목적: 본 연구의 목적은 수분제거 방법과 건조 방법에 따른 함수율 측정에 관하여 알아보고자 하였다. 방법: 다양한 함수율을 갖는(47%~58%) 72개의 하이드로젤 콘택트렌즈를 대상으로 중량측정법으로 함수율을 측정하였다. 실험실 온도는 $25^{\circ}C$, 습도는 21%로 유지하였다. 두 방법 모두 저온처리 후 실온에서 30분 건조하여 무게를 측정하는 방식으로 측정하였다. 결과: Dry blotting 방법은 함수율이 47.43${\pm}$8.48%로 측정되었으며, Wet blotting 방법은 48.15 ${\pm}$8.36%로 측정되었다. 또한 Wet blotting 방법으로 측정한 함수율이 약 0.7% 정도 높게 측정되었다. 건조 방법에 따른 함수율에서 vacuum oven을 사용하여 건조한 함수율이 47.89${\pm}$8.06%, microwave oven을 사용하여 건조하여 측정한 함수율이 49.56${\pm}$7.06%로 나타났으며, microwave oven을 사용하여 측정한 함수율이 약 1.67% 높은 함수율을 나타내었으나 통계적으로 유의한 차이를 나타내지는 않았다(p>0.05). 결론: 렌즈의 함수된 무게를 측정하기 위한 Dry blotting 방법과 Wet blotting 방법 중 Wet blotting에 의한 방법이 무게가 높게 측정되었으며, 함수율 역시 더 높게 측정되었다. 또한 건조된 무게를 측정하기 위해 렌즈를 건조시키는 방법에 있어 vacuum oven을 사용한 건조보다 microwave oven로 건조하여서 측정한 함수율이 더 높은 값을 나타내었으나 microwave oven을 사용할 경우 더 정확한 측정을 위해 그 microwave의 조사 강도나 시료의 위치에 있어 더욱 세심한 주의가 필요하다.
목적: 자동렌즈미터를 이용한 소프트 콘택트렌즈의 굴절력 측정에서 dry blotting과 wet cell 방법에 따른 신뢰도를 평가하고자 하였다. 방법: 측정에 사용한 소프트렌즈는 현재 국내에서 유통되고 있는 렌즈 5종류, 4개의 굴절력(-1.50D, -3.00D, -6.00D, -9.00D)을 이용하였고, 두 검사자가 자동렌즈미터로 측정하여 반복성과 재현성을 평가하였다. 결과: Dry blotting방법으로 측정한 굴절력의 평균 차이는 0.03~0.18D였으며, 실리콘 하이드로겔 렌즈에서 0.10~0.18D, 하이드로겔 렌즈에서 0.03~0.08D로 나타났다. 두 검사 간의 평균 차이는 0.10D이하로 측정자 간의 재현성이 좋은 것으로 나타났다. Wet cell방법으로 측정한 굴절력의 평균 차이는 0.09~0.69D였으며, 두 검사자 간에 평균 차이는 0.02~0.59D로 나타났으며, 소재에 따른 측정의 신뢰도와 검사자 간의 재현성은 낮았다. 결론: 모든 재질에 대해 dry blotting 방법이 wet cell방법보다 신뢰도가 좋았으며, 두 방법 모두 실리콘 하이드로겔 렌즈에서는 낮은 신뢰도를 보였다. 자동렌즈미터를 이용하여 신속히 후면 정점굴절력을 확인할 필요가 있는 실무 현장에서 dry blotting방법이 효율적인 것으로 판단된다.
The tissue blot immunobinding assay (TBIA) is widely used for the detection and localization of plant viruses in various plant tissues. The basic experimental procedures of TBIA sampling and blotting were simplified using commercially available micropipette tips. This method was termed the ring-blot immunobinding assay (R-BIA), as the blot on the membrane forms a ring shape. The detection efficacy of R-BIA was tested for two chili pepper viruses, pepper mild mottle tobamovirus (PMMoV) and pepper mottle potyvirus (PepMoV), following the optimized serological procedures of TBIA (length of the incubation period and BSA concentration, and primary and secondary antibodies). Sensitivity of the R-BIA was about 1 ng/ml of purified PMMoV in pepper leaf sap from a healthy pepper plant. R-BIA also showed high specificity in the detection of PMMoV and PepMoV. Moreover, the modified sampling and blotting procedures were simpler and more reliable than other TBIA methods (such as whole-leaf blotting and crushed-leaf blotting), suggesting that the R-BIA may be used for medium- to large-scale detection of plant viruses in laboratories with minimal facilities.
계란 흰자내에 존재하면서 전형적인 알레르기원이며 단백질분해효소 저해물질인 ovomucoid의 탄수화물 곁사슬에 대한 방사선의 조사효과를 관찰하였다. Trypsin 저해 활성은 방사선 조사선량의 증가에 따라 급격히 손실되었는데 질소환경과 비교하였을 때, 산소환경에서 방사선 조사한 경우 ovomucoid의 불활성화가 현저히 보호되었다. Protein blotting 결과 산소환경에서 방사선을 조사한 경우는 단백질이 일부 파괴되었고, 질소환경하에서는 단백질 응집 현상이 일어났다. Carbohydrate blotting 결과로 나타난 밴드의 위치 및 형태 역시 protein blotting 결과와 유사하였다 HPLC 분석 결과 조사선량의 증가에 따라 모든 올리고당 분획이 감소하는 경향을 보였는데 산소환경하에서 더욱 현저하였다. 위의 결과로 보아, 방사선에 의해서 탄수화물 곁사슬의 파괴 및 유리로 인한 전반적인 구조적 변화가 초래되어 ovomucoid의 활성도 변화를 좌우한 것으로 생각된다.
