• 생명과학회지
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• 제20권10호
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• pp.1427-1432
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• 2010

본 연구는 WSSV의 재조합단백질 rVP466에 대하여 생산된 항혈청을 사용하여 WSSV에 대한 neutralization (중화) 효과를 확인하고자 수행하였다. 먼저 재조합단백질 rVP466의 생산을 위해 WSSV의 구성단백질 VP466을 암호화하는 유전자인 VP466을 포함하는 재조합 플라스미드 pCold-VP466을 제작한 다음 이것을 발현용 숙주인 E. coli RIPL에서 발현하였다. 발현된 rVP466에 대한 항혈청은 토끼를 사용하여 생산하였으며, 항원 rVP466에 대한 특이면역반응은 Western blot을 통해 확인하였다. WSSV에 대한 항혈청의 중화효과를 확인하기 위해 항혈청과 반응시킨 바이러스액($1{\times}10^4$ 배로 희석된 WSSV)을 이용하여 실험용 새우(Penaeus chinensis)에게 주사 감염을 통해 공격실험(challenge test)을 수행하였다. 실험 결과, WSSV로 공격실험한 감염대조구(positive control)의 새우들은 감염 후 17일째에 100% 누적폐사율을 보였으며, preimmune serum과 WSSV의 혼합액을 challenge한 preimmune control의 새우들은 감염 후 25일째에 83%의 누적폐사율을 보였다. WSSV와 rVP466 항혈청을 1:0.01, 1:0.1, 1:1로 혼합한 액으로 challenge한 새우들은 감염 후 25일째에 각각 73%, 53%, 46%의 누적폐사율을 보였다. 이상의 결과를 통해 WSSV가 rVP466 항혈청에 의해 농도의존적으로 neutralization됨을 확인하였으며, 이는 WSSV 감염과정에 VP466이 관여함을 나타내는 것이다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제52권1호
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• pp.93-97
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• 2014

Subolesin (4D8), the ortholog of insect akirins, is a highly conserved protective antigen and thus has the potential for development of a broad-spectrum vaccine against ticks and mosquitoes. To date, no protective antigens have been characterized nor tested as candidate vaccines against Dermacentor silvarum bites and transmission of associated pathogens. In this study, we cloned the open reading frame (ORF) of D. silvarum 4D8 cDNA (Ds4D8), which consisted of 498 bp encoding 165 amino acid residues. The results of sequence alignments and phylogenetic analysis demonstrated that D. silvarum 4D8 (Ds4D8) is highly conserved showing more than 81% identity of amino acid sequences with those of other hard ticks. Additionally, Ds4D8 containing restriction sites was ligated into the pET-32(a+) expression vector and the recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli rosetta. The recombinant Ds4D8 (rDs4D8) was induced by isopropyl ${\beta}$-D-thiogalactopyranoside (IPTG) and purified using Ni affinity chromatography. The SDS-PAGE results showed that the molecular weight of rDs4D8 was 40 kDa, which was consistent with the expected molecular mass considering 22 kDa histidine-tagged thioredoxin (TRX) protein from the expression vector. Western blot results showed that rabbit anti-D. silvarum serum recognized the expressed rDs4D8, suggesting an immune response against rDs4D8. These results provided the basis for developing a candidate vaccine against D. silvarum ticks and transmission of associated pathogens.