The separation and determination of inorganic cations by a capillary zone electrophoresis was studied. Cations were separated by the capillary column and detected by indirect UV method. The running buffer of 0.03 M creatinine and 0.02 M-hydroxy isobutylic acid solution (pH 4.8) was used to improve the mobility of ions in the column. A potential of 18 kV was applied at anode. A complete separation of cations ranged within 15 min and detection limits were between 0.1 and 1.0 ppm. The applicability of the method for real samples was demonstrated.
Bromide, chloride, fluoride, nitrite, nitrate, sulfite, sulfate, perchlorate, chlorate 및 chlorite가 포함된 시료를 capillary zone electrophoresis(CZE)와 indirect UV detection 방법으로 분리하였다. 음이온류의 분리는 running buffer로 5 mM ammonium dichromate, 10 mM ammonium acetate, 20 mM diethylenetriamine, 10% methanol(pH 9.3)을 사용하였으며 전압은 cathode에 15 kV를 공급하였다. 또한 최초로 CZE에서 음이온의 정량이 가능하도록 각 이온들에 대한 regression과 detection limit를 결정하였고, 이 분석방법은 톨루엔을 흡입한 사람의 뇨, 부검 혈액, 폐수 및 폭약 등 시료에 적용하였으며, 음이온의 함량을 ion chromatograph(IC)와 비교 검토하였다.
대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2-2
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pp.230.3-231
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2003
The therapeutic use of protein pharmaceuticals produced by recombinant DNA technology is increasing in recent decades. In order to investigate the quality of recombinant proteins, it is important to identify and assign the impurities produced in the process of recombination or in storage conditions. Capillary Electrophoresis is emerging technology exhibiting high sensitivity, selectivity and speed and may be most powerful tools for this application. In this study, human growth hormone (hGH) has been analyzed by various mode of capillary electrophoresis such as capillary zone electrophoresis (CZE), capillary gel electrophoresis (CGE), and capillary isoelectric focusing (cIEF) to indicate the chemically or biologically oriented variants and the degraded fragments. (omitted)
Capillary electrophoresis (CE) is perceived as an attractive tool for the analysis of pharmaceuticals and biological materials because of their high separation efficiency, easy separation and low running cost. New concept of micellar electrokinetic capillary chromatography (MECC) expanded the application of CE to the separation of neutral molecules. Validation of CE as an analytical technique for quality control of pharmaceuticals should be confirmed by quantitative analysis and the peak confirmation. In this study, the quantitative analyses of various types of neutral, acidic and basic components (acetaminophen, caffeine, ascorbic acid, riboflavin, thiamine, chlorpheniramine, phenylpropanolamine, dl-methylephedrine and dextromethorphan) in complex cold medicines have been accomplished using CE. Combined methods of MECC using SDS and capillary zone electrophoresis lowering the pH of running buffer were adopted to determine the ingredients in capsule type or liquid formula complex medicines without particular sample pretreatment. The results indicate that CE is a promising technique for quality control analysis of pharmaceuticals as a validation method.
The effects of various hydroxide compounds on base stacking (BS) were investigated for pre-concentration of DNA molecules in capillary electrophoresis (CE). In BS, hydroxide ions ($OH^-$) were electrokinetically introduced after DNA sample injection. A neutralization reaction occurred between the $OH^-$ and $Tris^+$ of the running buffer, which resulted in a zone of lower conductivity. Within the low conductivity zone of the high electric field, the DNA molecules moved more rapidly and were concentrated in front of the low conductivity zone. At the same BS conditions of CE, the enhanced sensitivity of the DNA samples was dependent on the kind of multivalent cations in the hydroxide compounds. Except for LiOH, the hydroxide compounds with monovalent cations showed more effective BS than those with divalent cations because of solubility, ionic strength and electronegativity. The order of hydroxide compounds that enhance the detection sensitivity of DNA molecules was as follows: NaOH > $NH_4OH$ > KOH > $Ba(OH)_2$ > $Sr(OH)_2$ > LiOH > $Ca(OH)_2$ > $Mg(OH)_2$. $NH_4OH$, KOH and $Ba(OH)_2$ proved to be efficient hydroxide compounds to use as effective BS reagents in CE instead of NaOH.
Yoo, Young Sook;Ban, Eun Mi;Kim, Young Sook;Han, Yeosun;Park, Jongsei
분석과학
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제8권4호
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pp.881-886
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1995
Several forms of gangliosides have been separated from various types of biological matrices using cyclodextrin-modified capillary zone electrophoresis (CZE). Quantitative analysis of phospholipids from biological fluids was achieved by micellar electrokinetic capillary chromatography (MECC) using 35mM sodium dodecyl sulfate. Phosphorylation, one of the most important post-translational modifications of proteins at serine, threonine and tyrosine residues in small peptides were identified and quantitative analyses of phosphopeptides were performed. Seven different neuropeptides which are relative the pain reachanism in the vertebrate central nervons system were also separated by CZE.