사람의 모유에 많이 함유된 human lactoferrin(hLF)은 항균 및 항 바이러스 작용이 있는 것으로 보고되고 있다. 본 연구에서는 hLf를 메탄올자화 효모인 Pichia pastoris에 cloning하고 그 발현을 RT-PCR, Northern blotting, SDS-PAGE및 Western blotting으로 확인하였다. 그 결과 2.1 kb의 hLf 유전자가 P.pastoris의 염색체 DNA로 끼어들어가 안정적으로 hLf를 발현하였다. 이 재조합 P.pastotis로부터 hLf를 포함하는 세포 추출액을 얻어 항균 작용을 연구하였다. 발현된 재조합 hLf는 Staphylococcus aureus, Micrococcus flavus 등의 그람 양성균에 대해 강력한 항균작용을 보일 뿐만 아니라 그람 음성 동물성 병원균인 Pseudomonas fluorescens ID 9631, E. coli ATCC8739, 25922,35 등과 Salmonella typhimurium 114,115 등 다양한 균에 대해서도 강력한 항균작용을 보였다. 이는 재조합 hLf가 생물학적 활성이 있다는 것을 보여준다.
Proteome research in the medical field is expected to accelerate the understanding of disease mechanism, and to create new diagnostic concept. For protein profiling, this paper proposes a new methodology named CPDIB (Crude Protein Direct Blotting). In the CPDIB procedure, crude protein sample is directly immobilized on a membrane and the expression of protein molecules in the sample are analyzed quantitatively by using a special device called ImmobiChip, where the membrane is used as a field of the immune reaction. The over-all structure of the ImmobiChip is based on the conventional Slot blot device. Mechanical improvement in the air-tightness of the case holding the membrane realizes the direct blotting and results in high performance of stability in the immune reaction. In the measurement of multiple proteins, a dispensing robot is used for increasing the efficiency of handling of liquid. Cooperation of the dispensing robot with the ImmobiChip for immobilizing proteins realizes automated and stable performance of the CPDIB procedure. This paper shows the evaluation of the air-tightness of the ImmobiChip, the ability of analyzing proteins using the CPDIB procedure and the performance of the automated equipment.
개화시기의 수술로부터 수집한 백합화분을 aluminum oxide 미세입자와 섞어 교반에 의해 상해를 발생시켰다. 이어서 이들 화분은 signal peptide-fused epidermal growth factor (EGF) DNA를 지니는 Agrobacterium 세포로 vacuum infiltration을 시켰으며 24 hr 화분신장을 통한 배양을 실시하였다. 이들 신장 화분에서의 EGF mRNA 및 단백질 발현은 성공적으로 확인되었으며 이는 cDNA blot hybridization 및 immuno-blotting의 분석결과이다.
Wild-type and four mutant R100 merR genes were cloned and the proteins overproduced under tac promoter control of pKK223-3. His118Ala, Cys117Ser, Cys126Ser, and wild-type MerR were successfully overproduced although amino-terminal 14 amino acids deletion mutant MerR was not successful. The amount of overproduced wild-type MerR protein as well as other mutant MerR was between 15%-20% of the total protein. The protein was able to be purified up to 95% homogeneity. Specific DNA-protein blotting experiments showed that the 95 bp operator containing DNA fragment could bind to Cys126Ser, His118Ala, and wild- type MerR, but not to Cys117Ser. These results were consistent with the previously reported complementation experiment results that His118Ala, Cys126Ser, and wild-type MerR could repress the mer operon but Cys117Ser could not.
Background Diabetes is characterized by chronic hyperglycemia, which can increase reactive oxygen species (ROS) production by the mitochondrial electron transport chain. The formation of ROS induces oxidative stress and activates oxidative damage-inducing genes in cells. No research has been published on oxidative damage-related extracellular superoxide dismutase (EC-SOD) protein levels in human diabetic skin. We investigated the expression of EC-SOD in diabetic skin compared with normal skin tissue in vivo. Methods The expression of EC-SOD protein was evaluated by western blotting in 6 diabetic skin tissue samples and 6 normal skin samples. Immunohistochemical staining was also carried out to confirm the EC-SOD expression level in the 6 diabetic skin tissue samples. Results The western blotting showed significantly lower EC-SOD protein expression in the diabetic skin tissue than in the normal tissue. Immunohistochemical examination of EC-SOD protein expression supported the western blotting analysis. Conclusions Diabetic skin tissues express a relatively small amount of EC-SOD protein and may not be protected against oxidative stress. We believe that EC-SOD is related to the altered metabolic state in diabetic skin, which elevates ROS production.
Chicken beef pork meats and isolated soy protein (ISP) were heated at 10$0^{\circ}C$ for 30min and then heat-resistant proteins were fractionated to examine cross-resistant protein from chicken meat but not with beef pork or ISP. Dot blotting using the polyclonal antibody showed that the sen-sitivity for detecting chicken meat was 1$\mu$m and antibody-antigen reaction was dose-dependant. Results of dot blotting analysis to compare the amount of chicken meat present in arket meat products(Kentucky Frank sausage;chicken meat 46.52% and pork 24.92% vs Bulgogi Ham;chicken meat 28.89% and turkey 31.44%)showed that the significant differences between two meat products in terms of chicken meat concentrations. Dose-dependant dot-blotting reaction was also observed in chicken meat samples with various dilution.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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