To evaluate the genotoxicity of CKD-602, an anticancer agent the in viかo reverse mutation assay using Salmonella typhimurium, the Chromosome aberration assay using Chinese hamster lung (CHL) cells and the in vivo micronucleus assay using bone marrow cells of ddY mice were performed. In the reverse mutation assay, CKD-602 did not induced mutagenicity in Salmonella typhimurium TA 98, TA 100, TA 1535, and TA 1537 strains with and without metabolic activation. In the chromosome aberration test using CHL cells, there was an increased incidence of structural aberrations induced by CKD-602 without metabolic activation during 24 and 48 hours, but CKD-602 did not induce chromosome aberration with metabolic activation. The in vivo induction of micronuclei was measured in polychromatic erythrocytes of bone marrow of male ddY mice. At 24 hours after treatment with CED-602 by i.p. once, there was an increased incidence of micronucleated polychromatic erythrocytes in bone marrow of ddY male mice.
The effect of brown rice extract on mitomycin C(MMC)-induced chromosome aberration was examined in cultured Chinese hamster lung(CHL) cells, after induction of chromosome aberration and mitotic index in CHL cells cultured with MMC were observed. There were no significant differences between mitotic indices of CHL cells treated with DMSO, and MMC and brown rice extract. The frequency of chromosome aberration showed dose-dependent relationship in CHL cells treated with $0.2{\sim}3.0\;{\mu}g$/assay of MMC. But chromosome aberrations could not be assayed Our to cytotoxicity of MMC when its concentrations were above $3.0\;{\mu}g$/assay. Chromatid type, especially gap and break, of chromosome aberration were most frequently observed. When CHL cells treated with $2.0\;{\mu}g$/assay of MMC and brown rice extracts of concentration ranging $0.75{\sim}10.0\;{\mu}g$/assay were incubated, frequencies of chromosome aberration induced by MMC were significantly decreased at above concentrations(p<0.01, p<0.05). As concentration of brown rice extract was increased, frequencies of chromosome aberration was decreased $7{\sim}30%$, in some irregularity.
Three synthetic chemicals, benzoyl chloride, 2-propyn-l-ol, and 2-phenoxy ethanol were selected for genotoxicity testing, based on production quantity and available genotoxic data. In our previous report, benzoyl chloride induced chromosomal aberrations in Chinese hamster lung (CHL) fibroblast in vitro with and without metabolic activation, while 2-propyn-l-ol and 2-phenoxy ethanol induced only with metabolic activation. To compare the genotoxicity of chromosome aberration assay, the single cell gel electrophoresis (comet) assay subjected using CHL cells. As a result, statistically significant differences of tail moment values of benzoyl chloride, 2-propyn-1-ol, and 2-phenoxy ethanol were observed compared with control values on almost all concentrations with S9 or without S9 metabolic activation system. This results suggest that genotoxic results of the comet assay and the chromosome aberration assay show correlationship of genotoxicity in the CHL fibroblast. In summary, the positive result of chromosome aberration of benzoyl chloride, 2-propyn-l-ol, and 2-phenoxy ethanol was also induced DNA damages in comet assay with same cell line. Consequently, comet assay will be useful and more accurate tool to detect and to confirm the genotoxicity especially DNA damages in CHL fibroblast.
To evaluate the genotoxicity of SKP-450, an antihypertensive agent the in vitro reverse mutation assay using Salmonella typhimurium, the Chromosome aberration assay using Chinese hamster lung (CHL) cells and the in vivo micronucleus assay using bone marrow cells of ddY mice were performed. In the Reverse mutation test, SKP-450 did not induced mutagenicity in Salmonella typhimurium TA 98, TA 100, TA 1535 and TA 1537 with and without metabolic activation. In the chromosome aberration assay using CHL cells, there was no increased incidence of structural and numerical aberrations with and without metabolic activation. The in vivo induction of micronuclei was measured in polychromatic erythrocytes of bone marrow of male ddY mice at 30 hours after treatment with SKP-450 by p.o once. The results showed no increased incidence of micronucleated polychromatic erythrocytes in bone marrow of ddY male mice treated with SKP-450.
