국내 20개 지역의 소나무재선충병에 감염된 소나무와 잣나무에서 분리된 소나무재선충으로부터 총 110개의 세균을 분리하여 동정한 결과 Cedecea neteri(64균주)가 가장 높은 빈도로 검출되었으며, 다음으로 Ewingella americana(21균주), Pseudomonas sp.(15균주), Flavobacterium sp.(8균주), Rahnella aquatilis (2균주) 순으로 분리되었다. 분리된 세균의 phytotoxin 생성능을 조사한 결과 Pseudomonas sp.(Ba2) 세균은 해송 유묘에 갈변과 고사를 유발하였다. 21개의 항생물질을 이용하여 분리된 3개의 세균, Pseudomonas sp.(Ba2), E. ameircana(Ba4), C. neteri(Ba10)에 대한 감수성 조사 결과 carbenicillin, doxcycline, tetracycline에서 생장억제 효과가 높게 나타났다.
꽃양배추 '은배' 종자를 무균 파종한 후 6일째된 하배축 조직을 BA 1㎎/L, sucrose 30㎎/L한천 8 g/L가 첨가된 MS 재분화배지에 1일간 전처리한 다음, PI promoter-GUS 융합 유전자가 도입된 Agrobacterium tumefaciens LBA 4404와 2일간 동일조성의 MS 액체배지에서 공동배양하여 carbenicillin 500 ㎎/L와 kanamycin 20 ㎎/L가 첨가된 MS 재분화배지로 옮겨 주었을 때 가장 많은 형질전환체를 얻을 수 있었다. PCR 분석결과, PI promoter-GUS 융합 유전자가 형질전환체의 게놈상에 삽입되어 있음을 확인하였다. Southern 분석결과, ECL-labelling된 PI promoter-GUS 융합 유전자 probe의 coding sequence와 동일한 것으로 판단되는 약 366bp 위치에서 밴드를 확인할 수 있었다. 그러나 형질 전환되지 않은 식물체에서는 이들 밴드를 확인할 수 없었다. 조직내 GUS 유전자의 활성은 잎부위에서부터 시작하여 엽병과 줄기의 관다발을 중심으로 나타났으며 상처의 정도가 심할수록 높은 편이었고 그 범위도 넓었다.
형질전환 효율을 높이기 위하여, NPTII와 GUS유전자를 포함하고 있는 pIG121Hm을 미세 입자에 코팅하여 particle bombardment를 수행한 후 pIG121Hm가 도입된 Agrobacterium tumefaciens EHA101와 3일간 공동 배양하였다. 그 후 캘러스를 1mg/L 2,4-D, 0.1mg/L BAP, 100mg/L kanamycin, 그리고 200mg/L carbenicillin이 포함된 MS배지로 옮겨 4주간 성장시킨 후 kanamycin저항성 캘러스를 선발하여 GUS 발현을 관찰하였고, PCR 분석을 통하여 700 bp의 NPT II 유전자가 도입된 것을 확인하였다. Particle bombardment 후 Agrobacterium과 공동배양 한 처리구가 Agrobacterium과 공동배양만 한 처리구보다 GUS발현 분석에 의한 형질전환 효율이 3배정도 더 높았다 형질전환 된 재분화 식물체를 얻기위해 다시 선발된 kanamycin저항성 캘러스는 1mg/L NAA와 1mg/L BAP가 포함된 재분화 배지에 옮겨져 4주 후 형질전환 된 소인경을 형성하였다.
1983년 6월부터 1986년 6월까지 영남대학병원 임상검체에서 분리된 세균의 항생제 감수성시험 성적의 통계적 고찰을 시행하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. Staphylococcus aureus는 cephalothin에 가장 감수성이 높았으며, methicillin에 대한 감수성은 점차 감소되었다. 2. enterococcus를 제외한 Streptococcus는 penicillin에 대체로 높은 감수성을 보였으며, enterococcus는 대부분 ampicillin에만 감수성을 나타내었다. 3. Escherichia coli를 비롯한 그람음성 간균은 전반적으로 amikacin과 tobramycin에 높은 감수성을 보였다. 4. Serratia는 다른 장내세균보다 감수성이 대체로 낮았으며 Serratia marcescens는 amikacin과 chloramphenicol에 가장 높은 감수성을 보였다. 5. Pseudomonas aeruginosa는 amikacin과 tobramycin에 가장 감수성이 높았으며, carbenicillin과 gentamyctn에도 중등도의 감수성을 보였다. 6. Acinetobacter calcoaceticus는 시험한 대부분의 항생제에 낮은 감수성을 보였으며, 1986년에 amikacin, tobramycin 및 gentamycin에 단지 30%정도의 감수성을 보였다.
담배(Nicotiana tobacum L. cv. Wisconsine 38) 잎 절편을 해녀콩(Canavalia lineata)의 leghemoglobin(Lb) cDNA를 포함하는 Agrobacterium과 함께 배양한 후, 0.5mg/L BAP, 0.1mg/L ${\alpha}-NAA$와 200mg/L kanamycin, 500 mg/L carbenicillin을 포함하는 MS 배지에서 선별하여 7개의 재분화 개체를 얻었다. 이로부터 분리한 게놈 DNA에 대한 Southern 혼성화 반응과 PCR 결과로 Lb cDNA가 담배의 게놈에 삽입되었음을 확인하였다. 형질전환된 담배로부터 분리한 RNA에 대한 northern 혼성환 실험 결과 약 1,000 nt의 RNA가 혼성화 반응을 보였으며, 총 RNA를 주형으로 합성한 1차 가닥의 cDNA를 PCR로 증폭한 결과, Lb cDNA와 혼성화 반응을 보이는 0.5 kb의 DNA가 증폭되었다. 콩의 Lb에 대한 다군항체(polyclonal antibody)를 사용하여 단백질 면역 항체 반응을 실시한 결과, Lb로 판단되는 약 15.8 kD의 위치에서 혼성화 반응이 나타났다. 이상의 결과로 해녀콩 Lb cDNA가 형질전환된 담배의 게놈에 삽입되었을 뿐만 아니라 mRNA로 전사되어 Lb 단백질로 해독되었음을 알 수 있었다.
