The purpose of this study was to investigate probiotic characteristics and immune enhancing effects of Bifidobacterium (B.) longum KBB1-26 and BIF-4, B. breve KBB5-22 isolated from human intestine for probiotic use in humans and animals. We measured acid, bile and heat tolerance, antimicrobial activity against pathogenic bacteria, Escherichia (E.) coli, Salmonella (S.) Enteritidis, Staphylococcus (S.) aureus, and Listeria (L.) monocytogenes. Immune enhancing effects of B. longum and B. breve were investigated by measuring nitric oxide (NO), nuclear factor ($NF-{\kappa}b$), $interleukin-1{\beta}$ ($IL-1{\beta}$), interleukin-6 (IL-6), interleukin-12 (IL-12) and tumor necrosis $factor-{\alpha}$ ($TNF-{\alpha}$) in RAW 264.7 cells or RAW BLUE cells. B. longum KBB1-26 was survived at pH 2.0. B. longum KBB1-26 and BIF-4, B. breve KBB5-22 also showed tolerance to 0.3% of oxgall bile salt. B. longum KBB1-26 was able to survive at $70^{\circ}C$ and $80^{\circ}C$ for 20 min. KBB1-26 showed the antimicrobial inhibition zone to pathogenic bacteria such as E. coli (12 mm), S. Enteritidis (14 mm), S. aureus (14 mm) and L. monocytogenes (41 mm). The production of NO ($4.5{\pm}0.00{\mu}M/mL$) and $IL-1{\beta}$ ($39.7{\pm}0.55pg/mL$) of KBB1-26 significantly higher than BIF-4 and KBB5-22, respectively. In addition, KBB1-26 and KBB5-22 induce the production of high level of $TNF-{\alpha}$ and IL-6 in macrophages. Collectively, B. longum KBB1-26 have acid, bile, heat tolerance, antimicrobial activity and immune enhancing effects. These results suggest that KBB1-26 can be used as probiotics for humans and animals.
발효 및 유산균 제품에 모유만을 먹은 생후 3개월된 유아의 분변으로부터 bromocresol pule을 함유한 MRS 배지에서 노란색의 집락을 형성하는 균주들을 내산성 및 담즙산 내성이 우수한 13종의 Lactobacillus 균주들을 분리하였으며 당발효성 및 생화학적 실험을 토대로 분리된 유산균들을 동정하였다. 최종적으로 선발한 균주를 L. acidophilus로 KY1909로 명명하였다. Lactic acid 생성 능력을 평가한 후 이성질체를 분석한 결과 상업적으로 이용되는 L. acidophilus NCFM, L. acidophilus CH5, L. acidophilus NOCKS 균주들은 전체 lactic acid 중에서 L(+) form이 차지하는 비율이 각각 52.49, 40.63 및 63.13%로 나타났으나, L. acidophilus KY1909는 L(+) lactic acid의 비율이 93.96%로 나타났다.
Cho, Seung Kee;Lee, Soo Jin;Shin, So-Yeon;Moon, Jin Seok;Li, Ling;Joo, Wooha;Kang, Dae-Kyung;Han, Nam Soo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제25권12호
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pp.2100-2105
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2015
Probiotic bacteria must have not only tolerance against bile salt but also no genes for antibiotic resistance. Leuconostoc citreum is a dominant lactic acid bacterium in various fermented foods, but it is not regarded as a probiotic because it lacks bile salt resistance. Therefore, we aimed to construct a bile salt-resistant L. citreum strain by transforming it with a bile salt hydrolase gene (bsh). We obtained the 1,001 bp bsh gene from the chromosomal DNA of Lactobacillus plantarum and subcloned it into the pCB4170 vector under a constitutive P710 promoter. The resulting vector, pCB4170BSH was transformed into L. citreum CB2567 by electroporation, and bile salt-resistant transformants were selected. Upon incubation with glycodeoxycholic acid sodium salt (GDCA), the L. citreum transformants grew and formed colonies, successfully transcribed the bsh gene, and expressed the BSH enzyme. The recombinant strain grew in up to 0.3% (w/v) GDCA, conditions unsuitable for the host strain. In in vitro digestion conditions of 10 mM bile salt, the transformant was over 67.6% viable, whereas only 0.8% of the host strain survived.
건강한 성인의 분변으로부터 담즙산 분해능이 우수한 젖산균의 분리를 위하여 무작위 선별법과 도말법을 사용하여 층 120주의 젖산균을 1차 분리하였고, 그중 5종의 젖산균을 최종 선발하였다. 유용한 젖산균이 갖추어야할 중요한 성질인 내산성, 내담즙산성, 대장균 저해능을 시험한 결과 Lactobacillus sp. CK 102이 가장 우수한 균주로 나타났다. Lactobacillus sp. CK 102 균주는 pH 2.0에서 68% 이상의 내성과 1.0% 담즙산이 함유된 배지에서 90%이상의 내성을 나타냈으며 MRS 배지에서 대장균과 혼합 배양시 18시간 이내에 대장균을 100% 사멸시켰다. 젖산균제로써 기능이 가장 우수한 균주인 Lactobacillus sp. CK 102를 API kit와 16S rRNA sequencing 방법을 사용하여 동정한 결과 Lactobacillus platarum 으로 밝혀졌다. 이상의 결과에서 분리한 Lactobacillus sp. CK 102는 생균제로서 안전하게 이용할 수 있는 것으로 나타났다.
