In this study, a method of heat adaptation was implemented in an attempt to increase the upper thermal threshold of two Streptococcus thermophilus found in South Korea and identified the alterations in membrane fatty acid composition to adaptive response to heat. In order to develop heat tolerant lactic acid bacteria, heat treatment was continuously applied to bacteria by increasing temperature from 60℃ until the point that no surviving cell was detected. Our results indicated significant increase in heat tolerance of heat-adapted strains compared to the wild type (WT) strains. In particular, the survival ratio of basically low heat-tolerant strain increased even more. In addition, the strains with improved heat tolerance acquired cross protection, which improved their survival ratio in acid, bile salts and osmotic conditions. A relation between heat tolerance and membrane fatty acid composition was identified. As a result of heat adaptation, the ratio of unsaturated to saturated fatty acids (UFA/SFA) and C18:1 relative concentration were decreased. C6:0 in only heat-adapted strains and C22:0 in only the naturally high heat tolerant strain were detected. These results support the hypothesis, that the consequent increase of SFA ratio is a cellular response to environmental stresses such as high temperatures, and it is able to protect the cells from acid, bile salts and osmotic conditions via cross protection. This study demonstrated that the increase in heat tolerance can be utilized as a mean to improve bacterial tolerance against various environmental stresses.
The aim of this study was to evaluate the functional properties of lactic acid bacteria from various sources and to identify strains for use as probiotics. Ten Lactobacillus strains were selected and their properties such as bile tolerance, acid resistance, cholesterol assimilation activity, and adherence to HT-29 cells were assessed to determine their potential as probiotics. Lactobacillus sp. JNU 8829, L. casei MB3, L. sakei MA9, L. sakei CH8, and L. acidophilus M23 were found to show full tolerance to the 0.3% bile acid. All strains without L. acidophilus M23 were the most acid-tolerant strains. After incubating the strains at pH 2.5 for 2 h, their viability decreased by 3 Log cells. Some strains survived at pH 2.5 in the presence of pepsin and 0.3% bile acid. Lactobacillus sp. JNU 8829, L. acidophilus KU41, L. acidophilus M23, L. fermentum NS2, L. plantarum M13, and L. plantarum NS3 were found to reduce cholesterol levels by >50% in vitro. In the adhesion assay, Lactobacillus sp. JNU 8829, L. casei MB3, L. sakei MA9, and L. sakei CH8 showed higher adhesion activities after 2 h of co-incubation with the intestinal cells. The results of this comprehensive analysis shows that this new probiotic strain named, Lactobacillus sp. JNU 8829 could be a promising candidate for dairy products.
In order to develop probiotic strain for pigs, Lactobacillus spp. (527 isolates), Streptococcus spp. (95 isolates) and Bifidobacterium spp. (25 isolates) were isolated from the feces of 35 pigs. These isolates were tested through in vitro experiment such as acid tolerance at pH 2.0 (Lactobacillus spp. and Streptococcus spp.) or pH 3.0 (Bifidobacterium spp.), bile tolerance in MRS broth containing 0.3% (w/v) Oxgall, heat resistance at $70^{\circ}C$ and $80^{\circ}C$ for 5 min, antibiotic resistance, antimicrobial activity against pathogenic bacteria and Caco-2 cell adherence assay. Finally ten most superior strain (5 Lactobacillus spp. strain, 3 Bifidobacterium spp. strain and 2 Streptococcus spp. strain) were selected as potential candidate for probiotic use in pig industry. It could be used as an alternative to antibiotics in feed additives.
