Renukaradhya K. Math;Nagakumar Bharatham;Palaksha K. Javaregowda;Han Dae Yun
Applied Microscopy
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제51권
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pp.17.1-17.10
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2021
Our previous study on the binding activity between Cel5H and clay minerals showed highest binding efficiency among other cellulase enzymes cloned. Here, based on previous studies, we hypothesized that the positive amino acids on the surface of Cel5H protein may play an important role in binding to clay surfaces. To examine this, protein sequences of Bacillus licheniformis Cel5H (BlCel5H) and Paenibacillus polymyxa Cel5A (PpCel5A) were analyzed and then selected amino acids were mutated. These mutated proteins were investigated for binding activity and force measurement via atomic force microscopy (AFM). A total of seven amino acids which are only present in BlCel5H but not in PpCel5A were selected for mutational studies and the positive residues which are present in both were omitted. Of the seven selected surface lysine residues, only three mutants K196A(M2), K54A(M3) and K157T(M4) showed 12%, 7% and 8% less clay mineral binding ability, respectively compared with wild-type. The probable reason why other mutants did not show altered binding efficiency might be due to relative location of amino acids on the protein surface. Meanwhile, measurement of adhesion forces on mica sheets showed a well-defined maximum at 69±19 pN for wild-type, 58±19 pN for M2, 53±19 pN for M3, and 49±19 pN for M4 proteins. Hence, our results demonstrated that relative location of surface amino acids of Cel5H protein especially positive charged amino acids are important in the process of clay mineral-protein binding interaction through electrostatic exchange of charges.
We investigated the effects of non-meat protein binders combined with glucono-${\delta}$-lactone (GdL) on the binding properties regarding restructured pork prepared by high-pressure treatment. Soy protein isolate (SPI), casein (CS), whey protein concentrate (WPC), and egg white (EW) were used as non-meat protein binders and compared with the control (no binder) and with the ${\kappa}$-carrageenan (KC) treatment. The compression and depression rates were 2.3 and 37 MPa/s, respectively, and pressurization was conducted at 200 MPa for 30 min at $4^{\circ}C$. After pressurization, the physical properties (pH, water-holding capacity, color, tensile strength, and microscopic structure) of the sample were evaluated. The combination of pressurization with acidification enabled cold-set meat binding, and the binding strength of restructured pork was enhanced by the addition of non-meat proteins. Among binders, SPI demonstrated the best efficiency in binding meat pieces. Therefore, the present study demonstrated that the combination of acidification and pressurization processes with the utilization of non-meat protein binders has a potential benefit in meat restructuring.
기존에 제안된 모바일 IPv6를 위한 바인딩 갱신 프로토콜은 이동노드가 홈 링크가 아닌 외부 링크로 이동할 때마다 동일한 프로토콜 과정을 반복한다. 뿐만 아니라 바인딩 갱신의 정해진 수명으로 인해 이동하지 않은 경우에도 동일한 과정을 수시로 반복해야 한다. 본 논문은 이 문제점을 해결하기 위해 티켓 기반의 바인딩 갱신 프로토콜을 제안한다. 제안하는 프로토콜은 대응노드가 발급한 티켓을 사용하여 빈번하게 발생할 수 있는 바인딩 갱신 과정을 최소화 한다. 모바일 IPv6의 보안 요구사항과 기존에 알려진 공격에 대한 프로토콜의 안전성을 분석하였으며, 기존에 제안된 바인딩 갱신 프로토콜과 성능을 비교하여 효율성을 분석하였다.
In the previous report (Choi et al., 1997), the angiogenin binding peptides identified from a phage-peptide library were analyzed by using the fusion proteins composed of the Escherichia coli maltose binding protein and its corresponding peptides. However, it was difficult to obtain a sufficient amount of the fusion proteins required for further analysis because of the low expression level. We now report a high level expression of the fusion protein and analysis of its anti-angiogenin activity. The use of strong T7 promoter and removal of signal sequence allowed about a 20-fold increase in the expression efficiency of the fusion protein. We were able to obtain about 10 mg of purified fusion protein from one liter of culture. The purified fusion protein showed angiogenin-specific affinity and inhibited the binding of biotinylated actin to human angiogenin at $IC_{50}$ of 0.6 mM. Its anti-angiogenin activity was also revealed by the chorioallantoic membrane assay.
