A gene can be selectively overexpressed in E. coli by utilizing the phage T7 RNA polymerase's stringent recognition and active transcription of the T7 promoter. The T7 expression system was constructed such that the T7 RNA polymerase gene is under the control of lacUV5 promoter in one plasmid, and that the target gene, the promoterless chloramphenicol acetyltransferase (CAT) gene with E. coli ribosome binding site is under the control of T7 promoter in the other plasmid. Only the E. coli cells containing both plasmids show high resistance to chloramphenicol. When the copy number of the runaway plasmid containing the polymerase gene was varied by a temperature shift, amounts of the CAT protein synthesized upon induction was correspondingly changed as shown in SDS gel electrophoresis.
S. aureus에서 분리된 plasmid pSBK203 상의 CAT 유전자 염기서열을 결정하였으며 유발성 발현현상이 확인되었다. 염기서열 결과에 의해 예측된 단백질의 아미노산 서열 분석결고 pC221-CAT 와는 78%의 가장 높은 상동성을 나타냈으며 pC194-CAT와는 55%, 그람음성균 유래의 CAT 중 하나인 Tn9-CATdhkss 38%의 상동성을 각각 보여주고 있었다.
Background: The objective of this study was to develop an efficient selectable marker for transgenic Dunaliella salina. Results: Tests of the sensitivity of D. salina to the antibiotic chloramphenicol and the herbicide Basta$^{(R)}$ showed that cells ($1.0{\times}10^6cells/ml$) treated with 1000 or $1500{\mu}g/ml$ chloramphenicol died in 8 or 6 days, respectively, whereas D. salina cells ($1.0{\times}10^6cells/ml$) treated with 5, 10, 20, or $40{\mu}g/ml$ Basta$^{(R)}$ died in 2 days. Therefore, D. salina is more sensitive to Basta$^{(R)}$ than to chloramphenicol. To examine the possibility of using the phosphinothricin N-acetyltransferase (pat) gene as a selectable marker gene, we introduced the pat genes into D. salina with particle bombardment system under the condition of helium pressure of 900 psi from a distance of 3 cm. PCR analysis confirmed that the gene was stably inserted into the cells and that the cells survived in $5{\mu}g/ml$ Basta$^{(R)}$, the medium used to select the transformed cells. Conclusions: The findings of this study suggest that the pat gene can be used as an efficient selectable marker when producing transgenic D. salina.
Nopaline synthase promoter의 upstream element region을 본딴 nos-RP 요소라고 불리워진 합성 oligomer는 nos wild type promotor의 5' end에서부터 - 101까지를 절단한 promoter의 upstream에 삽입하였다. Nos promoter의 활성은 nos promoter와 연결되어 있는 reporter gene인 Chlorarnphenicol과 $\beta$-glucuronidase유전 인자들이 발현되는 현상을 연구함으로써 측정하였다. 형질 전환된 유전인자를 가지고 있는 담배 식물에 대한 분석은 nos minimal promoter의 활성이 합성 nos-RP 요소가 삽입됨으로써 회복될 수 있음을 보여 주었다. 또한 Nos minimal promoter의 upstream에 nos-RP 요소의 삽입은 여러 가지 환경적인 요소들인 auxin, dithiothreitol, salicylic acid 그리고 methyl jasmonate에 의해서 활성이 증가됨을 보여 주었다.