The purpose of this study was to investigate the acid tolerance, bile acid tolerance, and fermentation activity of lactic acid bacteria isolated from Kimchi in the presence of hydrolysates of whey protein concentrate. Kimchi isolates DK109, DK119, DK121, DK128, DK211, DK212, and DK215, which were identified as Lactobacillus sp., and L. casei DK128 showed the highest acid and bile acid tolerance. To produce whey hydrolysates, enzymes were added to a 10% (w/v) whey protein concentrate (WPC) solution at 1:50 (w/v, protein). The viabilities of the DK strains were determined in the presence of low pH and bile salts. Then, yogurt was produced via fermentation with L. casei DK128, an isolate from Kimchi, in the presence of the following additives: CPP, WPC, and WPC hydrolysates (WPCH) generated by alcalase (A) or neutrase (N). The produced yogurts were subjected to various analyses, including viable cell counts (CFU/mL), pH, titratable activity, and sensory testing. After 8 h of fermentation, the pH and titratable activity values of all test samples were 4.2 and 0.9, respectively. The viable counts of LAB were $3.49{\times}10^8$, $5.72{\times}10^8$, $7.01{\times}10^8$, and $6.97{\times}10^8$, for the Control, CPP, A, and N samples, respectively. These results suggest that whey proteins have potential as dietary supplements in functional foods and that WPCH could be used in yogurt as a low-cost alternative to CPP.
The probiotic characteristics of a total of 137 lactic acid bacterial strains isolated from soybean paste were investigated. Among those tested, the D37 strain was selected as a probiotic bacteria due to its acid and bile tolerance, and its strong anti-cancer and antibacterial activities. The D37 strain showed highly stable viability at acidic pH for 2 hr, and was very stable in 10% bovine bile. The viability of human colon cancer HT-29 cells was inhibited more than 60% at a $200\;{\mu}/mL$ concentration of D37 cell-free culture supernatant, and the degree of inhibition was concentration-dependent. The D37 strain showed a wide range of antibacterial activities against food-borne pathogenic bacteria such as Escherichia coli O157, Listeria spp., Vibrio spp., Salmonella spp., and Staphylococcus aureus. According to phenotypic characteristics and the utilization of various sugars, the D37 strain was identified as Lactobacillus cellobiosus.
Lactic acid bacteria were isolated from piglets and chicken and characterized. Lactic acid bacteria showing resistance to low pH and bile, adhesion to intestinal epithelium cells, and the inhibition of Escherichia coli and Salmonella spp. were identified as Lactobacillus acidophilus. L. acidophilus PF01 survived for 2 h in MRS broth adjusted to pH 2. L. acidophilus CF07 was less resistant than L. acidophilus PF01 to pH 2, but survived at pH 2.5 for 2 h. Both of isolates were able to grow in MRS broth containing 0.3% (w/v) bile, with L. acidophilus CF07 being more tolerant to bile than L. acidophilus PF01. L. acidophilus PF01 and CF07 adhered specifically to the duodenal and jejunal epithelium cells of piglet, and the cecal and duodenal epithelium cells of chicken, respectively. Both of isolates did not adhere to the epithelium cells of the various animal intestines from which they were isolated. When L. acidophilus was cultured with E. coli and Salmonella spp. in MRS broth, MRS broth containing 2% skim milk powder or modified tryptic soy broth at $37^{\circ}C$, L. acidophilus PF01 and CF07 inhibited the growths of E. coli K88 and K99, and S. enteritidis and S. typhimurium, respectively. Both of isolates were found to possess the essential characteristics of probiotic lactic acid bacteria for piglet and chicken.
