Viroid-like RNA molecules were detected from the low molecular weight RNAs isolated from the Korean peonies which showed typical viroid symptoms of epinasty and dwarfing. Low molecular weight RNAs including viroid RNA molecules were purified by the Qiagen anion exchange minicolumns. Viroid-like RNA molecules showed a single viroid specific band in the native polyacrylamide gel. They were separated into two bands in the denaturing gel conditions. The band of circular form of viroid-like RNAs was crossed over the horizontal band of the linear form of viroid-like RNA molecules in 0~8 M urea gradient gel under the denaturing conditions of 37$^{\circ}C$. The two circular forms of viroid-like RNA molecules were detected in the reverse polyacrylamide gel electrophoresis. The viroid-like RNA molecules purified from the peonies were supposed to be unidentified viroid RNA molecules.
Low molecular weight plant ribonucleic acids including potato spindle tuber viroid(PSTV) RNA were electrophoresed in 0M to 8M urea-gradient polyacrylamide gels. The electrophoresis was carried on in a urea - gradient gel system with 1/40 and 1/10 dilution of TBE buffer at three different temperatures, $17^{\circ}C,\;37^{\circ}C\;and\;57^{\circ}C$. The most effective separation of PSTV - RNA molecules into circular and linear forms was achieved at the highly denaturing temperature of $57^{\circ}C$ and at 1/40 dilution of TBE buffer. The electrophoretic mobility of the denatured circular viroid-RNA molecules is dependent mainly on the concentration of urea. In addition, a low concentration of TBE buffer would increase the separation distance between the circular and linear forms of PSTV-RNA molecules in the denaturing urea-gradient gel system
RNAs are versatile molecules that are primarily involved in gene regulation and can thus be widely used to advance the fields of therapeutics and diagnostics. In particular, circular RNAs which are highly stable, have emerged as strong candidates for use on next-generation therapeutic platforms. Endogenous circular RNAs control gene regulatory networks by interacting with other biomolecules or through translation into polypeptides. Circular RNAs exhibit cell-type specific expression patterns, which can be altered in tissues and body fluids depending on pathophysiological conditions. Circular RNAs that are aberrantly expressed in diseases can function as biomarkers or therapeutic targets. Moreover, exogenous circular RNAs synthesized in vitro can be introduced into cells as therapeutic molecules to modulate gene expression networks in vivo. Depending on the purpose, synthetic circular RNA sequences can either be identical to endogenous circular RNA sequences or artificially designed. In this review, we introduce the life cycle and known functions of intracellular circular RNAs. The current stage of endogenous circular RNAs as biomarkers and therapeutic targets is also described. Finally, approaches and considerations that are important for applying the available knowledge on endogenous circular RNAs to design exogenous circular RNAs for therapeutic purposes are presented.
Low molecular weight plant ribonucleic acids including viroid-RNA molecules which are soluble in 2M lithium chloride were electrophoresed in the 0M to 8M urea-gradient polyacrylamide gel. Although the linear viroid-RNA molecules migrated at a similarrate across the urea-gradient gel under the denaturing temperature, the circular viroid-RNA molecules moved more rapidly at low urea-gradient region than at high urea-gradient region. Consequently, the migration of the circular viroid-RNA molecules showed a sudden shift across the band of linear forms in the midrange of the urea-gradient gels. Electrophoretic mobilities of the circular viroid-RNA molecules seemed to depend mainly on the concentration of urea in the denaturing urea-gradient gels.
Objective: An experiment was conducted to identify and characterize the circular RNA expression and metabolic characteristics in the liver of Jinhua pigs and Landrace pigs. Methods: Three Jinhua pigs and three Landrace pigs respectively at 70-day were slaughtered to collect the liver tissue samples. Immediately after slaughter, blood samples were taken to detect serum biochemical indicators. Total RNA extracted from liver tissue samples were used to prepare the library and then sequence on HiSeq 2500. Bioinformatic methods were employed to analyze sequence data to identify the circRNAs and predict the potential roles of differentially expressed circRNAs between the two breeds. Results: Significant differences in physiological and biochemical traits were observed between growing Jinhua and Landrace pigs. We identified 84,864 circRNA candidates in two breeds and 366 circRNAs were detected as significantly differentially expressed. Their host genes are involved in lipid biosynthetic and metabolic processes according to the gene ontology analysis and associated with metabolic pathways. Conclusion: Our research represents the first description of circRNA profiles in the porcine liver from two divergent phenotype pigs. The predicted miRNA-circRNA interaction provides important basis for miRNA-circRNA relationships in the porcine liver. These data expand the repertories of porcine circRNA and are conducive to understanding the possible molecular mechanisms involved in miRNA and circRNA. Our study provides basic data for further research of the biological functions of circRNAs in the porcine liver.
