Lipoxygenase and Kunitz trypsin inhibitor protein are the main antinutritional factor in mature soybean seed. A new soybean cultivar, "Gaechuck#2" with yellow seed coat, lipoxygenase2,3-free and Kunitz trypsin inhibitor protein-free was developed. It was selected from the population derived from the cross between "Jinpumkong2ho" and C242. Plants of "Gaechuck#2" have determinate growth habit with purple flowers, tawny pubescence, yellow seed coat, yellow hilum, oval leaflet shape and brown pods at maturity. Seed protein and oil content on a dry weight basis were 40.7% and 18.7%, respectively. It has shown a resistant reaction to soybean necrosis, soybean mosaic virus, Cercospora leaf spot and blight, black root rot, pod and stem blight, and soybean pod borer. Gaechuck#2 matured in 4 October with plant height of 54cm and a 100-seed weight of 24.4g. Average Yield of Gaechuck#2 was 230 - 250 kg/10a in 2005 - 2007.
순무우 모자이크 바이러스 Ca 계통(TuMV-Ca)의 외피 단백질을 대장균 NM522 strain에서 발현시켰다. 발현된 바이러스 단백질은 한천젤 이중확산법, ELISA와 Western blotting을 이용하여 확인하였다. 외피단백질 발현 벡터(pGEX-Tu)의 구축은 IPTG induction site를 지니는 pGEX-KG에 TuMV-Ca 외피단백질 유전자를 결합하였다. 최적 단백질 발현 조건은 pGEX-Tu를 지니는 대장균을 액체 배지 1 ml당 $A_{595}$=0.1/ml의 농도로 접종한 후 2시간 뒤에 IPTG를 최종 농도를 1 mM로 조절하여 induction 시키는 경우였다. 합성된 목적 단백질은 발현 벡터의 특성상 GST (Glutathion S-Transferase) 단백질과 결합된 형태로 약 59 kDa의 단백질이었다. (uMV CP 33 kDa + GST 26 kDa.)
Shin, Hae Ja;Hyeon, Seok Hywan;Cho, Jae Ho;Lim, Woon Ki
한국미생물·생명공학회지
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제49권4호
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pp.510-518
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2021
Bacteriophages are considered excellent sensing elements for platforms detecting bacteria. However, their lytic cycle has restricted their efficacy. Here, we used the minor coat protein pIII domain (N1N2) of phage CTXφ to construct a novel surface plasmon resonance (SPR) biosensor that could detect Vibrio cholerae. N1N2 harboring the domains required for phage adsorption and entry was obtained from Escherichia coli using recombinant protein expression and purification. SDS-PAGE revealed an approximate size of 30 kDa for N1N2. Dot blot and transmission electron microscopy analyses revealed that the protein bound to the host V. cholerae but not to non-host E. coli K-12 cells. Next, we used amine-coupling to develop a novel recombinant N1N2 (rN1N2)-functionalized SPR biosensor by immobilizing rN1N2 proteins on gold substrates and using SPR to monitor the binding kinetics of the proteins with target bacteria. We observed rapid detection of V. cholerae in the range of approximately 103 to 109 CFU/ml but not of E. coli at any tested concentration, thereby confirming that the biosensor exhibited differential recognition and binding. The results indicate that the novel biosensor can rapidly monitor a target pathogenic microorganism in the environment and is very useful for monitoring food safety and facilitating early disease prevention.
The coat protein (CP) gene of kyuri green mottle mosaic virus zucchini strain (KGMMV-Z) isolated from zucchini (Cucurbita pepo) in Chonfu, Korea in 1999 was sequenced by the reverse transcription and polymerase chain reaction with degenerate and generate primers originated from tobamoviruses. The degenerate primers were very effective in amplification of KGMMV-Z CP region. The KGMMV-Z CP gene consisted of 486 nucleotides and had the same nucleotide length compared with those of cucurbit-infecting tobamoviruses. KGMMV-Z CP gene shared 43.8, 44.2, and 44.4% nucleotide sequence similarity with the CP gene of cucumber green mottle mosaic virus watermelon strain (CGMMZ-W), CGMMV-KW1, and CGMMV-SH, respectively, whereas three CGMMV strains among themselves showed 98.6-99.6% nucleotide similarity. The deduced amino acids of KGMMV-Z CP gene were 161 amino acid residues with the molecular weight of 17,181 daltons. The first 24 codons of KGMMV-Z CP gene corresponded to the sequences of the N-terminal amino acid of the viral capsid protein. The amino acid sequences of KGMMV-Z CP had 45.3% similarity compared with those of three CGMMV strains. However, the amino acid sequences of CGMMV strains were identical. These results showed that two cucurbit-infecting tobamovirus members, KGMMV-Z and CGMMV were genetically distantly related.