본 연구는 모유를 섭취하고 있는 생후 7일째 신생아의 분변으로부터 L. acidophilus를 분리 및 동정하고, 이들의 생리적 특성을 규명하여 상업적 이용가능성을 검토하고자 실시하였다. 이를 위해 pH 5.5에서 생장하는 lactobacilli 43균주를 분리하고, 그 중 pH 2.5에서 생존율이 약 80% 이상이고, homo 젖산 발효를 하는 lactobacilli 14균주를 1차 분리하였으며, 분리된 lactobacilli 14균주의 생화학적 특성, 당 이용성 및 균체 지방산 조성의 확인을 통해 동정된 L. acidophilus 9균주(NB 201~NB 209)를 시험 균주로 선발하였다. 내산성 실험 결과, 시험 균주를 pH 2.5에서 2시간 배양하였을 때 모든 시험 균주가 80% 이상의 생존율을 나타내었으며, L. acidophilus NB 204는 pH 2.0에서도 71%의 생존율을 보여 내산성이 높은 것으로 나타났다. 담즙산 내성은 73%의 생존율을 보인 L. acidophilus NB 206을 제외한 8균주가 bile extract가 1%의 농도로 첨가된 배지에서 생존율이 85% 이상으로 담즙산 내성이 매우 우수한 것으로 확인되었다. 또한 시험 균주 모두가 단백질 분해 활력이 있는 것으로 확인되었으며, yeast extract 0.1% 첨가한 것과 비교하여 0.2% 첨가 시 또는 24시간 배양과 비교하여 48시간 배양 시 TCA 가용성 펩타이드 및 유리 아미노산 생성량이 높았으며, 특히 L. acidophilus NB 204와 NB 209가 높은 생성량을 보였다(또는, yeast extract의 첨가량 및 배양시간이 증가함에 따라 TCA 가용성 펩타이드 및 유리 아미노산 생성량이 증가하였으며, 특히 L. acidophilus NB 204와 NB 209가 높은 생성량을 보였다). 시험 균주들의 ${\beta}$-galactosidase 활성은 1.97~2.45 unit/mL의 범위를 나타내었다.
The purpose of this study was to investigate the probiotic properties of lactic acid bacterial strains isolated from human feces. The properties were tested on the basis of guideline for probiotic selection protocol such as tolerance for acid or bile salt, autoaggregation, antibiotic resistance, and antimicrobial activity. Total 25 lactic acid bacteria were isolated from human feces, and their antibacterial activity was tested against Staphylococcus aureus, Escherichia coli, E. coli O157:H7, Vibrio parahaemolyticus, V. alginolyticus using an agar diffusion assay. Among them, 4 selected strains were identified by analysis of their 16S rRNA, as Lactobacillus rhamnosus MG316, L. acidophilus MG501, L. reuteri MG505, and L. gasseri MG570. Results show that resistance to low pH and bile salts. Also, the selected strains were resistant to bile acid up to 3% and their autoaggregation rates were as high as 60%. All strains tested were resistance to nalidixic acid and kanamycin.
신규 프로바이오틱스 균주로서 사용하기 위하여 한국의 염장 발효 생선가공품인 젖갈로부터 Paenibacillus sp. 균주들을 탐색하였다. 이들 균주들 중에서 BCNU 5016은 그람양성균으로 gelatinase와 urease를 생산하지 않는 전형적인 Paenibacillus sp. 균주로 확인되었다. 이 균주는 16S rDNA 염기서열 분석을 바탕으로 계통적으로 Paenibacillus polymyxa의 근연종임이 확인되었다. Paenibacillus sp. BCNU 5016은 내산성 실험을 통해 pH 2.5에서 3h 배양 후에도 91.89%까지 생존함이 확인되었고, 담즙산에도 뛰어난 내성이 있음이 확인되었다. 또한 BCNU 5016은 자가응집능, 공동응집능 및 소수성 능력으로 볼 때 우수한 장점막 부착능력을 가지고 있는 것으로 판단된다. 그러므로 Paenibacillus sp. BCNU 5016은 프로바이오틱스 균주로서 우수한 잠재력을 가지고 있음을 확인할 수 있었다.
건강한 닭의 맹장에서 분리한 Lactobacillus sakei LAB 2와 LAB 8의 생균제로 이용을 알아보기 위해 기본적인 특성과 면역활성을 시험하였다. LAB 2와 LAB 8은 높은 내산성과 내담즙성을 가지고 있으며, 1차 대사산물인 유기산에 기인한 항균활성을 보였다. Salmonella 종을 병원성균으로 이용하여 최대 항균력을 나타내는 시간을 시험한 결과 48시간으로 나타났으며, 생성된 유기산 중 젖산의 생산량은 다른 Lactobacillus 균주보다 높게 조사되었다. In vitro 모델로 알아본 면역증진효과는 면역관련 세포의 증식과 사이토카인의 생산량 증가로 확인하였다. 이에 Lactobacillus sakei LAB 2와 LAB 8은 유용한 생균제로 개발할 수 있는 균으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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