Alkali metal salts were introduced to enhance the ionization efficiency of glucose and maltooligoses in electrospray ionization-mass spectrometry (ESI-MS). A mixture of the same moles of glucose, maltose, maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, maltohexaose, and maltoheptaose was used. Salts of lithium, sodium, potassium, and cesium were employed as the cationizing agent. The ionization efficiency varied with the alkali metal cation types as well as the analyte sizes. Ion abundance distribution of the [M+$cation]^+$ ions of the carbohydrates varied with the fragmentor voltage. The maximum ion abundance at low fragmentor voltage was observed at maltose, while the maximum ion abundance at high fragmentor voltage shifted to maltotriose or maltotetraose for Na, K, and Cs. Variation of the ionization efficiency was explained with the hydrated cation size and the binding energy of the analyte and alkali metal cation.
Wang, Ju-Hua;Xue, Xiu-Heng;Zhou, Jie;Fan, Cai-Yun;Xie, Qian-Qian;Wang, Pan
Parasites, Hosts and Diseases
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제53권3호
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pp.335-339
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2015
Cryptosporidium andersoni ATP-binding cassette (CaABC) is an important membrane protein involved in substrate transport across the membrane. In this research, the nucleotide binding domain (NBD) of CaABC gene was amplified by PCR, and the eukaryotic expression vector of pEGFP-C1-CaNBD was reconstructed. Then, the recombinant plasmid of pEGFP-C1-CaNBD was transformed into the mouse intestinal epithelial cells (IECs) to study the iron transportation function of CaABC. The results indicated that NBD region of CaABC gene can significantly elevate the transport efficiency of $Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$, $K^+$, and $HCO_3{^-}$ in IECs (P<0.05). The significance of this study is to find the ATPase inhibitors for NBD region of CaABC gene and to inhibit ATP binding and nutrient transport of CaABC transporter. Thus, C. andersoni will be killed by inhibition of nutrient uptake. This will open up a new way for treatment of cryptosporidiosis.
목적: 변형 체내 표지법으로 적혈구 표지시 영향을 미칠 수 있는 인자에는 수혈, 환자에게 투여된 약제, 염화주석의 양, 발생기 내부성장 시간, tinning 시간, 배양시간, 혈액 양, 항응고제의 종류, 채취한 혈액을 배양시 rotating invertor 사용 유무 등 매우 다양하다. 저자들은 tinning 시간, 혈액 양, 채취한 혈액을 배양시 rotating invertor 사용 유무, 배양시간, 항응고제의 종류에 따라 변형 체내 표지법으로 적혈구 표지시 높은 결합효율을 유지시키기 위한 최상의 조건을 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 2003년 3월부터 2004년 2월까지 과거에 빈혈, 혈액응고 질환, 출혈성 질환 등의 질병이 없는 자발적인 지원자 30명(남:여=19:11, 연령: $25{\pm}2$세)을 대상으로 하였다. Tinning시간, 혈액 양, 배양시간과 항응고제의 종류에 대한 실험에서는 각각의 인자마다 15명을 대상으로 45개씩, 모두 180개의 혈액 샘플을 얻었고, rotating invertor 사용유무에 대한 실험에서는 15명을 대상으로 30개를 얻어 총 210개의 혈액 샘플을 얻었다. 채취 한 혈액샘플은 원심분리기에서 상층액과 하층액으로 분리시켜 각각의 결합효율을 계산한 후 SPSS 10.0 프로그램을 이용하여 paired T-test와 one way ANOVA통계 검정을 실시하였다. 결과: Tinning 시간에 따른 결합효율은 5분일 때 $45{\pm}23%$, 20분일 때 $97{\pm}8%$, 35분일 때 $98{\pm}6%$로 20분과 35분에서 유의하게 높은 결합효율을 보였다(p<0.001). 혈액 양에 따른 결합효율은 1 mL일 때 $73{\pm}32%$, 3 mL일 때 $91{\pm}10%$, 5 mL일 때 $96{\pm}7%$로 3 mL와 5 mL에서 유의하게 높은 결합효율을 보였다(p<0.05). Rotating invertor를 사용한 경우 결합효율은 $96{\pm}7%$로 사용하지 않은 경우의 $87{\pm}18%$에 비하여 높았으나 통계학적으로 유의한 차이는 없었다(p>0.05). 배양시간에 따른 결합효율은 10분일 때 $96{\pm}7%$, 25분일 때 $95{\pm}12%$, 40분일 때 $98{\pm}3%$로 통계학적으로 유의한 차이는 없었다(p>0.05). 항응고제 종류에 따른 결합효율은 헤파린을 사용한 경우 $89{\pm}20%$, CPDA를 사용한 경우 $97{\pm}6%$, ACD를 사용한 경우 $98{\pm}4%$로 CPDA와ACD를 사용한 경우에 유의하게 높은 결합효율을 보였다(p<0.001). 결론: 변형 체내 표지법으로 적혈구를 표지시 우수한 결합효율을 유지하기 위해서는 채취하는 혈액의 양은 3 mL 이상, 배양시간은 10분 이상(10분-40분), 항응고제는 ACD나 CPDA tinning 시간은 20분 이상(20-35분)을 유지하고, 가능한 rotating invertor를 사용하는 것이 좋을 것으로 생각된다.
