Cotesia plutellae bracovirus (CpBV) is a polydnavirus symbiotic to C. plutellae parasitizing young larvae of the diamondback moth, Plutella xylostella. Several CpBV genes play important roles in suppressing immune responses of the parasitized larvae. This study tested a hypothesis that the CpBV genes inducing host immunosuppression could be applied to develop a potent recombinant baculovirus. Based on a previous study, a recombinant baculovirus expressing CpBV-ELP1 (AcMNPV-ELP1) was selected and multiplied using larvae of the beet armyworm, Spodoptera exigua. The recombinant viruses were produced in a yield of $5{\times}10^{10}$ polyhedral inclusion body (PIB)/larva. The cultured AcMNPV-ELP1 exhibited a much higher pathogenicity against S. exigua larvae. However, its insecticidal activity was varied among larval instars of S. exigua, in which first and late instars were high susceptible. Spray of the recombinant baculovirus ($5{\times}10^6PIB/mL$) exhibited higher control efficacy (${\approx}$ 88%) against S. exigua larvae infesting cabbage than a chemical insecticide, tebufenozide, at 7 days after treatment. These results indicate that AcMNPV-ELP1 mass-cultured using host insect system is highly pathogenic and can be applied to develop a novel microbial control agent.
This study was conducted to identify the insecticidal effect of a mixture of sophora extract and Bacillus thuringiensis against Spodoptera exigua on potted chinese cabbage in both laboratory and plastic house condition. In laboratory condition, mortality of larvae by BT ($1{\times}10^5$, $1{\times}10^6$, $1{\times}10^7cfu\;ml^{-1}$) alone was 27.5%, 51.3% and 92.5%, respectively, which was depend upon concentration of BT. Control efficacy of the mixture of BT and sophora extract was 98.8%, 88.8% and 91.3% which was higher than BT treatment only. The mixture of sophora and lower BT concentration was showed more increase of control efficacy. Anti-feedant effect by BT was depend on concentration of BT. At field experiment, the mixture of BT and sophora extract appeared higher mortality (72.2%, 67.8%, 61.1%) than BT treatment only (14.4%, 26.7%, 66.7%) similar with laboratory experiment. The mixture was less affected by environmental condition at field than BT only. Therefore, for effective control of beet armyworm without possibility to develop resistance against BT at farm, treatment of the mixture of sophora extract (0.033%) and BT ($1{\times}10^5cfu\;ml^{-1}$) would be considered more effective than BT treatment only.
We report here an improved collecting method of the infective juveniles multiplied in the host insect with the entomopathogenic nematodes, Steinernema carpocapsae Weiser. The specific characteristics of this method involved the opening of the host insect hemocoel after the population of their infective juveniles reached at the maximum (6 days at 25$\^{C}$ after nematode treatment to nonimmunized host insects) to facilitate the escape of the multiplied nematodes. It also used 'Baermann funnel'method to select the infective juveniles effectively. This improved 'Baermann funnel'method was compared with a traditional collecting method, which was characterized with a combination of untreated host insects and 'White trap'collecting method, in both yield and pathogenicity of the collected infective juveniles to the fifth instar larvae of beet armyworm, Spodoptera exigua (H bner). More than 95% of the nematode populations collected by the two methods represented the morphological infective juveniles. To prove the nematodes to be infective juveniles functionally, pathogenicity and infective activity were compared in the nematodes collected by the two methods. They were not different in both pathogenicities and infective activities which were measured by the numbers of nematodes penetrated into the hemocoel of the insect hosts after exposure for the specific times to the same dote of infective juveniles. Significant difference between two collecting methods was found in the total yields of the infective juveniles per host insect About 50,000 infective juveniles per infected fifth instar larva of S. exigua after 6 day incubation at 25$\^{C}$ were collected only for 2 days by the improved 'Baermann funnel'method, while about 20,000 infective juveniles per host were collected for 10 days by the classical 'White trap'method.
