• 식물조직배양학회지
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• 제28권3호
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• pp.147-151
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• 2001

Explants of Lactuce sativa cultivar, chungchima, were co-cultivated with Agrobacterium tumefaciences LBA4404, EHA101 strains containing nptll gene and ferritin gene encoding iron storage protein from soybean for transformation. Through initial selection of regenerated explants by culturing on a kanamycin and carbenicillin containing MS medium, multiple shoots were obtained after 2 months of culture. For a complementary step of selection, putative transgenic shoots were transferred to 1/2 MS basal medium supplemented with 100 mg/L kanamycin and 500 mg/L carbenicillin. The selected shoots were tested with PCR analysis using nptll, ferritin specific primers whether ferritin gene was introduced to genome of the plants. These results confirmed that produced the specific PCR bands in the putative transgenic lines. Additionally the Northern blot showed that transcripts of ferritin gene were detected in mature leaf of the transgenic lines. These results suggest that ferritin gene be successfully integrated and transcribed in the putative transgenic lettuce plants.

• 대한수의학회지
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• 제20권1호
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• pp.53-58
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• 1980

Antimicrobial susceptibility of 157 Gram-negative bacilli (90 Escherichia coli. 30 Enterobacter aerogenes, 18 Klebsiella pneumoniae, 12 Proteus spp., 3 Pseudomonas aeruginosa and 4 Alcaligenes faecalis) isolated from infected bovine udders was determined by the plate dilution method. Gentamicin and oxolinic acid at a concentration of $12.5{\mu}g/ml$ were very active to all of 157 Gram-negative bacilli tested, and 98% of these strains were susceptible to nalidixic acid at a concentration of $25{\mu}g/ml$. Most of the 90 Escherichia coli strains were inhibited by chloramphenicol, ampicillin and carbenicillin and carbenicillin at a concentration of $12.5{\mu}g/ml$. None of the Klebsiella pneumoniae strains were inhibited at a concentration of $50{\mu}g/ml$ of ampicillin and carbenillin, whereas all the species of Proteus resisted a concentration of $50{\mu}g/ml$ or higher tetracycline. All the 3 strains of Pseudomonas aeruginosa were highly resistant to streptomycin, kanamycin, Ampicillin, chloramphenicol, tetracycline and nalidixic acid.

• 생명과학회지
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• 제9권5호
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• pp.564-569
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• 1999

This study was conducted to determine the concentrations of plant growth regulators required for regeneration and the concentrations of antibiotics for the selection of transformed regenerants from lettuce, musk melon and tomato. The optimal concentrations of plant growth regulators for shoot formation were NAA 0.1 mg/$\ell$ +BA 0.1 mg/$\ell$ for lettuce, NAA 0.01 mg/$\ell$ +BA 2.0 mg/$\ell$ for melon and NAA 0.1 mg/$\ell$ +BA 0.5 mg/$\ell$for musk melon. Shoot induction from tomato, lettuce and melon was completely inhibited by 30 mg/$\ell$ or higher concentrations of kanamycin. Shoot formation from mu나 melon was not affected by kanamycin up to 40 mg/$\ell$, but was reduced in the presence of 50 mg/$\ell$ and completely inhibited by 100 mg/$\ell$. Shoot formation of all four crops was completely inhibited by higromycin at 10 mg/$\ell$. Both carbenicillin and cefatoxinme did not show any negative effects on shoot formation.

• 식물조직배양학회지
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• 제27권6호
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• pp.441-445
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• 2000

저인산 조건하에서 인산 흡수 효율이 높은 벼 품종을 개발하고자 담배의 인산수송자 유전자를 벼에 형질전환하였다. 동진벼로부터 유도된 callus를 담배의 인산수송자 유전자가 도입된 A. tumefaciens LBA 4404와 공동배 양한 후, 선발배지에서 증식된 callus를 250 mg/L carbenicillin, 2 mg/L kinetin, 0.1 mg/L NAA가 첨가된 MS배지에 옮겨 약 2주 후부터 소식물체를 얻었다. Carbenicillin 250 mg/L 첨가된 MS 기본배지에서 소식물체의 발근을 유도하여 재분화 식물체를 얻었다. 선발된 callus는 약 52%의 식물체 재력화율을 보였다. 선발된 재분화 식물체에 대한 PCR 분석을 수행하여 형질전환 벼 식물체에 담배의 인산수송자 유전자가 삽입되었음을 확인하였다. 형질전환체의 genonlic DNA로부터 PCR에 의해 증폭된 DNA에 대한 Southern blot분석 결과, 대조 식물체에서는 band가 검출되지 않았으나 형질전환 식물체에서는 인산수송자 유전자와 동일한 1.7kb의 band가 검출되어 외래유전자인 담배 인산수송자 유전자가 안전적으로 도입되었음이 확인되었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제28권2호
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• pp.97-101
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• 2001