고도로 효율적인 분석방법인 모세관 전기영동 시스템을 최적의 감도를 갖는 상태의 기기로 국내에서 제작하였다. 50 ${\mu}m$ 내경을 가진 모세관을 완충용액으로 채워준 후 모세관의 양끝에 20∼35 kV의 전압을 걸어주는 이 분석방법은 20분 이내에 10 nl 이하의 소량의 시료를 이론단수가 20∼50만 정도가 되도록 분리할 수 있는 매우 좋은 분리능으 가지고 있다. 모세관 전기영동법의 분리능과 분리도를 증가시키는데 영향을 주는 요소들을 알아보기 위하여 catecholamine과 adenine 유도체를 분석하였다.
Sibutramine enantiomers were separated successfully by capillary zone electrophoresis using substituted cyclodextrins as chiral selectors. The effects of cyclodextrin concentration, pH, voltage, buffer type, and electrolyte concentration on the migration time and resolution of enantiomers were examined. Separation of sibutramine enantiomers on an unmodified fused silica capillary (total length, 54 cm; effective length, 45 cm) was achieved using a mixed buffer of 20 mM phosphate/10 mM citrate containing either 5 mM methyl-${\beta}$-cyclodextrin (pH 4.3) or 5 mM carboxymethyl-${\beta}$-cyclodextrin (pH 6.5). Samples were injected with a pressure of 50 mbar for 5 s and were detected at a wavelength of 223 nm. The established method showed good precision and accuracy, with intra- and inter-day variations of less than 2.9 and 4.7%, respectively, and recoveries of 95.7 - 103.8%. The stability constants of (R)- and (S)-sibutramine demonstrated that the resolution of sibutramine enantiomers was attributable primarily to the difference in stability constants. When this optimized method was applied to the determination of sibutramine enantiomers in commercial drug formulations, it proved to be economical and convenient, affording sufficient accuracy, precision, and reproducibility as well as sensitivity and selectivity.
Chiral separation of aryalcohols such as 1-phenyl-propanol, 1-phenyl-2-proanol, and 2-phenyl-1-propanol by capillary electrophoresis has been optimized using the overlapping resolution mapping (ORM) scheme. Three critical parameters of the electrophoretic media, i.e. phosphate concentration, sulfated ${\beta}$-cyclodextrin (CD) concentration and pH, were chosen for optimization. The working ranges were initially presumed by 7 preexperiments. Further optimization was carried out by another seven experiments within the narrow working ranges. From the final overlapping resolution mapping all peak pairs, the area of maximum separations were located. Using the conditions of a point in this area, we found that the target compounds were a baseline separated within 30 min. The maximum separation conditions of arylalcohols were a chiral selector concentration of 5.4%, a phosphate concentration of 28 mM, and a pH of 5.0.
현재는 재조합 Erythropoietin의 생물학적 활성을 mouse를 이용한 in vivo bioassay로 실시하고 있으나, 이 방법의 여러가서 불편함으로 인하여, 이를 대체하기 위해 Ba/F3 세포주를 이용한 in vitro assay 방법을 확립하였으나, 위에 상술한 바와 같이 in vitro assay는 erythropoietin의 당분포에 의한 차이를 보이지 않게 때문에, 이를 보완하기 위해서는 in vivo bio-activity와 정량적인 상관관계가 있는 당단백질의 isoform 분석법인 Capillary zone electrophoresis (CZE) 와 sialic acid 함량 결과를 동시에 분석해야 했다. 위의 결과 sialic acid 함량은 erythropoietin 원액에서 10 mol/mol,EPO 이상의 sialic acid 함량을 가져야 되며, CZE 결과는 재조합 erythropoietin이 isoform 분포가 isoform 3의 경우 5.594~0.593%, isoform 4의 경우 31.598~11.704%, isoform 5의 경우 37.033~29.301%, isoform 6의 경우 27.837~18.807%, isoform 7의 경우 17.085~7.824%, isoform 8의 경우 7.642~1.964%을 보여줌과 동시에 isoform 4의 면적은 isoform 5의 면적보다 항상 작아야한다. 이상 두 가지 시험결과와 in vitro assay 결과를 combine해서 in vivo assay를 대체할 수 있다는 좋은 실험적 data를 얻었으므로 이상 위의 3가지 분석법을 활용한 combined in vitro bioassay 법의 기초를 확립하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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