본 연구는 구아바 잎 추출물의 항산화 성분 분석 및 tyroinase와 elastase 저해 효과에 관한 조사를 수행하였다. 추출물의 free radical (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH) 소거활성 $(FSC_{50})$은 50% 에탄올 추출물$(7.05{\mu}g/mL)$ < ethyl acetate 분획 (3.36) < 당을 제거시킨 플라보노이드 aglycone 분획 (3.24) 순으로 증가하였다. Luminol-의존성 화학발광법을 이용한 $Fe^{3+}-EDTA/H_2O_2$계에서 생성된 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)에 대한 구아바 잎 추출물의 총 항산화능은 50% 에탄을 추출물$(OSC_{50},\;2.17{\mu}g/mL)$ (ethyl acetate분획(0.64) < aglycone분획(0.39) 순으로, aglycone 분획에서 가장 큰 환성을 나타내었다. 구아바 잎 추출물에 대하여 rose-bengal로 증감된 사람 적혈구의 광용혈에 대한 억제 효과를 측정하였다. 구아바 잎 추출물의 경우 $1{\sim}10{\mu}g/mL$의 농도에서 광용혈을 억제하였다. 특히 당을 제거시킨 플라보노이드 aglycone 분획은 $1{\mu}g/mL$ 농도에서 ${\tau}_{50}$이 107.5 min으로 매우 큰 세포보호 효과를 나타내었다. 구아바 잎 추출물 중 ethyl acetate 분획의 당 제거 반응 후 얻어진 aglycone 분획은 TLC와 HPLC (360 nm)에서 1개의 피이크로 나타났으며, 그 성분이 quercetin 임을 확인하였다. 구아바 잎 추출물의 ethyl acetate 분획의 TLC 크로마토그램은 5개의 띠로 분리되었고, HPLC 크로마토그램도 5개의 피이크를 나타내었다. TLC와 HPLC의 띠와 피이크를 확인한 결과, HPLC의 5개의 피이크는 용리순서로 피이크 1 (10.32 %)은 quercetin 3-O-gentobioside, 피이크 2 (13.30 %)는 quercetin 3-O-${\beta}$-D-glucoside (isoquercitin), 피이크 3 (11.34 %)는 quercetin 3-O-${\beta}$-D-galactoside (hyperin), 피이크 4 (19.70%)는 quercetin 3-O-${\alpha}$-L-arabinoside (guajavarin) 피이크 5 (45.33%)는 quercetin 3-O-${\beta}$-L-rhamnoside (quercitrin)로 확인되었다. 미백 및 주름억제 효과측정으로는 각파 tyrosinase 및 elastase의 활성 저해 효과를 측정하였다. Tyrosinase의 활성 저해 효과$(IC_{50})$는 50% 에탄올 추출물 $(149.67{\mu}g/mL)$ (ethyl acetate분획(30.67) < aglycone 분획(17.10) 순으로 나타났으며, elastase의 활성 저해 효과 $(IC_{50})$는 50% 에탄올 추출물$(6.60{\mu}g/mL)$ < aglycone 분획(5.66) < ethyl acetate 분획(3.44) 순으로 나타났다. 이상의 결과들은 구아바 잎 추출물리 $^1O_2$ 혹은 다른 ROS를 소광시키거나 소거함으로써 그리고 ROS에 대항하여 세포막을 보호함으로써 생체계, 특히 태양 자외선에 노출된 피부에서 항산화제로서 작용할 수 있음을 가리키며, 구아바 잎 성분에 대한 분석과 ethyl acetate분획의 당 제거 실험 후 얻어진 aglycone분획의 elastase 저해활성은 구아바 잎 추출물이 주름개선 기능성 화장품원료로서 응용 가능성이 있음을 시사한다.