동화산물의 분배 효율 개선을 통한 생산성 향상 가능성을 조사하고자 감자의 sucrose 수송자 유전자를 벼에 형질전환 하였다. 동진벼로부터 유도된 callus를 감자의 sucrose 수송자 유전자가 도입된 A. tumefaciens LBA 4404와 공동배양한 후, 선발배지에서 증식된 callus를 250 mg/L carbenicillin, 2 mg/L kinetin, 0.1 mg/L NAA가 첨가된 MS 배지에 옮겨 약2주 후부터 소식물체를 얻었다. Carbenicillin 250 mg/L 첨가된 MS 기본 배지에서 소식물체의 발근을 유도하여 재분화 식물체를 얻었다. 선발된 callus는 약 150%의 높은 식물체 재분화율을 보였다. 재분화 식물체에 대한 PCR 분석을 수행하여 감자의 sucrose수송자 유전자가 삽입된 형질전환 벼 식물체를 선발하였다. 선발된 형질전환 식물체에 대한 Southern blot 분석을 통하여 외래유전자인 감질 sucrose 수송자 유전자가 벼 genome 내에 안정적으로 도입되었음을 확인하였다.

• 식물조직배양학회지
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• 제27권1호
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• pp.7-12
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• 2000

저온관련 유전자인 BN115 gene과 표지유전자인 npt II gene을 함유하고 있는 Agrobacterium tumifacience GV 3101 균주를 이용하여 겨울상추품종인 청치마의 잎절편과 공동배양하는 방법으로 형질전환 시켰다. 상추의 잎절편을 Agrobacterium과 공동배양 후 MS 기본배지에 100 mg/L kanamycin, 500 mg/L carbenicillin, 0.1 mg/L NAA, 0.5 mg/L kinetin을 첨가한 선발배지에 치상하였는데, 치상 후 3-4주부터 절편체로부터 multiple shoot들이 생성되기 시작하였다. 선발배지에서 살아남은 선발체들은 1/2 MS배지에 100 mg/L kanamycin, 250 mg/L carbenicillin이 첨가된 발근배지로 옮겨졌다. 한편, 선발된 shoot들은 PCR반응을 이용하여 도입유전자의 삽입여부를 확인하였다. PCR 반응은 표지유전자인 nptII와 저온관련 유전자인 BN115 및 식물에 도입되지 않는 vir G 유전자를 각각 특이적으로 증폭하는 primer를 가지고 실시하였다. PCR 반응 결과 대조구로 쓰인 정상 상추식물체에서는 nptII와 BNl15유전자의 증폭을 볼 수 없는 반면에 형질전환체에서는 두 유전자 모두 PCR 증폭 산물을 확인할 수 있었다. 또한 확인된 식물체의 DNA에서는 vir G유전자가 발견되지 않아 이는 Agrobacterium의 혼입에 의한 결과가 아님을 다시 한번 증명하였다. 또한 선발된 형질전환체를 이용하여 Southern analysis와 RT-PCR을 실시한 결과 내한성 유전자가 상추 식물에 안정적으로 도입되어 발현됨을 확인하였다.

• 대한미생물학회지
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• 제12권1호
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• pp.1-10
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• 1977

40 strains of E. coli isolated from residents of a doctorless area in Korea in 1976 and 40 strains of E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital from 1975 to 1976 were examined for susceptibilities to 14 antimicrobial agents by the agar dilution method. The susceptibilities of the two groups to each antimicrobial agent were compared and correlations in the antimicrobial susceptibility of the 80 strains of E. coli among the 14 antimicrobial agents were also analyzed. The results were obtained as follow: 1. With Tetracycline, Oxytetracycline, Doxycycline and Ampicillin, the mean MIC's of E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were 8.6 to 14 times higher than. those of E. coli isolated from residents of a doctorless area. 2. With Streptomycin, Minocycline and Carbenicillin, the mean MIC's o{ E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were 4.1 to 5.6 times higher than those of E. coil isolated from residents of a doctorless area. 3. With Kanamycin, Penicillin and Cotrimoxazole, the mean MIC's of E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were 2.6 to 3.7 times higher than those of E. coli isolated from residents of a doctorless area. 4. There were no significant differences in susceptibility to Erythromycin respectively between E. coli isolated from patients of Seoul National University coli isolated from residents of a doctorless area. 5. E. coli isolated from patients of Seoul National University Hospital were resistant to Erythromycin(100%), Streptomycin(75%), Tetracycline(72.5%), Oxytetracycline(72.5%), Doxycycline(72.5%), Minocycline(67.5%), Penicillin(82.5%), Ampicillin(60%) and Carbenicillin(65%) respectively and were sensitive to Gentamicin(97.5%), Cephalexin(92.5%) and Kanamycin(72.5%) respectively. 6. E. coli isolated from residents of a doctorless, area were resistant to Erythromycin(100%), Streptomycin(40%) and Penicillin(50%) respectively and were sensitive to Gentamicin(100%), Kanamycin(92.5%), Tetracycline(87.5%), Oxytetracycline(87.5%), Doxycycline(87.5%), Minocycline(87.5%), Ampicillin(95%), Carbenicillin(92.5%) and Cephalexin(97.5%) respectively. 7. There were high correlations among the suscebtibilities of the 80 strains of E. coli to Tetracycline analogues(Tetracycline, Oxytetracycline, Doxycycline and Minocycline) and among susceptibilities of the 80 strains of E. coli to Penicillin analogues(Penicillin, Ampicillin and Carbenicillin). 8. There were relatively high correlations between the susceptibilities of the 80 strains of E. coli to Penicillin analogues and those to Tetracycline analogues, between the susceptibilities to Penicillin analogues and those to Streptomycin and between the susceptibilities to Tetracycline analogues and those to Streptomycin.