Effects of divalent cations such as $Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$, $Ca^{2+}$, and $Zn^2$ on splicing activity of phage T4 thymidylate synthase intron RNA have been investigated. At the concentration of 0.5 mM, $Mn^{2+}$ in the absence of $Mg^{2+}$, a very small amount of pre-RNA was cleaved into ligation products (El-E2) but no circular or linear intron was produced. As the concentration of $Mn^{2+}$ was increased from 1 to 5 mM the pre-RNA was completely hydrolyzed. In the presence of 5 mM $Mg^{2+}$, both the linear intron and circular intron were produced but no El-E2 ligation product was produced. At both 3 and 5 mM $Mn^{2+}$ the RNA was hydrolyzed completely as observed with no $Mg^2+$ being present. In the case of $Zn^{2+}$, even at 0.5 mM concentration, the pre-RNA was completely hydrolyzed. This observation suggested that $Zn^{2+}$ facilitates RNA hydrolysis more rapidly than $Mn^{2+}$ does. at 5mM $Ca^{2+}$, the RNA was not hydrolyzed and remained intact as a primary transcript.
Non-coding RNAs (ncRNAs) comprise various RNA species, including small ncRNAs and long ncRNAs (lncRNAs). ncRNAs regulate various cellular processes, including transcription and translation of target messenger RNAs. Recent studies also indicate that ncRNAs affect organismal aging and conversely aging influences ncRNA levels. In this review, we discuss our current understanding of the roles of ncRNAs in aging and longevity, focusing on recent advances using the roundworm Caenorhabditis elegans. Expression of various ncRNAs, including microRNA (miRNA), tRNA-derived small RNA (tsRNA), ribosomal RNA (rRNA), PIWI-interacting RNA (piRNA), circular RNA (circRNA), and lncRNA, is altered during aging in C. elegans. Genetic modulation of specific ncRNAs affects longevity and aging rates by modulating established aging-regulating protein factors. Because many aging-regulating mechanisms in C. elegans are evolutionarily conserved, these studies will provide key information regarding how ncRNAs modulate aging and lifespan in complex organisms, including mammals.
The AML1 gene is an essential transcription factor regulating the differentiation of hematopoietic stem cells into mature blood cells. Though at least 12 different alternatively spliced AML1 mRNAs are generated, three splice variants (AML1a, AML1b and AML1c) have been characterized. Here, using the reverse transcription-polymerase chain reaction with outward-facing primers, we identified a novel non-polyadenylated transcript from the AML1 gene, with exons 5 and 6 scrambled. The novel transcript resisted RNase R digestion, indicating it is a circular RNA structure that may originate from products of mRNA alternative splicing. The expression of the novel transcript in different cells or cell lines of human and a number of other species matched those of the canonical transcripts. The discovery provides additional evidence that circular RNA could stably exist in vivo in human, and may also help to understand the mechanism of the regulation of the AML1 gene transcription.
Circular RNAs (circRNAs), one kind of non-coding RNA, have been reported as critical regulators for modulating gene expression in cancer. In this study, microarray analysis was used to screen circRNA expression profiles of bladder cancer (BC) 5637 cells, T24 cells and normal control SV-HUC-1 cells. The data from the microarray showed that hsa_circ_0075828 (named circCASC15) was most highly expressed in 5637 and T24 cells. circCASC15 was highly expressed in BC tissues and cells. Overexpression of circCASC15 was closely associated with BC tumor stage and promoted cell proliferation significantly in vitro and in vivo. Mechanistically, circCASC15 could act as miR-1224-5p sponge to activate the expression of CREB1 to promote cell proliferation in BC. In short, circCASC15 promotes cell proliferation in BC, which might be a new molecular target for BC diagnosis and therapy.
Objective: Circular RNAs (circRNAs) are a newfound class of non-coding RNA in animals and plants. Recent studies have revealed that circRNAs play important roles in cell proliferation, differentiation, autophagy and apoptosis during development. However, there are few reports about muscle development-related circRNAs in livestock. Methods: RNA sequencing analysis was employed to identify and annotate circRNAs from longissimus dorsi of sheep. Reverse transcription followed by real-time quantitative (q) polymerase chain reaction (PCR) analysis verified the presence of these circRNAs. Targetscan7.0 and miRanda were used to analyse the interaction of circRNA-microRNA (miRNA). To investigate the function of circRNAs, an experiment was conducted to perform enrichment analysis hosting genes of circRNAs using gene ontology (GO) and Kyoto encyclopedia of genes and genomes (KEGG) pathways. Results: About 75.5 million sequences were obtained from RNA libraries of sheep skeletal muscle. These sequences were mapped to 729 genes in the sheep reference genome. We identified 886 circRNAs, including numerous circular intronic RNAs and exonic circRNAs. Reverse transcription PCR (RT-PCR) and DNA sequencing analysis confirmed the presence of several circRNAs. Real-Time RT-PCR analysis exhibited resistance of sheep circRNAs to RNase R digestion. We found that many circRNAs interacted with muscle-specific miRNAs involved in growth and development of muscle, especially circ776. The GO and KEGG enrichment analysis showed that hosting genes of circRNAs was involved in muscle cell development and signaling pathway. Conclusion: The study provides comprehensive expression profiles of circRNAs in sheep skeletal muscle. Our study offers a large number of circRNAs to facilitate a better understanding of their roles in muscle growth. Meanwhile, we suggested that circ776 could be analyzed in future study.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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