• 한국가금학회지
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• 제41권4호
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• pp.249-259
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• 2014

동결 닭 원시 생식 세포의 생식계열 키메라를 이용한 생체에의 복원을 실용화 하기 위해서는, 닭 원시 생식 세포의 동결 보존 기술의 향상에 의해 동결 및 융해 후의 많은 생존세포를 확보하는 것이 반드시 필요하다. 닭 원시 생식 세포는 배양 5.5일령의 닭 원시 생식선으로부터 채취하고, MACS 방법에 의해서 순수 닭 원시 생식 세포를 분리했다. 15% 각각의 EG를 동결 보호제로 사용한 처리군이 각 군의 농도에 상관없이 유의적(p<0.05)으로 PG 처리군보다 동결 및 융해 후의 세포의 생존율이 높음을 확인하였다. 특히, 동결 보호제로 10% EG를 이용한 유리화 처리군에서 85.63%로 동일한 농도의 PG 처리군(66.81%)보다 유의적(p<0.05)으로 가장 높은 생존율을 보였다. 한편, 10% EG를 이용한 완만 동결 처리군에서 66.14%로 동일한 농도의 PG 처리군(50.11%)보다 유의적(p<0.05)으로 가장 높은 생존율을 보였다. 이상의 결과들로부터 유리화 동결에 있어서 가장 높은 생존율을 보인 10% EG이 최적의 동결 보호제로서 사용 가능함을 확인하였고, 이는 한국재래닭(오계)의 원시 생식 세포의 동결 보존의 실용화가 보다 더 향상될 수 있는 또 하나의 방법이 될 수 있음을 시사한다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제36권1호
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• pp.65-70
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• 2012

귀중한 한국재래닭의 배반엽세포를 냉동보존하고, 키메라 닭을 통한 재래종의 복원을 도모하는 방법을 실용화하기 위해서, 한국재래종의 배반엽세포에 있어 최적의 동결 방법에 대해 검토했다. 배반엽세포의 동결은 세포를 단리한 후, 항동해제와 소태아혈청(FBS)를 함유하고 있는 동결용액 중에 부유하고 수지성 동결용기 중에 넣고, $-7^{\circ}C$에서 동결시키고 나서 분당 $-1^{\circ}C$에서 $-35^{\circ}C$까지 냉각하고 액체질소 안에 침지시켜서 실험을 진행했다. 동결조작 중에서 (1) 동결 전의 세포의 단리 방법, (2) FBS 농도, (3)동결 시 세포밀도가 동결융해 후의 세포생존율에 미치는 영향을 조사했다. (1) 세포의 단리 방법을 피펫팅으로부터 시험관 믹서에 의한 단시간의 flushing으로 변경하면, 동결융해 후의 세포의 생존율이 29%부터 51%로 향상된다. (2) 동결용액 속 FBS 농도를 20%에서 80%로 증가시키면 동결융해 후의 생존율이 28%에서 35%로 증가한다. 또한, (3) 융해 후, 생존율은 (2개의 배자/0.5 ml) 처리군에서의 동결은 34%인 반면에, (20개의 배자/0.5 ml)에서는 44%였다. 더욱이, 이 세 가지 개선점을 조합함으로써 동결융해 후의 생존율은 60%로, 개선 전의 41%에 비하여 크게 개선이 될 수 있고, 한국재래종의 배반엽세포의 동결보존의 실용화가 보다 더 향상될 수 있는 방법이 될 수 있음을 시사한다.

• 한국가금학회:학술대회논문집
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• 한국가금학회 2006년도 제23차 정기총회 및 학술발표회
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• pp.43-58
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• 2006

As a bioreactor, bird has proved to be most efficient system for producing useful therapeutic proteins. More than half of the egg white protein content derives from the ovalbumin gene with four other proteins(lysozyme, ovomucoid, ovomucin and conalbumin) present at levels of 50 milligrams or greater. And the naturally sterile egg also contains egg white protein at high concentration allowing for a long shelf life of recombinant protein without loss in activity. In spite of these advantages, transgenic procedures for the bird have lagged far behind because of its complex process of fertilized egg and developmental differences. Recently, a system to transplant mouse testis cells from a fertile donor male to the seminiferous tubules of an infertile recipient male has been developed. Spermatogenesis is generated from transplanted cells, and recipients are capable of transmitting the donor haplotype to progeny. After transplantation, primitive donor spermatogonia migrate to the basement membrane of recipient seminiferous tubules and begin proliferating. Eventually, these cells establish stable colonies with a characteristic appearance, which expands and produces differentiating germ cells, including mature spermatozoa. Thus, the transplanted cells self-renew and produce progeny that differentiate into fully functional spermatozoa. In this study, to develop an alternative system of germline chimera production that operates via the testes rather than through developing embryos, the spermatogonial stem cell techniques were applied. This system consisted of isolation and in vitro-culture of chicken testicular cells, transfer of in vitro-maintained cells into heterologous testes, production of germline chimeras and confirmation of germline transmission for evaluating production of heterologous, functional spermatozoa.