• 식물조직배양학회지
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• 제26권4호
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• pp.281-287
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• 1999

본 연구에서는 제초제 저항성 더덕을 개발하고자 하여 제초제 저항성 bar유전자의 형질전환을 수행하였고, 더덕 종자 발아 생리, 체세포배 유도 및 선별배지 농도 등에 대해 조사하였다. 기내종자발아는 GA$_3$를 첨가한 MS배지에 치상하여 15$^{\circ}C$에서 배양하였을 때 광, 암 두 조건 모두에서 90%의 발아율을 나타내었다. 식물체 재분화는 체세포 배발생 경로를 통하여 이루어 졌다. 배발생 캘러스는 자엽, 줄기,잎을 2,4-D와 Zeatin을 혼용처리하여 유도할 수 있었다. Basta와 PPT는 10mg/L 이상의 농도에서 식물체가 갈변고사 하였다. Explant는 l00mg/L 이상의 kanamycin에서 캘러스를 형성하지 못하였다. Explant를 제초제 저항성 bar유전자의 식물 형질전환 벡터를 포함하는 Agrobacterium tumefaciens LBA4404과 2일간 공존 배양한 후, 100mg/L kanamycin, 500mg/L carbenicillin과 1.0mg/L 2,4-D이 포함된 배지에서 형질전환체를 선발하였고, 계대배양으로 배발생 캘러스를 유도하고 체세포배를 얻었다. 체세포배를 200 mg/L kanamycin,500mg/L carbenicillin이 포함된 N6배지에 치상하여 발아시켰다. PCR 수행결과 NPTII와 bar유전자가 증폭되어 나타남으로서 도입된 유전자가 잠정적인 형질전환체 내에 존재함을 확인할 수 있었다. 본 연구를 통하여 얻어진 bur유전자 형질전환 식물체는 RNA및 단백질 수준에서의 발현 여부 검정을 거친 후, 제초제 저항성 더덕 생산 및 제초제 저항성 유전자의 후대 유전 양상 분석을 위한 기초 자료로 이용될 수 있을 것이다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제2권1호
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• pp.35-41
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• 2000

Transgenic cabbage (Brassica oleracea ssp. capitata) plants resistant to the commercial herbicide Bast $a^{R}$ were obtained by Agrobacterium tumefaciens - mediated transformation. Hypocotyl segments of in vitro grown plants were infected with Agrobacterium tumefaciens LBA 4404 harboring plasmid pMOG6-Bar which contains hpt and bar genes. Explants were cultured on callus induction medium (MS basal medium + 1 mg/L NAA + 2 mg/L BA + 2 mg/L AgN $O_3$+ 100 mg/L carbenicillin + 250 mg/L cefotaxime) supplemented with 15 mg/L hygromycin. Hygromycin resistant calluses were transferred to shoot regeneration medium (MS basal medium + 0.1 mg/L NAA + 2 mg/L BA + 3% sucrose + 2 mg/L AgN $O_3$+ 15 mg/L hygromycin + 250 mg/L cefotaxime + 100 mg/L carbenicillin). In order to induce roots, elongated shoots were placed on the MS medium without plant growth regulators and hygromycin. Southern blot analysis of several putative transgenic plants indicated that one to five intact copies of Apt and bar genes were incorporated into the genome. Expression of bar gene was confirmed by Northern blot analysis and by herbicide resistant phenotype. Seed progeny from self-pollinated transformants expressed the herbicide resistance and showed Mendelian segregation of the introduced gene.e.

• 식물조직배양학회지
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• 제25권1호
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• pp.45-50
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• 1998

꽃양배추의 하배축 조직을 proteinase inhibitor II 유전자가 도입된 Agrobacterium tumefaciens LBA 4404와 2일간 pH 5.5로 조절된 MS 액체배지에서 공동배양후 carbenicillin 500mg/L kanamycin 20mg/L와 BA 1mg/L가 함유된 MS 재분화배지에 옮겼다. 이들 조직을 매 2주마다 계대배양하였으며 약 4주후에 kanamycin 저항성 개체를 얻었다. 형질전환된 것으로 추정되는 식물체는 kanamycin 30mg/L가 함유된 선발배지에서 생존하였다. PCR 분석결과, PI-II 유전자가 형질전환체의 게놈상에 삽입되어 있음을 확인하였다. 형질전환체의 Southern blot 분석을 통하여 ECL-labelling된 PI-II 유전자와 동일한 것으로 판단되는 약 500bp 위치에서 밴드를 확인할 수 있었다.