Development of pellet-type artificial diet for insect was tried by using a twin screw extruder(TSE). Screws were arranged several times and two reverse screws were equipped on the foreparts of 2 axes of TSE. Pellet-type diet could be produced successfully under conditions of TSE set as the following. : 300 rpm of main motor speed, 228 rpm of feed motor speed, $75m{\ell}/min$ of running water speed and 5 mm of extrusion diameter. The optimum adding quantity of water to the manufactured diet was $1.2{\sim}1.5$ times of dry diet. On the rearing results of beet armyworm, Spodoptera exigua and common cutworm, Spedoptera litura with the pellet-type diet, the final survival ratio (emergence rate) of these two species was over than 50%, and so it was concluded that the manufactured pellet-type artificial diet was sufficient dietetically to rear those insects.
Simple diagnostic kits for monitoring insecticide susceptibility of beet armyworm, Spodoptera exigua (Hiibner) were developed and applied to the field populations. The operation of the kits was based on the correlations between enzyme activities of esterase (EST) and acetylcholinesterase (AChE) and the insecticide susceptibilities. Four different kinds of diagnostic kits (ED, EM, AD, and AM) were designed and classified by diagnostic enzymes (E for esterases and A for acetylcholinesterase) and inhibitors (D for dichlorvos and M for monocrotophos). Diagnostic inhibitor concentrations were 1 mM for ED, 10 mM for EM, 100 mM for AD, and 100 mM for AM. Resistant larvae which were not inhibited by the diagnostic amounts of insecticides developed positive staining (red color), but susceptible~ s howed negative (no color). An insect was used for both EST and AChE diagnostic kits, but different in their samples: hemolymph for EST and the head for AChE. These four diagnostic kits were applied to 1 1 different populations which showed variations of insecticide susceptibilities. Four kits were different in the capability discriminating the insecticide susceptibilites according to insecticides: ED to bifenthrin, AD to methomyl, and ED and AM to chlorpyrifos-methyl. These diagnostic devices can be used for insecticide-resistance management program for this insect pest. It also provide a technical guide to insect pest management for farmers, directors, and researchers.
Some high frequency sounds alter physiological processes of the beet armyworm, Spodoptera exigua. This study investigated the effect of ultrasound (${\geq}$ 20 kHz) on larval feeding, pupal development, and adult mating behavior of S. exigua. Ultrasound suppressed feeding behavior of fifth instar larvae, and 30 or 45 kHz treatment inhibited more than 50% of feeding activity. Larvae treated with ultrasound exhibited alterations in major nutrient compositions in the hemolymph plasma. Plasma protein levels decreased with an increase in ultrasound frequency. In contrast, sugar levels increased with an increase in ultrasound frequency. Lipid levels increased with an increase in ultrasound frequency up to 30 kHz and then decreased at treatments > 30 kHz. Hemocytes, the fat body, and epidermis expressed three heat shock proteins and apolipophorin III. Ultrasound treatment markedly inhibited expression of some stress-related genes. Ultrasound treatment also inhibited S. exigua pupal development by extending the pupal developmental period and preventing adult emergence. Last, ultrasound treatment significantly inhibited adult mating behavior, which resulted in a significant decrease in female fecundity. These results show that ultrasound is a physiological stress to S. exigua.
Field application of the entomopathogenic nematode, Steinernema carpncapsae, is limited by its susceptibility to UV irradiation and desiccation especially at leaf spray control. This study was conducted to develop the control technique using alginate biocapsulation of the nematodes against the beet armyworm, Spodoprera exigua and the tobacco cutworm, Sp. litura that are normally infesting hosts above ground level. The alginate capsules including infective juveniles gave significant feeding toxicities to the larvae of the two lepidopteran species. The lethality followed a typical sigmoid dose-mortality pattern with increase of the nematode densities embedded in the capsules. Moisture content in the capsule was critical to the survival of the infective juveniles. More than 80% nematodes could survive above 10% moisture content remained in the capsule. Remaining moisture content within the capsule was dependent on relative humidity, ambient temperature, and capsule size, but not on citric acid reaction time during capsule formation. More than 80% of infective juveniles in the alginate capsules could survive in distilled water at 15$^{\circ}C$ for 60 days. When these nematode capsules containing welsh onion extract as another phagostimulant were applied on the 3rd instar larvae of Sp. exigua infesting peanut plants, they resulted in about 90% control efficacy. These results indicate that the alginate capsulation can be used for leaf-spray agent of the entomopathogenic nematodes as well as for improved storage purpose.