가축의 번식과 수요를 조절할 수 있는 생물학적 자극 통제 수단으로 새로운 돼지 페르몬성 냄새 물질를 탐색하고자, 기질 분자로서 2-cyclohexyloxytetrahydrofurane (A), 2-phenoxytetrahydrofurane (B) 유도체들의 설명인자인 물리화학 파라미터와 돼지 페로몬의 수용체 (pOBP)에 대한 결합 친화력 상수($p[Od.]_{50}$) 간의 2D-QSAR 모델을 유도하고 검토하였다. 2D-QSAR 모델은 결합 친화력 상수를 약 96.4% 설명하는 매우 양호한 모델($r^{2}=0.964$)로서 분자내 치환기의 소수성 (SL) 상수에 관한 적정값이 $(SL)_{opt.}=1.418$일 때 가장 높은 결합 친화력을 나타냄을 알았다. 그러므로 분자내 치환기의 소수성 인자가 결합 친화력 상수에 가장 큰 영향을 미치는 중요한 요소이었다.
여러 이동 노드들로 구성되는 이동 네트워크의 움직임을 지원하기위해, IETF NEMO 작업 그룹은 홈 에이전트와 이동 라우터 사이에서 양방향 터널링을 사용하는 NEMO 기본 지원 프로토콜을 제안했다. NEMO 기본 지원 프로토콜이 양방향 터널링에 근간을 두고 있기 때문에, 이동 노드들의 통신은 모든 경우에서 비효율적인 경로를 통해 이루어진다. 라우팅의 비효율성 문제를 해결하기 위해, 여러 제안이 있었으나 이들 제안들은 바인딩 갱신 폭풍이나 기존 프로토콜의 변경과 같은 새로운 문제를 초래한다. 특히, 바인딩 갱신 폭풍 문제는 바인딩 갱신 지연을 유발할 수 있고, 결과적으로는 이동 네트워크의 이동시에 원활한 실시간 서비스의 제공을 어렵게 하고 핸드오프 지연을 초래한다. 이 논문은 바인딩 갱신 메시지 전송시간의 분산을 통해 바인딩 갱신과 핸드오프 지연을 감소시키는 새로운 바인딩 갱신 기법을 제안한다. 또한, 제안된 기법의 효율성을 보여주기 위해 제안 기법의 성능이 평가되어진다. 시뮬레이션 결과는 제안된 기법이 바인딩 갱신의 지연시간을 효과적으로 감소시킴을 보여준다.
Ha, Jae-Seok;Lee, Young-Mi;Choi, Su-Lim;Song, Jae-Jun;Shin, Chul-Soo;Kim, Ju-Hea;Lee, Seung-Goo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제18권3호
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pp.443-448
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2008
Multidomain proteins for the biochemical analysis of the scouring efficiency of cotton fabrics were constructed by the fusion of a reporter moiety in the N-terminal and the cellulose binding domain (CBD) in the C-terminal. Based on the specific binding of the CBD of Cellulomonas fimi exoglucanase (Cex) to crystalline cellulose (Avicel), the reporter protein is guided to the cellulose fibers that are increasingly exposed as the scouring process proceeds. Among the tested reporter proteins, a thermostable ${\beta}$-glycosidase (BglA) from Thermus caldophilus was found to be most appropriate, showing a higher applicability and stability than GFP, DsRed2, or a tetrameric ${\beta}$-glycosidase (GUS) from Escherichia coli, which were precipitated more seriously during the expression and purification steps. When cotton fabrics with different scouring levels were treated with the BglA-CBD and incubated with X-Gal as the chromogenic substrate, an indigo color became visible within 2 h, and the color depth changed according to the conditions and extent of the scouring.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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