• 한국가금학회지
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• 제12권2호
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• pp.135-143
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• 1985

관절염(또는 건초담), 발육부전증을 보이는 12주령 이하의 브로일러 종계와 브로일러에서 8주의 바이러스를 분리하여 avian reovirus로 동정하였다. 부리된 reovirus는 전자현미경에서 이중막을 갖는 구형으로 virion의 직경은 81nm였으며 한천겔침강반응에서 기지의 reovirus(S-1133 주) 및 항혈청(항 S-1133주 및 R-1주)과 반응하였다. 분리된 revirus는 혈구응집능력이 없었으며 chloroform, IUdR 및 열처리(56$^{\circ}C$, 30분)에 강한 저항성을 나타내었다. Reovirus의 감염성 측정시 계 태아섬유아세포 및 가세포배양과 Vero cell 배양에서 세포분주와 동시에 바이러스를 접종하거나 단층세포가 형성된 후접종하거나 간에 별다른 차이없이 감염 4-5일후에 end point에 도달되었다. 분리된 reovirus를 계태아간세포배양에 5-10대 계대배양한 후 $10^{5.0}$ TCI $D_{50}$의 바이러스를 10일령 발육계란의 장요막상에 접종하였을 때 평균치사시간이 국내분리주는 54-59시간인데 반하여 S-1133주는 73시간으로 약간 길었다.

• 대한수의학회지
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• 제40권1호
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• pp.110-116
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• 2000

Duck viral hepatitis is an acutic, highly infectious viral disease of young ducklings. The most practical means for controlling duck viral hepatitis is the vaccination of ducklings or of a breeding stock. We attempted to develop a vaccine strain of duck hepatitis virus (DHV) using a Korean isolate by serial chicken embryo passages. The propagation of DHV in chicken embryos was carried 140 passages. After the $50^{th}$ passage, of which the virus was non-pathogenic for ducklings, approximately every $20^{th}$ passage of the virus was tested for vaccinal efficacy. Both the $70^{th}$ and $90^{th}$ passage of the virus gave good protection against challenge infection to a DHV-DRL reference strain(type 1) and a virulent Korean isolate. The $110^{th}$, $125^{th}$ and $140^{th}$ passage of the virus were less protective than the $70^{th}$ and $90^{th}$ passage, which means that more than $110^{th}$ passage may lead to over-attenuation of the virus. Ducklings vaccinated with the chicken-embryo-adapted virus by oral, intramuscular or eye drop administration showed earlier resistance to challenge infection from 3 to 7 days postvaccination. Of the above methods, ducklings vaccinated intramuscularly presented the most rapid resistance against challenge. The minimum immune dose of the chicken-embryo-adapted virus in ducklings was also studied. Ducklings inoculated with a dose of $10^{2.0}\;ELD_{50}$ and below were not fully protected against challenge with a virulent DHV, showing a protection rate of 67% to 73%, but ducklings inoculated with a dose of $10^{3.0}\;ELD_{50}$ and over were completely protected. The virus yield of the chicken-embryo-adapted DHV was examined at 24hrs and 48hrs of the incubation time in the allantoic fluid, embryo head and embryo minus head of the embryonating egg. In all three components, the titer of the virus was higher at 48 hours than that at 24 hours after incubation. And the titer of the virus was higher in the embryo minus head, embryo head and the allantoic fluid, in order. Field trials for evaluating the efficacy of the attenuated DHV as a live vaccine were done in duck farms with about 25% mortality of flocks resulting from duck viral hepatitis. After the use of the experimental vaccine, the mortality due to duck viral hepatitis was dramatically reduced in the farms. These results indicated that the attenuated DHV using a Korean isolate could be a good candidate as a live vaccine strain of DHV in Korea.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제11권3호
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• pp.219-226
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• 2007