The Pseudomonas infection has been increased in incidence and suspected as a cause of opportunistic pathogen. Protease and elastase produced by Pseudomonas aeruginosa are reported to be closely associated with pathogenicity of Pseudomonas aeruginosa. We examined, in this work, the relationship between production of exoenzyme of Pseudomonas aeruginosa and susceptibility to antimicrobial agents in view of possible application to the management of Pseudomonas infection. 1. In 295 Pseudomonas aeruginosa isolated from clinical specimens, 34.6% were from pus, 20.7% from sputum, 15.6% from wound including burn sites and 12.9% from urine. 2. Distribution of protease and elastase production by clinically isolated Pseudomonas aeruginosa, showed that protease and elastase producing strains were 83.1%, protease producing strains were 7.5%, elastase producing strains were 2.0%, and non producing strains were 7.5%. 3. MIC(minimum inhibitory concentration) peak for tetracycline and chloramphenicol were observed at 25mcg/ml and 200mcg/ml respectively, but there were no Pseudomonas aeruginosa which correspond to MIC peak, 6.25mcg/ml. Gentamicin of aminoglycosides was highly susceptible to Pseudomonas aeruginosa clinically isolated from pus, sputum and wound sites, but susceptible to isolates from nasal discharge and urine. Regarding MIC peak of carbenicillin, 100mcg/ml, 81.8% of Pseudomonas aeruginosa were from urine, 54.8% from wound including burn sites, 52.7% from pus, and 50.8% from sputum. 4. Enzyme producing strains showed no susceptibility to kanamycine and carbenicillin at low concentration, but protease producing strains tend to resistant to antimicrobial agents.
상추의 자엽 조직을 GR 유전자가 도입된 A. tumefaciens LBA 4404와 2일간 공동배양후, carbenicillin 500mg/L, kanamycin 50mg/L NAA 0.1mg/L와 2iP 1.0 mg/L가 함유된 MS 재분화배지에 옳겨 약 4주후에 kanamycin 저항성 개체를 얻었다. 형질전환된 것으로 추정되는 식물체는 kanamycin 100mg/L가 함유된 MS선발배지에서 생존하였다. PCR 분석결과, GR 유전자가 형질전환체의 게놈상에 삽입되어 있음을 확인하였다. 형질전환체의 Southern blot 분석을 통하여 ECL-labelling된 GR 유전자와 동일한 것으로 판단되는 약 1.8 kb 위치에서 밴드를 확인할 수 있었다. RT-PCR 분석으로 GR 유전자가 전사됨을 확인할 수 있었다. 개화후 이들 개체의 종자를 받아 NPTII 유전자의 발현여부를 조사한 결과 R$_1$ 세대에서도 NPTII 유전자가 발현됨을 확인하였다.
CaMV35S promoter-$\beta$-glucuronidase (GUS) 유전자와 선발 표지로서 neomycin phosphotransferase 유전자를 가진 pBI121 binary 벡터를 도입한 Agrobacterium turmfaciens LAB4404와 더덕 유식물체의 자엽 절편을 1 mg/L BA가 첨가된 MS 배지에서 48시간 동안 공동배양한 후 1 mg/L BA, 250 mg/L carbenicillin 100 mg/L kanamycin sulfate을 첨가한 고체배지에 옮겨 명조건에서 배양하였다. 배양 2주 후 절편의 절단면 부근으로부터 수많은 부정아가 형성되기 시작하였다. 이들 부정아의 GUS 활성을 조사한 결과 15%가 양성반응을 나타내었다. 배양 6주 후 절편이 형성한 수많은 부정아로부터 56.7% 빈도로 shoot이 발달하였다. 이들 shoot은 기본배지에 옮겨서 4주 경과되었을 때 대부분 발근하였으며, 재분화된 개체는 토양에 이식하였다. Southem 분석결과 GUS양성을 보인 재분화 개체의 게놈 DNA에 GUS 유전자가 삽입되었음이 확인되었다.
상추에 제초제 저항성을 도입하기 위해 상추 자엽 조직을 NPTII-GUS 및 제초제 저항성 유전자 (PAT)가 삽입된 A. tumefaciens MP 90과 2일간 공동배양한 다음 0.1 mg.L$^{-1}$ NAA, 1.0 mg.L$^{-1}$ 2ip, 50 mg.L$^{-1}$ kanamycin, 500 mg.L$^{-1}$ carbenicillin을 첨가한 MS배지에 배양하여 식물체를 재분화시켰다. 재분화 식물체는 kanamycin 내성 검정을 통해 NPTII 유전자의 도입과, PCR, Northern blot 분석을 통해 제초제 저항성 유전자가 식물체의 게놈상에 삽입된 형질전환체임이 확인되었다. 또한 1500배액의 농도로 Basta를 살포한 결과 살포 10일 후 대조 식물체는 완전히 고사하는 데 반해 형질전환체는 지속적인 생육을 보여 얻어진 형질전환 상추가 제초제 저항성 개체임이 확인되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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