We experienced the specimen that contains a hemoglobin variant known as interference from HbAS in October 2003. It was the first case of Hb variants since Samsung Medical Center began conducting glycohemoglobin College of American Pathologists surveys in 1997. The purpose of this study is to share our experience with the specimen and promote the understanding of Hb variants & derivatives. We've performed cross checks to examine HbA1c by using two pieces of equipment; the TOSHOH G7 and BIO-RAD VARIANT-T(turbo), and Automatic High Performance Liquid Chromatography(HPLC) as an analytic measurement method. HPLC provides different fractional information of hemoglobin with a two-dimensional graph as well as numeric results. We have been performing a "Systematic Checking Process". Three specimen suspicious of Hb variants & derivatives were found through this process. College of American Pathologists notified that it is important for users to be aware of the limitation of their glycohemoglobin method to avoid reporting incorrect results due to interference from hemoglobin variants or hemoglobin adducts. Therefore, laboratory findings of Hb variants & derivatives are very important. The experience of qualified technicians with professional knowledge in Hb variants is the most important aspect in finding Hb variants. Korea is homogeneous in race and is not in an area with a higher finding rate of Hb variants. While 1,024 cases of Hb variants have been found in Japan, we do not have specific data on how many cases of Hb variants have been found in Korea. Considering Hb variant cases in Japan, which is geographically close to us, it is presumed that there must be various Hb variant cases in Korea. If domestic laboratories set a systemic protocol and build a network to share our experience in Hb variants, I expect the Korean Hb variants could also be listed on the world's Hb variant list.
남조류독소, 마이크로시스틴을 초임계유체추출을 이용하여 추출하는 새로운 분석법이 개발되었다. 이 연구에서 사용된 마이크로시스틴들은 초임계 유체 CO$_2$에는 거의 녹지 않지만 90% CO$_2$, 9.0% 메탄올, 1.0% 물로 된 혼합유체를 사용한 결과 성공적으로 추출할 수 있었다. 이 연구에서 사용된 초임계 유체 추출법은 고체상추출법보다 많은 장점들을 가지고 있다. 우선 시료처리단계가 줄어들고, 시료의 손실이 적으며, 분석시간을 단축시킬 수 있다는 장점들이 있다. 또한 전처리 단계가 생략된다는 장점도 있다. ODS 카트리지를 사용하는 고체상 추출법에서 ODS 카트리지가 마이크로시스턴에 대한 흡착력이 떨어지기 때문에 좀 더 극성이 있는 CN 카트리지에 주입시켰다. CN 카트리지는 물 5mL, 0.5 M 아세트산 5mL, 5% 아세트니트릴 5mL로 빗은 후 70% 아세트니릴로 최종용리시킨 후 HPLC로 분리하였다. CN 카트리지를 사용하였을 때 ODS 카트리지보다 더 좋은 회수율과 크로마토그램을 보여주었다.
본 연구에서는 닥나무 추출물의 항산화 활성과 성분 분석에 관한 연구를 실시하였다. 닥나무 추출물은 우수한 free radical(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH) 소거활성($FSC_{50}=8.53{\mu}g/mL$)을 나타내었다. Luminol-의존성 화학발광법을 이용한 $Fe^{3+}-EDTA/H_2O_2$계에서 생성된 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)에 대한 에틸아세테이트 분획의 총항산화능(OSC50)은 $1.69 {\mu}g/mL$이었다. 닥나무 추출물에 대하여 $^1O_2$으로 유도된 사람 적혈구의 광용혈 실험 결과 에틸아세테이트분획은 $10{\mu}g/mL$의 낮은 농도에서 ${\tau}_{50}$이 183.3 min으로 대표적인 항산화 물질로 알려진 $\alpha$-tocopherol (${\tau}_{50}$ = 38.00 min)보다 매우 큰 세포보호 효과를 나타내었다. TLC, HPLC, LC/ESI-MS/MS 및 $^1H$-NMR을 이용하여 닥나무 추출물 에틸아세테이트 분획의 성분 분석을 수행하였다. 그 결과, 닥나무 추출물 에틸아세테이트 분획은 kazinol류의 kazinol J와 플라보노이드류인 luteolin을 함유하고 있음을 확인하였다. 이상의 결과들은 닥나무 추출물이 $^1O_2$ 혹은 다른 ROS를 소광시키거나 소거함으로써, 또는 이에 대항하여 세포막을 보호함으로써, 생체계 특히 태양 자외선에 노출된 피부에서 항산화제로서 작용할 수 있음을 가리키며 기능성 화장품 원료로서 응용 가능성이 있음을 시사한다.