본 연구는 생식선 키메라 생산효율을 높이기 위한 방법으로 busulfan 가온 주입법을 이용하여 효과적인 원시생식 세포의 이동능력을 검증하였다. 효율적인 생식선 키메라 닭 생산에서 중요한 요건 중 하나인 공여체 원시생식세포의 생존율을 측정한 실험에서는 시간이 지남에 따라 생존율에 변화를 보였으나, 평균 $70{\sim}80%$을 유지하고 있었으며, busulfan 처리 유무에 따른 공여체 원시생식세포 이동능력은 형광염색 후 주입한 실험에서 대조구가 4.8%인 반면 실험구는 23.5%을 나타냈다. 이식전 원시생식세포 배양 조건에 따라, 96시간과 118시간 배양 처리구에서 높은 이동능력을 보여 주었다. 원시생식세포의 형태학적, 생리학적 특징을 응용한 이식방법은 매우 효과적일 것이다. 그리고 본 연구에서는 생식반월의 발달단계 별 busulfan 처리 효과는 48시간이 가장 높은 53.4%였으며, 그러나 본 연구에서는 생식반월 유래 원시생식세포 이식은 48시간 이전, 혈관계가 발달하기 직전으로 가장 높은 효율을 보였다. 결론적으로 생식선 키메라 방법을 통한 형질전환 닭 생산 연구의 가장 큰 관건은 최대한 많은 수의 공여체 원시생식세포가 수용체의 저해작용 없이 안정적으로 수용체 gonad로 이동하여 분화하는 것으로, 본 연구 결과를 토대로 개선된 방법을 이용하면 높은 효율의 생식선 키메라 닭이 생산될 것으로 사료된다.

• 한국가금학회지
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• 제19권2호
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• pp.107-112
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• 1992

부화계란의 요막강로 접종된 Eimeria tenella의 sporozoites는 장요막에서 그들의 생활사를 완성하였으며 살아있는 성숙 충난을 생산하였다. 또한 이 원충은 변화계란에서의 연속계대를 통하여 지속적으로 형요막에 적응하여 변화계란내 계대회수가 증가함에 따라 변화계란에서의 생산성은 증가되는 반면에 병원성은 감소하는 것으로 나타났다.

• 대한수의학회지
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• 제20권1호
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• pp.11-15
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• 1980

순수하게 분리 정제된 AAAV를 "helper"인 가금 adenovirus와 공동으로 11일령의 계태아에 감염시켰으며 토끼 유래 특히 항혈청을 사용하여 AAAV의 증식성을 추시하였다. AAAV의 증식은 "helper"와의 공동감염인 경우에만 인정되었으며 "helper"의 양과 AAAV의 증식은 서로 일치하였으나, AAAV와의 공동감염인 경우 "helper"의 증식은 억제되는 경향을 보였다. 이 시험에 공여된 7주의 가금 adenovirus중 6주는 AAAV의 증식을 위한 "helper"능을 부여하였으며 "helper"로써의 기능은 계태아에서의 증식성과 일치하였다. 계태아에 순화된 (CELO) 바이러스를 "helper"로 하여 계태아에서의 AAAV의 증식을 조사한바, $10^5$ PFU의 CELO 바이러스를 "helper"로 하였을 경우 접종후 5일에 최고에 달하였다.

• BMB Reports
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• 제41권12호
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• pp.875-880
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• 2008

Mbu-3 is a novel mouse brain unigene that was identified by digital differential display. In this study, expression of the gene was chased through developmental stages and the protein product was identified in the brain. The cDNA sequence was 3,995-bp long and contained an ORF of 745 AA. Database searches revealed that the chicken SST273 gene containing LRR- and Ig-domain was an mbu-3 orthologue. Tissue specificity for the gene was examined in embryos and in brains at post-natal and adult stages. During the embryonic stages, mbu-3 was localized to the central nervous system in the brain and spinal cord. In the early post-natal stages, the gene was evenly expressed in the brain. However, with aging, expression was confined to specific regions, particularly the hippocampus. The protein was approximately 95 kDa as determined by Western blot analysis of brain extracts.

• Applied Microscopy
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• 제23권2호
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• pp.78-83
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• 1993

To investigate the effect of mercuric chloride on the pectoral muscel cells during chick embryogensis, chicken embryos were treated with mercuric chloride. Monoclonal antibodies against myosin were prepared for the localization of differentiation of thick filaments detected by the use of protein A-gold complex as a cytochemical marker. The effect of mercuric chloride was appeared not only to be ascribed with the reduced formation of myofibrilogenesis but also associated with induced change of morphology by the inhibition of protein synthesis.