[ $0.5\%$ ] lactophenol acid fuchsin으로 염색해 본 결과 보리흰가루 병균의 제1차 발아관에 반응하여 보리표피 세포에 papillae 및 cytoplasmic aggregate가 형성되었으나 그 크기는 부착기에 반응하여 형성된 것보다는 훨씬 작았으며 또한 접종후 36-48시간 이후의 표피세포내에는 acid fuchsin에 의해서 다른 세포들에 비해 세포전체가 좀 더 진하게 염색되는 곳이 군데군데 관찰되었다. 그러나 접종 후 96시간까지 지질과산화산물의 일종인 malondialdehyde의 함량은 증가하지 않았다. 접종 후 6시간에 형성된 papillae 및 cytoplasmic aggregate내에 callose, protein, phenol물질 등은 집적되었으나 접종 후 72시간까지도 cellulose, cutin, suberin, lignin등은 검출되지 않았다. 보리-흰가루병 상호조합의 상기 모든 반응은 race 비특이적이었다.
한국식물병리학회 1995년도 Proceedings of special lectures on Molecular Biological Approaches to Plant Disease National Agricultural Science and Technology Institute Suwon, Korea
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pp.27-53
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1995
In plant pathology there is an increasing necessity for improved cytological techniques as basis for the localization of cellular substances within the dynamic fine structure of the host-(plant)-pathogen-interaction. Low temperature (LT) preparation techniques (shock freezing, freeze substitution, LT embedding) are now successfully applied in plant pathology. They are regarded as important tools to stabilize the dynamic plant-pathogen-interaction as it exists under physiological conditions. - The main advantage of LT techniques versus conventional chemical fixation is seen in the maintenance of the hydration shell of molecules and macromolecular structures. This results in an improved fine structural preservation and in a superior retention of the antigenicity of proteins. - A well defined ultrastructure of small, fungal organisms and large biological samples such as plant material and as well as the plant-pathogen (fungus) infection sites are presented. The mesophyll tissue of Arabidopsis thaliana is characterized by homogeneously structured cytoplasm closely attached to the cell wall. From analyses of the compatible interaction between Erysiphe graminis f. sp. hordei on barley (Hordeum vulgare), various steps in the infection sequence can be identified. Infection sites of powdery mildew on primary leaves of barley are analysed with regard to the fine structural preservation of the haustoria. The presentation s focussed on the ultrastructure of the extrahaustorial matrix and the extrahaustorial membrane. - The integration of improved cellular preservation with a molecular analysis of the infected host cell is achieved by the application of secondary probing techniques, i.e. immunocytochemistry. Recent data on the characterization of freeze substituted powdery mildew and urst infected plant tissue by immunogold methodology are described with special emphasis on the localization of THRGP-like (threonine-hydrxyproline-rich glycoprotein) epitopes. Infection sites of powdery mildew on barley, stem rust as well as leaf rust (Puccinia recondita) on primary leaves of wheat were probed with a polyclonal antiserum to maize THRGP. Cross-reactivity with the anti-THRGP antiserum was observed over the extrahaustorial matrix of the both compatible and incompatible plant-pathogen interactions. The highly localized accumulation of THRGP-like epitopes at the extrahaustorial host-pathogen interface suggests the involvement of structural, interfacial proteins during the infection of monocotyledonous plants by obligate, biotrophic fungi.
흰가루병은 거의 모든 식물재배에서 나타나며, 다양한 곰팡이에 의해 발병한다. 본 연구에서는 천연물 추출물을 이용한 식물병원성 곰팡이 제어가능성을 검토하기 위해, 보리 흰가루병에서 분리된 Fusarium graminearum을 대상으로 900여종의 천연물 추출물의 항진균 활성을 평가하였다. 먼저 포자 발아억제 활성평가 결과 산초, 당귀, 미국가막사리, 까마중, 오수유, 윤판나물, 미치광이풀, 때죽나무, 백선, 방기, 정향, 멍석딸기, 호장근, 천황련, 작약, 대황, 모란, 달맞이꽃, 대극, 개박하 추출물을 1차 선별하였으며, 균사 생육억제 활성 원재료 확보 용이성 및 실제 적용 가능성 등을 고려하여 산초 추출물을 최종 선정하였다. 산초 추출물 조제 시 methanol 추출이 효율적이며, 순차적 유기용매 분획물의 경우 물 잔류물에서 항진균 활성이 나타났다. 그러나 methanol 추출물에 비해 분획물의 활성이 다소 감소하여 다양한 물질이 보완적으로 항진균 활성을 나타냄을 추측할 수 있으며, 미약하지만 methanol 추출물 및 분획물에서 항진균 활성도 확인하였다. 토마토 묘목을 이용한 산초 추출물의 활성 분획물의 약해평가 결과 $1,000\;{\mu}g/ml$ 농도 처리 시에도 특이한 약해는 나타나지 않았다. 본 연구결과는 F. graminearum에 의해 나타나는 흰가루병 제어에 산초 추출물이 유용함을 제시하고 있다.