Trout CYP1A-CAT expression construct was generated by cloning -3.5 Kb $5^I$ flanking DNA of trout liver CYP1A gene in front of CAT gene at pCAT-basic vector. Hepa 1 cells, which are known to contain a functional arylhydrbcarbon $receptor^I$ were transfected with trout CYP1A-CAT using lipofectin. 3-Methylcholanthrene (1 nM) was added into hepa 1 cells in culture in order to examine if $5^I$ flanking DNA of trout CYP1A gene could interact with mouse transactivating factors to bring about transcription of the chloramphenicol acetyltransferase(CAT) reporter gene. The level of CAT protein was measured by CAT ELISA and the level of CAT mRNA was determined by RTPCR. The treatment of 1 nM 3-methylcholanthrene resulted in two fold increases in CAT protein as well as CAT mRNA compared to untreated control hepa 1 cells. These data indicate that arylhydrocarbon receptors of mouse hepa 1 cells are functional to activate exogenously transfected trout CYP1A-CAT construct in terms of both transcription and translation of CAT. We also examined the effect of 3-methylcholanthrene on endogenous cyplal activity in hepa 1 cell. 3-Methylcholanthrene (1 nM) treatment to hepa 1 cells trahsfected with trout CYP1A-CAT construct stimulated the level of cyp1a1 mRNA by two folds and the activity of ethoxyresorufin-O-deethylase by two fold compared to that of control cells. In this study we reported that trout CYP1A-CAT reporter gene expression construct could be expressed by 3-methylcholanthrene treatment in mouse hepa 1 cells. Thus trout CYP1A-CAT could serve as a good model to study the mechanism of regulation of CYP1A1 gene expression.
Escherichia coli 내에서 프로모터활성을 보이는 Zymomonas mobilis 유래의 유전자 절편을 분리하고 특성을 분석하였다. 프로모터 탐색용 벡터인 pCMT215는 promoter activity가 없는 pMT21의 HinIII 위치에 pYEJ001의 클로람페니콜 아세틸전이 효소유전자를 함유한 0.7-kb HindIII 조각을 접합시켜 제조하였다. E. mobilis의 chromosomal DNA를 Sau3AI으로 부분절단하여 pCMT215에 도입한 후, 이를 이용하여 대장균을 형질전환시킨 결과 14개의 형질전환주가 선별되었다. 이들은 30-750 $\mu$g/$m\ell$ 농도의 chloramphenicol에 내성을 보였으며 클로닝된 유전자조각의 크기는 0.1-1.5Kb였다. 이 가운데 5개의 염기서열을 분석해 본 결과 일반적인 프로모터의 염기서열과 많은 유사점이 발견되었는데, 대장균의 프로모터인 -35 또는 -10 지역과의 부분적인 일치와 A 또는 T 염기가 풍부한 지역과 연속적인 A 또는 T 염기배열, 그리고 회문형태의 염기서열 등이 발견되었다. 또한 대장균 내에서의 프라이머 연장실험결과 Z. mobilis로부터 유래된 DNA조각에서 전사의 시작이 4-170 염기의 거리를 두고 두 곳 또는 여러 곳에서 일어남을 알 수 있었다.
DNA transfection conditions were investigated by calcium phosphate-DNA co-precipitation in SK-N-BE(2)C human neuroblastoma cells. The DNA plasmid of TH2400CAT was used in which rat tyrosine hydroxylase gene was inserted into chloramphenicol acetyltransferase reporter gent. The transfection efficiency was 25-30% and the method was simple and reproducible. So, the method will be a good tool for transient transfection analysis.
Promoters which are useful for constructing expression vectors for lactic acid bacteria were obtained from the chromosomal DNA of Lactococcus lactis ssp. lactis MG1363. pBV5030, a promoter-selection vector, replicates in L. lactis and Escherichia coli and carries a promoterless chloramphenicol acetyltransferase gene (cat-86). After examining E. coli transformants which grew on LB media containing chloramphenicol (Cm, 20$\mu\textrm{g}$/mL) , many MG1363 derived DNA fragments which encompass promoter sequences were identified. Some recombinant E. coli cells can grow at the Cm concentration of 1,000$\mu\textrm{g}$/mL. When plasmids from those highly resistant E. coli cells were purified and introduced into L. lactis ssp. lactis MG1614 cells by electroporation, lactococcal transformants showing Cm resistance were obtained. So far, five plasmids with different promoter inserts were introduced into L. lactis MGl614 cells. The maximum level of Cm resistance in L. lactis MG1614 transformants was quite low (20$\mu\textrm{g}$/mL) when compared with that observed in recombinant E. coli cells harboring the same plasmids.