원지(Polygala tenuifolia, Polygalaceae)에 함유되어 있는 ${\beta}$-carboline계의 알칼로이드를 HPLC를 이용하여 정량하는 방법을 검토하였다. 고정상으로는 RP-18 컬럼을 사용하였고, 이동상으로는 $CH_3CN$과 0.01M 인산완충액(pH=3.5)을 기울기 용리시켰으며, UV254nm에서 검출하였다. 알칼로이드 분획을 얻기 위한 전처리 방법으로 산, 염기 처리에 의한 용매추출법과 양이온교환수지(Amberlyst 15)를 이용한 고상추출법을 비교한 결과 양이온 교환수지를 이용한 방법에서 더 나은 크로마토그램을 얻을 수 있었으며, 정량 결과 원지 중 알칼로이드 함량은 각각 harman $2.8{\times}10^{-3}%$, norharman $1.7{\times}10^{-3}%$, 1-carbomethoxy-${\beta}$-carboline $1.3{\times}10^{-3}%$, 1-carboethoxy-${\beta}$-carboline $1.4{\times}10^{-3}%$, perlolyrine $3.3{\times}10^{-3}%$로 나타났다.
토양(土壤), 수(水), 농작물(農作物)중 잔류(殘留)하는 각종(各種) 농약(農藥)의 분석(分析)을 위한 수증기증류법(水蒸氣蒸溜法)의 응용성(應用性) 및 정밀도(精密度)등에 대하여 연구검토(硏究檢討)하였다. 수증기증류(水蒸氣蒸溜)에 의하여 추출(抽出)이 가능(可能)했던 농약(農藥)은 PCNB, ${\alpha}-BHC$, ${\beta}-endosulfan$, IBP, diazinon, fenitrothion, fenthion, alachlor, butachlor, pretilachlor, metolachlor, pendimethalin, benthiocarb, molinate등이었으며 simazine, atrazine, nitrofen등은 불가능(不可能)하였다. 농약(農藥)의 증류(蒸溜)까지 요(要)하는 유출액양(溜出液量)은 농약(農藥)의 종류(種類)에 따라 크게 달랐으며, 일정량(一定量)의 유출액(溜出液)을 취(取)한 후 냉각관(冷却管)을 acetone으로 씻어 줌으로써 증류시간(蒸溜時間)을 단축(短縮)시킬 수 있었다. 수증기증류법(水蒸氣蒸溜法)은 소량(小量)의 유기용매(有機溶媒)로 농약(農藥)의 추출(抽出)이 가능(可能)했으며, 분석대상물질(分析對象物質)에 따라서는 기기분석시(機器分析時) 방해물질(妨害物質)이 검정(檢定)되기는 했지만 많은 경우 농축(濃縮)과 정제과정(精製過程)을 생략(省略)할 수도 있어 매우 유용(有用)한 방법(方法)이라 하겠다.