These observations were performed to investigate the safety of the natural herbs (Rhus-II) in respect of genotoxicity. This substance was examined in two in-vitro tests: (1) Salmonella typhimurium reversion assay (Ames test) in strain TA 98, TA 100, TA 1535 and TA 1537, (2) in vitro chromosome aberration test in cultured Chinese hamster ovary (CHO) cells. In the reverse mutation test, Rhus-II did not induced mutagenicity in Salmonella typhimurium reversion assay(Ames test) with or without metabolic activation. In the chromosome aberration assay using CHO cells, there was no increased incidence of structural and numerical aberrations with or without metabolic activation. These results indicated that, the Rhus-II had no genotoxicity.
The toxicity evaluation of oriental herbal drugs is of great concern at present. Bojungchisup-tang (BCST, in Korean), a decocted medicine of oriental herbal mixture, is now well used in clinic at oriental hospitals for the treatment of edema of several diseases in practice. However, the toxicity of the oriental herbal decocted medicines such as genetic toxicity is not well defined until now. In this respect, to clarify the genetic toxicity of BCST, in vitro chromosome aberration assay with Chinese hamster lung (CHL) fibroblasts and in vivo supravital micronucleus assay with mouse peripheral reticulocytes were performed in this study. In the chromosome aberration assay, we used 5,000 $\mu\textrm{g}$/ml BCST as maximum concentration because no remarkable cytotoxicity in CHL cells was observed both in the presence and absence of S-9 metabolic activation system. No statistical significant differences of chromosome aberrations were observed in CHL cells treated with 5,000, 2,500 and 1,250 $\mu\textrm{g}$/ml BCST for 6 hour both in the presence and absence of S-9 metabolic activation. However, very weak positive result (6.5-8.0% aberration) of BCST was obtained in the absence of S-9 metabolic activation system at 5,000 $\mu\textrm{g}$/ml BCST when treated for 24 hour, i.e. 1.5 normal cell cycle time. And also, in vivo clastogenicity of BCST was studied by acridine orange-supravital staining micronucleus assay using mouse peripheral reticulocytes. We used 2,000 mg/kg as the highest oral dose in this micronucleus assay because no acute oral toxicity of BCST was observed in mice. The optimum induction time of micronucleated reticulocytes (MNRETS) was determined as 36 hours after oral administration of 2,000 mg/kg BCST. No significant differences of MNRETs between control and BCST treatment groups were observed in vivo micronucieus assay. From these results, BCST revealed very weak positive result in chromosome aberration assay in vitro with CHL cells and no clastogenicity in micronucieus assay in vivo.
Heo, Moon-Young;Kwon, Chang-Ho;Sohn, Dong-Hun;Lee, Su-Jun;Kim, Sung-Wan;Kim, Jung-Han;William W. Au
Archives of Pharmacal Research
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v.16
no.3
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pp.196-204
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1993
Flavonol derivatives were tested for their anticlastogenic effect against induction of micronuclei by n-methyl-n'-nitor-n-nitorsoguanidine(MNNG), and against induction of chromosome aberration by bleomycin or MNNG.belomycin. For micronudeus assay, each flavonol derivative (0, 0.001, 0.01, 0.1, 1, 10 and 100 mg/kg) was administered orally twice with 24 h interval, together with intraperitioneally administered MNNG(150 mg/kg). The result showed that msot flavonol derivatives tested were effective in suppresing the frequencies of micronude induced by MNNG. For chromosome aberration assy, each flavonol derivative (0, 0.1, 1, 10m and 100 mg/kg)was administered to mice orally in vivo, and then mice were sacrificed and spleen lymphocyte cultures were made. Bleomycin $(3\;\mu$g/ml) was treated to the mouse spleen hymphocyte cultures at 24 h after con A initiation. There wre nomarked decrease tendencies in chromosome aberration unless all doses of galangin and some doses of several flavonol derivatives tested. In the another experiment, we have evaluated the effect of flavonol derivatives on the enhancement of bleomycin-induced chromsome aberration by MNNG. Most of flavonol derivtives reduced the incidence of chromosome aberration induced by in vitro treatment of bleomycin followed by in vivo treatment of MNNG. Galangin particulary showed a dose-dependent decrease tendency. Other flavonol derivative showed slightly suggest that most of flavonol derivatives may be capable of protecting the inhibition of suggest that most of flavonol derivatives may be capable of protecting the inhibition of DNA-repair by MNNG. Our data indicate clearly that flavonol derivatives can suppress MNNG-induced genotoxicity such as an induction of MNPCEs. Therfore, our results could suggest that flavonol derivtives may be useful as a chemopreventive agent of MNNG.
