcriptase polymerase chain reaction(RT-PCR)을 시행하였다. cell viability assay(세포 생존력 측정) 에서 5일간 MTA에 노출된 치수 세포의 비율이 대조군보다 높았다. 대조군에 비해 MTA를 처리한 군에서 ALP와 SPARC가 증가되었다. 이상의 결과를 종합하여 보면, 이 연구에 사용한 dental pulp culture system은 MTA를 포함한 치과재료의 처리 후 치수세포의 성장과 분화 그리고 상아질 형성 유도 기전을 연구하는 데 유용한 모델로 사용할 수 있다. MTA 처리는 사람 치수세포에 세포독성을 유도하지 않으며, ALP 활성도와 유전자 발현 그리고 osteonectin (SPARC) 유전자 발현을 증가시켜 수복상아질을 형성할 것으로 사료된다.

• 대한한방부인과학회지
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• 제30권2호
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• pp.49-70
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• 2017

목 적: 본 연구는 한의학에서 면포질환에 빈번히 사용하는 대표적인 복합처방인 청상방풍탕의 열수 추출물 동결건조물의 피부 노화 개선 효과 평가를 위하여 피부재생, 주름개선, 미백 및 보습 효과를 각각 평가하였고, 기본적인 독성 평가의 일환으로 세포독성 또한 in vitro 방법으로 평가하였다. 방 법: 본 연구에서는 human normal fibroblast(CRL-2076) 세포 및 B16/F10 murine melanoma(CRL-6475) 세포에 대한 청상방풍탕 열수 추출 동결건조물(수율 18.71%)의 세포독성을 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium Bromide) 방법을 통해 평가하였고, B16/F10 melanoma cells의 melanin 생성 억제 정도 및 melanin 합성 필수 효소인 tyrosinase 활성 억제와 arbutin을 비교 평가하여 미백효과를 평가하였다. 또한 피부 재생 및 주름 개선 효과를 transforming growth factor(TGF)-${\beta}1$와 fibroblast의 collagen type I 합성능을 비교, phosphoramidon disodium salt(PP)와 세포외 기질의 분해에 관여하는 elastase활성 억제를 비교, oleanolic acid(OA)와 hyaluronidase, collagenase 및 matrix metalloproteinase(MMP)-1 활성 억제를 비교하여 각각 평가하였고, 마우스 피부 수분함량 변화를 관찰하여 보습효과를 평가하였다. 결 과: 본 실험의 결과, 청상방풍탕은 human normal fibroblast 세포 및 B16/F10 murine melanoma 세포에서 최고 농도인 500 mg/ml까지 유의한 세포독성이 나타나지 않았고, fibroblast의 collagen type I 합성을 증가시켰다. 또한 세포외기질 파괴와 연관된 것으로 알려진 hyaluronidase, elastase, collagenase 및 MMP-1 활성을 각각 억제하였고 melanin의 생성에 관여하는 tyrosinase의 활성 및 B16/F10 melanoma 세포의 melanin 생성을 농도 의존적으로 차단함이 관찰되었다. 이와 더불어 정상매체 대조군에 비해 청상방풍탕 경구 투여군이 투여 용량 의존적으로 마우스 피부 수분 함량을 유의성 있게 증가시켰다. 결 론: 이상의 결과에서, 청상방풍탕은 세포 독성 없이 피부재생, 주름개선, 미백 및 보습 효과를 나타남이 관찰되어 차후 피부 개선 소재로서 그 가치가 높을 것으로 판단되나 금후 개별 구성 약재 각각에 대한 효능 및 생리활성을 나타내는 화학성분의 검색과 더불어 다양한 방면으로 기전적인 연구와 피부 보호 효과에 대한 in vivo평가를 체계적으로 수행해야 할 것으로 판단된다.