The effect of physiological factors of beet armyworm, Spodoptera exigua (Hubner), on esterase variation was analyzed by comparing electrophoretic esterase isozymes. Each esterase isozyme was also characterized by substrate and inhibitor specificities. A total of 28 esterase isozymes were separated on 10% nondenaturing polycarylamide gel electrophoresis (PAGE). These isozymes were denoted from El to E28 according to cathodal migration distances. There was a variation in esterase isozymes among developmental stages. Larvae and pupae had more isozymes than did adults. Eggs had only eight isozymes. The isozymes of El and E2 were specific only in the first instar larvae. Esterases also showed variation according to different tissues. More kinds of esterase isozymes were found in epidermis and gut tissues than in hemolymph and fat body. Some isozymes were specific in epidermis (from El to E6), gut (E10, El 1, E25, E26, and E27), and hemolymph (E18). Among 10 naphthyl esters, a-naphthyl propionate was the most reactive substrate to the esterase isozymes. The isozymes were classified into cholinesterases (El0 and E24), arylesterases (E4, E9, E17, E19, E21, and E23), and carboxylesterases (the others) on the basis of inhibition by the esterase inhibitors-eserine, dichlorovos, moncrotophos, and paraoxon.
Eicosanoid mediates various cellular immune responses in insects. This study aimed to discover its novel action on the modulation of hemocyte populations in response to an immune challenge. Upon bacterial challenge, the last instar larvae of the beet armyworm, Spodoptera exigua, increased their total hemocyte density in 2 h, and then decreased it to a basal hemocyte density level. This rapid increase in total hemocyte density was explained by an increase of plasmatocyte and spherulocyte densities. When larvae were treated with dexamethasone (a specific phospholipase $A_2$ ($PLA_2$) inhibitor), they did not show any increase in hemocyte density in response to bacterial challenge. However, the addition of arachidonic acid (a catalytic product of $PLA_2$) to larvae treated with dexamethasone recovered the up-regulation of hemocyte density in response to bacterial infection. Among eicosanoid, cyclooxygenase (COX), but not lipoxygenase (LOX), products seemed to mediate the increase of hemocyte density in response to bacterial infection because naproxene (a COX inhibitor) inhibited the hemocyte density increase, though esculetin (a LOX inhibitor) did not. Prostaglandin $E_2$, a COX product, significantly increased the hemocyte density even without bacterial infection. These results suggest that eicosaniod mediates a rapid increase in total hemocyte density in response to immune challenge.
The concept of innate immunity in insects which refers to the first line of host defense constitutes the humoral and cellular components which are involved in recognition and actively participate in the elimination of the intruding foreign micro- or macro-organisms. Several recent studies suggest that juvenile hormone (JH) modulates the cellular immune reactions in response to pathogen. In this study, pyriproxyfen (a JH agonist as an insect growth regulator) was tested in its any inhibitory effect on the immune reactions of the beet armyworm, Spodoptera exigua. To this end, five different hemocyte morphotypes of final instar S. exigua were identified by phase contrast microscopy. Plasmatocytes and granular cells, which constitute about 90% of the total hemocyte count, were prominently distinguished based on their basophilic/acidophilic nature using Giemsa stain. The role of pyriproxyfen on the functional ability of hemocytes was analyzed using FITC-labeled Providencia vermicola for the phagocytic potential of the hemocytes. Both granular cells and plasmatocytes exhibited phagocytosis behavior. Pyriproxyfen significantly inhibited the phagocytosis of both cell types, proposing its novel action as an immunosuppressant.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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