In this study, the cellular protective effect, antioxidative property and component analysis of Euphorbia humifusa extracts were investigated. The ethyl acetate fraction ($3.68\;{\mu}g/mL$) and aglycone fraction ($3.15\;{\mu}g/mL$) of Euphorbia humifusa extract showed prominent free radical (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH) scavenging activity ($FSC_{50}$). Reactive oxygen species (ROS) scavenging activity ($OSC_{50}$) of Euphorbia humifusa extract on ROS generated in $Fe^{3+}$-EDTA/$H_2O_2$ system was investigated using the luminol-dependent chemiluminescence assay. The ethyl acetate fraction ($0.43\;{\mu}g/mL$) and aglycone fraction ($0.35\;{\mu}g/mL$) of extract showed higher ROS scavenging activity than L-ascorbic acid ($1.50\;{\mu}g/mL$). The cellular protective effects of fractions of Euphorbia humifusa extract on the rose-bengal sensitized photohemolysis of human erythrocytes were investigated. The ethyl acetate fraction and aglycone fraction of extract protected cellular membranes against ROS in a concentration dependent manner ($5{\sim}25\;{\mu}g/mL$), and was more effective than (+)-${\alpha}$-tocopherol, lipid peroxidation chain blocker. Aglycone fraction from Euphorbia humifusa extract showed 2 bands in TLC and 2 peaks in HPLC. In HPLC chromatogram of aglycone fraction, peak 1 and peak 2 were identified as quercetin and kaempferol, respectively. And these components are very effective as antioxidant. Thus, these results indicate that fractions of Euphorbia humifusa extracts can function as antioxidant in biological systems, particularly skin exposed to UV radiation by scavenging $^1O_2$ and other ROS, and protect cellular membranes against ROS. Fractions of Euphorbia humifusa extracts can be applicable to new functional cosmetics for antioxidant.
(l) 핵산관련물질 생산균주의 분리를 위한 변이 유기제와 최적 처리조건은 UV; 30 cm, 1 min, NTG; 200 $\mu\textrm{g}$/ml, 20min, DES; 0.32 %, 90 min, EMS; 5%, 60 min 이었으며 이때 변이솔는 각각 0.083 %, 0.67%, 1.1 %, 및 0.45%로 DES가 가장 양호하였다. (2) Purine 영양요구변이주 239 strain 중 5'-IMP 생산균주는 모두 6 strain이었으며 이중 adenine-guanine 동시요구주 D-2150이 4.8mg/ml로 가장 우수하였다. (3) D-21530 strain의 배양액에서 얻은 결정을 paper chromatogram의 Rf치, 자외선 및 적외선 흡수 spectum 비교, 가수분해에 의한 hypoxanthine 생성량 및 orcinol 반응에 의한 D-ribose의 생성량을 검토한 결과 5'-IMP로 동정되었다. 이 연구을 할때 협력하여 주신 제일제당주식회사 김홍집 상무, 그리고 핵산의 정량분석을 하여준 문화식 씨에게 감사드립니다.
낙동강의 수질에 큰 영향을 미치는 금호강 하류 하상에서의 저니토 중 PCBs 잔류량을 조사할 필요가 있다. 따라서 금호강과 낙동강 합류점으로부터 7.5km까지의 금호강 하상저니토 중 PCBs의 잔류량을 평가하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 첫째, PCBs가 염소화되어 DCB로 전환되었으며, DCB의 최소검출량은 2pg이었고, 저니토 중 PCBs의 최저 검출농도는 0.5ng/g이었다. 둘째, 시료 100점에 대한 PCBs의 검출빈도는 79%였다. 전체 시료에서 50ng/g이하인 시료가 49%였으며 400ng/g이상인 시료가 9%였다. 셋째, PCBs농도는 금호강과 낙동강의 합류점으로부터 7.5km까지의 거리에서는 큰 변화가 없었다. 넷째, $0{\sim}250cm$까지의 저니토 깊이에 따른 PCBs분포에서, $50{\sim}100cm$ 깊이에서의 PCBs농도는 평균농도보다 높았다. 다섯째, 저니토 중 COD의 평균농도는 $14.5{\pm}11.4mg/g$였고, Org.C의 평균농도는 $3.41{\pm}3.55%$였다. 여섯째, 점토 및 유기물 함량이 낮은 모래 토양의 PCBs 농도는 평균농도의 115%로 높았다. 그러나 점토 및 유기물 함량이 높은 저니토에서의 PCBs농도는 평균농도의 69%로 낮았다. 일곱째, 시료 100점 에 대한 PCBs의 평균농도는 $131{\pm}156ng/g$이었다. 이는 일본 환경청의 PCBs에 대한 하상제거기준 10000ng/g보다 매우 낮았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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