To investigate the mutation inducibility of surfactin C, we performed the chromosome aberration assay with Chinese hamster lung cells in vitro. The colorimetric MTT screening assay was carried out to determine the cytotoxicity index ($IC_{50}$) of surfactin C. The $IC_{50}$ value was $125{\mu}g/ml$. For the chromosome aberration test of surfactin C, the maximum concentration was employed as $125{\mu}g/ml$, followed by 62.5 and $31.25{\mu}g/ml$ for the lower concentrations, with or without metabolic activation (S9). Cyclophosphamide and mitomycin C were used as positive controls in the presence and absence of S9 metabolic activation, respectively. These results showed that surfactin C was not capable of inducing chromosome aberration, as measured by the chromosome aberration test using Chinese hamster lung cell line. There is no evidence for surfactin C to have a genotoxic potential.
The genotoxicity of water extract of Bojungikkeehapdaechilki-tang was tested by In Vitro Chromosome Aberration Test. Bacterial Reverse Mutation Assay and Micronucleus test according to OECD Guidelines and KFDA Guidelines. The obtained results were as follows : 1. Chromosome Aberration Test: In Vitro Chromosome Aberration Test of Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts was carried out using cultured Chinese hamster lung cells in the presence and absence of metabolic activation system(S-9 mix). No significant changes in the number of aberrant metaphases having structural and number of aberrations were detected in Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts treated groups. 2. Bacterial Reveres Mutation Assay: Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts was evaluated for its potential to induce reverse mutation in the histidine auxotroph strains of Salmonella typhimurium such as TA100, TA1535, TA98 and TAl537 and the tryptophan auxotroph strain of Escherichia coli WP2 uvrA. No significant changes in the number of revertant colonies compared to its negative control were detected in Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts treated groups against all 5 strains. 3. Micronucleus test: Micronucleus test of Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts were performed using specific pathogen free 7-week old male ICR mouse. No significant changes in the number of micronucleated polychromatic erythrocytes among 2000 polychromatic erythrocytes compared to negative control were detected in all Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts treated groups. In summarized above-mentioned results, it is concluded that Bojungikkeehapdaechilki-tang extracts have not genotoxicity against In Vitro Chromosome Aberration Test, Bacterial Reverse Mutation Assay and Micronucleus test.
To investigate the mutant induction of wild ginseng culture extract, we performed chromosomal aberration assay with chinese hamster lung cell in vitro. The test concentration of the extract was decided for the standard with the 50% suppression of cell propagation in the cell. The concentrations for the chromosome test were 1,250, 2,500 and 5,000 ㎍/ml with metabolic activation (+S, 6 hours treatment), 1,100, 2,200 and 4,400 ㎍/ml without metabolic activation (-S, 6 hours treatment) 800, 1,600 and 3,200 ㎍/ml without metabolic activation (-S, 24 hours treatment). No significant increase in chromosome aberrations was observed at any of these concentrations both in the absence and presence of metabolic activation system. Cyclophosphamide monohydrate (CPA) and ethylmethanesulfonate (EMS) caused a significant increase in chromosome aberration. These results may be concluded that wild ginseng culture extract is not capable of inducing chromosome aberration in cultured chinese hamster lung cell regardless of metabolic activation and genotoxicity of that is negative under the present experimental condition.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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