Park, Soo-Dong;Lee, Sang-Nam;Park, Ik-Hyun;Choi, Jong-Su;Jeong, Wol-Kyu;Kim, Youn-Hee;Lee, Heung-Shick
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
제14권4호
/
pp.789-795
/
2004
A promoter-probe shuttle vector pSK1Cat was constructed for the isolation of transcriptional signal sequences from Corynebacterium glutamicum. Besides conferring resistance to kanamycin in Escherichia coli and C. glutamicum, the vector carried a promoterless cat gene to confer resistance to chloramphenicol upon insertion of the appropriate transcriptional signals in the multiple cloning site. By utilizing the vector, a series of transcriptionally active fragments were isolated from the genome of C. glutamicum. The clones, ranging from 200 bp to 1 kb in size, were grouped into 3 classes of strong, medium, and weak, based on the chloramphenicol acetyltransferase (CAT) activity and sensitivity to the chloramphenicol of the clone-carrying C. glutamicum cells. C. glutamicum cells carrying the $P_{19}$ clone, a representative in the strong class, were able to grow on minimal agar plates containing over $40 mg/mell$ chloramphenicol, and showed CAT activity of 10 m㏖/mgㆍmin, performing slightly better than the cells carrying $P_{tac}$ , a strong E. coli promoter. Subcloning analysis of the $P_{19}$ clone identified a 180 bp intergenic fragment ($P_{180}$), which was located upstream of a gene encoding a hypothetical membrane protein. The expression conferred by $P_{180}$ was not affected by either the kinds of carbon sources or changes in temperature. These properties make the $P_{180}$ clone useful for the deregulated expression of biosynthetic genes in C. glutamicum during amino acid fermentation.
발광 박테리아인 Photobacterium 종들의 lux 오페론 하부 영역에서 riboflavin 생합성에 관여하는 유전자들(ribⅠ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ)이 발견되었다. Photobacterium phosphoreum의 lux 유전자와 rib 유전자를 포함하는 intergenic 영역의 단일사슬 DNA가 P. phosphoreum의 mRNA에 의하여 S1 nuclease digestion에서 손상받지 않았으며, ribⅠ에 의하여 암호화되는 P. phosphoreum의 riboflavin synthase의 활성도가 lux-specific한 효소들인 luciferase 혹은 fatty acid reductase 활성도와 같이 bioluminescence intensity의 발현과 함께 대수기 말기에서 증가하는 박테리아 발광반응의 특이한 조절 체계인 'autoinduction' 양상을 보였다. 또한 P. leiognathi의 luxB로부터 ribⅡ까지 포함하는 DNA를 강력한 lux 프로모터와 reporter(chloramphenicol acetyl transferase, CAT) 유전자 사이에 삽입하고 접합(conjugation)의 방법으로 P. leiognathi에 유전자 전이(gene transfer)시켜 CAT reporter 유전자의 발현을 P. leiognathi에서 조사한 바, 그 유전자의 발현 정도에 큰 차이가 없었을 뿐만 아니라 이 구조에서 lux 프로모터를 제거하게 되면 CAT reporter 유전자의 발현이 전혀 나타나지 않았다. 이들 실험 결과들은 lux 유전자와 rib 유전자의 intergenic영역에 lux 오페론의 전사 종결 구조(transcriptional terminator)가 존재하지 않으며 ribflavin 생합성 유전자들이 그들 고유의 프로모터에 의하여 전사되는 것이 아니라 lux 오페론의 프로모터에 의하여 발현됨을 나타내는 것으로, 이는 Photobacterium 종들에서 lux 유전자와 rib 유전자들은 공동의 발현 조절 체계를 갖는 것으로 요약된다.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.