With the objective of identifying the commercial potential of new direct-fed microbials, several temperature-tolerant strains were isolated from cane molasses at $39^{\circ}C$ and tested for their tolerance to pH, bile salts, and a mixture of volatile fatty acids (acetic acid:propionic acid:butyric acid=6.5:2.0:1.5). It was found that the isolated strain DY 252 grew very well up to pH 2.0 and was resistant to relatively high concentrations of bile salts. Among the strains tested, DY 252 was least inhibited by the addition of volatile fatty acids to the growth medium at $39^{\circ}C$. Accordingly, it would appear that strain DY 252, identified as yeast Issatchenkia orientalis, may be a potential candidate for use as a microbial feed additive.
Bifidobcterium spp. can provide human being with several beneficial physiological. Therefor, there has been a considerable interest in products Bifidobcterium spp. dietary supplements or as starter cultures for probiotic products that may assint in the improvement of health on the human. But indusrial applications have been limited because Bifidobcterium spp. are sensitive to acidic pH due to organic acid produced by themselves and various conditions. The objective of this study was to establish new method for improvement of Bifidobcterium viability by entrapment im calcium alginate beads. We have a plan to select the most suitable polymer through the comparison with acid tolerance oxygen tolerance and theological properties of polymer. Increase of the viable number of Bifidobcterium induced increasing acid tolerance and oxygen tolernce trough the development of entrapment technique. The 4%, 3030mm diameter) sodium alginate beads led to the best survivability under acid condition. Especially, addition of 6% mannitol, 6% glycerol or 6% sorbitol to the sodium alginate helped a beneficial effect on viability against acid, bile salt, hydrogen peroxide and cold strage. The number of viability of entrapeede cells by retreatment was 96 fold higher than non-entrapeed cells after 5 hours of storage under pH 3 acidic condition. These experimental data clearly demonstrate that a whole cell immobilization by entrapment in calcium alginate beads is an important survival mechanism enable to withstand environmental stresses as the acidic condition, hydrogen peroxide toxicity and frozen state.
국내 액상발효유 7개 회사 제품을 수거하여 미생물학적인 특성을 조사하였다. 7개 회사 제품(A, B, C, D, E, F 및 G)에서 분리한 8종의 유산균(a, b, b', c, d, e, f 및 g)을 동정해 본 결과 A회사 제품의 a균과 E회사 제품의 e균은 L. casei로 B회사 제품의 b균은 L. acidophilus로, B회사 제품의 b'균, C 회사 제품의 c균 및 G회사 제품의 g균은 L. jugurti로, F 회사 제품의 f균은 L. helveticus로, D회사 제품의 d균은 L. bulgaricus로 각각 동정되었다. L. helveticus로 동정된 f균과 L. jugurti로 동정된 c균은 인공위액에 대한 내성은 높았으나 담즙산에 대한 내성은 높지 못했다. L. acidophilus로 동정된 b균과 L. casei로 동정된 a균 및 e균은 인공위액과 담즙산에 대한 내성이 모두 높았고, L. bulgaricus로 동정된 d균과 L. jugurti 동정된 b'균 및 g균은 인공위액과 담즙산에 대한 내성이 모두 낮았다.
Probiotics are live microorganisms that, when administered in adequate amounts, confer health benefits to the host. This study was conducted for the isolation of potential lactic acid bacteria (LAB) with probiotic properties from goat milk and yogurt. Several tests were conducted in vitro using the standard procedures for evaluating the inhibitory spectra of LAB against pathogenic bacteria; tolerance to NaCl, bile salt, and phenol; hemolytic, milk coagulation, and bile salt hydrolase activities; gastrointestinal transit tolerance; adhesion properties; and antibiotic susceptibility. Among 40 LAB strains screened according to culture characteristics, five isolates exhibited antagonistic properties. Three were identified as Pediococcus acidilactici, and two were identified as Enterococcus faecium, exploiting 16S rRNA gene sequencing. All the isolates succeeded in the gastrointestinal transit tolerance assay and successively colonized mucosal epithelial cells. Based on the results of these in vitro assays, both P. acidilactici and E. faecium can be considered as potential probiotic candidates.
Lactic acid bacteria were isolated from pig feces for probiotics. The six isolated strains were identified as Lactobacillus paracasei (Lp), Lactobacillus fermentum (Lf), Lactobacillus brevis (Lb), Lactobacillus plantarum (P1 , P2), and Pediococcus pentosaceus (P3) by its sugar utilization, morphological and physiological characteristics. Pl was showed largest antibacterial inhibition zone among the isolated strains. It was against Salmonella gallinarum 25mm, E. coli 20.5mm, Staphylococcus aures 24mm, and Pseudomonas aeruginosa 28mm by inhibitory zone, respectively. Lf was showed hyper acid tolerance, $80\%$ survival rate for 40 minutes, and P1, Lb showed hyper bile tolerance, $408\%,\;283\%$ survival rate for 9 hrs, respectively. Therefore the Lf, P1, and P2 strains were expected to probiotics.
Surono, Ingrid S.;Pato, Usman;Koesnandar, Koesnandar;Hosono, A.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제22권1호
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pp.119-123
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2009
In vitro acid- and bile-tolerant lactic acid bacteria isolated and identified from Indonesian traditional fermented milk dadih might be considered as potential probiotic strains after further characterization with animal models, especially for their therapeutic properties. Five dadih lactic bacteria isolates each had moderate survival rate for 2 h at pH 2.0, as well as bile tolerance. The aim of this research was to identify candidate probiotic lactic bacteria among indigenous dadih lactic isolates originated from Bukit Tinggi, West Sumatra, especially their in vivo antimutagenic property. Milk cultured with Enterococcus faecium IS-27526 significantly lowered fecal mutagenicity of rats as compared to the control group, skim milk, and milk cultured with L. plantarum IS-20506. These results suggest that Enterococcus faecium IS-27526 may serve as a potential probiotic strain with its antimutagenicity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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