Barley yellow dwarf virus PAV (BYDV-PAV) has a 5.7-kb positive-sense single-stranded RNA genome that contains six open reading frames (ORFs). BYDV-PAV produces three subgenomic RNAs (sgRNAs). The largest of which encodes the coat, 17-kDa, and readthrough proteins from two initiation codons. To investigate the role of intergenic and 3'-proximal noncoding regions (NCRs) in coat protein (CP) expression and BYDV-PAV replication, a full-length infectious cDNA of the RNA genome of an Illinois isolate of BYDV-PAV was constructed downstream of the Cauliflower mosaic virus-35S promoter. Linear DNA molecules of these cDNAs were infectious, expressed the 22-kDa CP, and produced both genomic RNA sgRNAs in ratios similar to those observed in protoplasts inoculated with viral RNA. The portion of 5'NCR of sgRNA1 between ORFs 2 and 3 was not required for, but enhanced translation of CP from ORF3. Mutants containing deletions in the NCR downstream of ORF5 failed to replicate in oat protoplasts. These results indicate that an intact 3$^1$NCR is required for BYDV-PAV replication.
저장기간과 용도에 따른 대두종실의 건물 및 화학성분의 변화를 비교하기 위하여 장려 3품종에 대하여 2년의 저장기간 차이를 두었으며 용도에 따라서는 장려 5품종과 재래 2품종을 공시재료로 하여 종실을 종피와 자엽(유근포함)으로 분리하여 건물중, 발아율, 단백질, 지방, 전분, 당 및 oligo당을 분석하였다. 1. 3년 저장된 종자에서 건물중의 감소가 나타났으며, 발아율도 급격히 저하되었다. 2. 저장기간동안 자엽의 무게가 현저히 감소하였고, 종피의 구성비율은 증가하였다. 3. 3년 저장된 종자의 종피에서는 단백질, 지방, 탄수화물이 모두 감소하였고, 자엽에서는 단백질의 함량이 41.65%로 현저하게 감소하였다. 4. 종피의 구성비율은 대립종보다 소립종에서 높았다. 5. 밥밑콩에서 자엽의 단백질과 지방함량은 평균 43.59%와 18.25%로 장려품종에 비해 낮았고, 전분과 당의 함량은 평균 5.70%와 11.58%로 현저하게 높았다. 6. Sucrose, raffinose 및 stachyose의 함량은 밥밑콩에서 높았다.
A potyvirus causing chlorotic mottle and yellow spots on leaves of Dianthus barbatus was isolated and identified as an isolate of Carnation vein mottle virus (CVMV). Purified preparations of Chenopodium quinoa infected with CVMV-K showed filamentous particles between 695 and 785 om long. Many cytoplasmic inclusions were observed, and these consisted of pinwheels, dense bands, loops, and circles. The coat protein of CVMV-K was about 32 KDa in western blot analysis using a CVMV antibody. The nucleotide sequence of coat protein gene showed 97.6% homology with a Japanese isolate. The genome size of CVMV-K was about 9.0 kb by dsRNA analysis. These results indicate that the virus is an isolate of CVMV. This is the first report on CVMV in Korea.
Shaban Montasser, Magdy;Al-Awadhi, Husain;Hadidi, Ahmed
The Plant Pathology Journal
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제18권1호
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pp.1-5
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2002
The availability of nucleotide sequences of the coat protein gene of Potato leafroll virus (PLRV) permitted the construction of DNA primers that were utilized for cDNA synthesis. Polymerase chain reaction (PCR) products of a 487 bp. and approximately 500 bp DNA fragments were amplified from nucleic acid extracts of PLRV-infected tissue and strawberry mild yellow-edge (SMYE) diseased strawberry tissue, respectively. The amplified DNA fragments were further differentiated by hybridization analysis with a CDNA probe for the coat protein gene of PLRV and restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis. These results suggest that a luteovirus is associated with the SMYE disease.
Viral coat protein (CP) encoding cDNA with artificial start and stop codons was synthesized by reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) from the Korean isolate of potato virus Y-vein nectrosis strain (pVY-VN). To make PVY CP cDNA to untranslatable form, three stop codons were inserted near the start codon by "megaprimer-PCR" method. The untranslatable CP cDNA was subcloned to plant expression vector and transferred to N. tabacum cv. NC82 by Agrobacterium-mediated transformation. Highly resistant plants to PVY infection were screened, based on symptom development after mechanical virus inoculation. By genomic PCR and Southern blot analysis, one or more copies of the untranslatable CP gene were found in all transformants. From northern blot analysis, highly resistant transgenic lines had very low level of CP transcript but susceptible lines had high level, suggesting resistance to PVY infection should be related to RNA-mediated mechanism.mechanism.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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