흰가루병에 대하여 감수성인 봄보리품종 Peruvian과 성체식물 저항성품종 Asse의 4엽기에서 흰가루병에 감염되었을 때 $^{14}CO_2$동화와 $^{14}C-$동화산물의 대사변화를 연구하였다. 건전식물에서는 Peruvian과 Asse간에 $^{14}CO_2$동화와 $^{14}C-$동화산물 대사에서 차이가 어 없었다. 감염된 엽수가 늘어남에 다라 이들 두 품종에서 $^{14}CO_2$ 동화와 동화산물의 이행량은 감소하였다. 감염정도가 같을때도 Asse보다 Peruvian에서 $^{14}CO_2$동화가 더 감소되었다. 흰가루병이 감염되지 않은 제4엽에서도 $^{14}CO_2$고장이 줄어들었고, Peruvian에서 더 줄었다. 아래 3엽이 감염되었을 때 감염되어 있지 않는 상위 제4엽에서 fructose, glucose등의 탄수화물로 $^{14}C$가 결합되는 것을 억제하였고 Asse보다 Peruvian에서 억제가 더 컸다. 감염된 제3엽에서도 탄수화물내에 $^{14}C$이 줄어들었으나 Peruvian에서 $^{14}C$로 표식된 fructose, glucose함량이 더 높았다. 모든 식물기관에 $^{14}C$-유기산합성이 촉진되었고 Asse보다 Peruvian에서 합성이 더 뚜렷하였다. 감염된 제3엽이나 건전제4엽에서 $^{14}C$이 아미노산으로 결합되는 것이 증가하였으나 엽초로 이동은 감소되었다. 이들 잎에서 어떤 $^{14}C$-아미노산은 Asse보다 Peruvian에 더 많이 축적되었다.
봄보리 1.5엽기에 흰가루 병균을 접종하여 병진전에 따른 엽내전분함량변화를 측정하였다. 1.5엽기에 접종하였을 때 감수성 품종 Peruvian과 성체식물저항성 품종 Asse에서 상이한 전분축적양상을 보였다. 감염초기에서는 두 품종 모두 전분함량에 다소 변화가 있었다. 병반형성과 포자형성 동안 감수성 품종 Peruvian에서 전분함량감소가 뚜렷하였으나 Asse에서는 병반형성 동안 증가하였고 세포형성전후에 급격히 감소하였다. 감염이 심한 1.5엽에서 Peruvian은 급격한 전분감소를 보였으나 Asse는 감염강도에 관계없이 감염잎에 높은 전분함량을 유지하였다. 봄 보리의 성체식물저항성과 연관시켜 상이한 발육시기에서 흰가루병 감염된 잎의 전분축적역할을 논하였다.
Ampelomyces quisqualis 94013(AQ94013)는 오이 흰가루병에 대한 생물적 방제를 위하여 효과적인 기생균으로 선발되었다. AQ94013균의 대량배양기술을 개발하기 위하여 보리쌀, 쌀, 기장, 현미, 수수, 볍씨의 6종의 곡류를 이용하여 실험하였다. 그 중에서 보리쌀은 AQ94013의 생장과 포자형성에 가장 좋은 배지였다. 대량배양의 최적온도는 $25^{\circ}C$이였으며, $20^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 순이었다. 암배양 보다 광을 하루에 12시간 주기로 조사한 보리쌀배지에서 포자수가 적어서 광은 AQ94013의 포자형성을 억제하였다. 그러나 $30^{\circ}C$에서 형성된 포자는 오이 흰가루병균(Sphaerotheca fusca)에 대하여 30일간 기생력을 유지하였다. 보리 AQ94013의 배양방법은 30l-발효조를 이용하여 쌀분말(40g/l)을 첨가한 보리쌀분말액체배지에서 $25^{\circ}C$에서 5일간 암배양이 포자대량배양에 매우 효과적이었다.
생물전환은 친환경적이며 생물이용성을 증가시킬 수 있는 효과적인 방법이다. 백하수오 추출물을 이용해 보리 흰가루병에 대한 항균활성을 증진시키기 위하여 본 연구자들은 ${\beta}$-glucosidase를 이용하여 wilfoside C1G의 생물전환을 수행하였다. Wilfoside C1G와 cynauricuoside A(K1G)가 포함된 G 시료로부터 glucopyranosyl moiety를 분해하기 위하여 ${\beta}$-glucosidase를 처리하였다. 효소반응을 통해 wilfoside C1G와 K1G는 각각 wilfoside C1N과 wilfoside K1N으로 완전히 전환되었다. G 시료를 이용한 생물전환의 최적 조건은 에탄올 10%, 1,555 ${\mu}U$${\beta}$-glucosidase/ml, pH 5 및 $45^{\circ}C$로 결정되었다. 최적조건을 통해 생물전환을 실시한 후 흰가루병에 대한 방제효과를 조사한 결과, ${\beta}$-glucosidase에 의해 생물전환된 G 시료는 ${\beta}$-glucosidase가 처리되지 않은 G 시료보다 보리 흰가루병에 대해 우수한 방제효과를 나타냈다. 따라서 ${\beta}$-glucosidase를 이용한 생물전환은 흰가루병 방제 효과가 있는 백하수오 추출물의 항균활성을 증가시키는데 유용한 기술로 적용이 가능할 것으로 추정된다.
Methanol extracts of fresh materials of 57 plants were screened for in vivo antifungal activity against Magna-porthe grisea, Corticium sasaki, Botrytis cinerea, Phyto-phthora infestans, Puccinia recondita, and Blumeria graminis f. sp. hordei. Among them, seven plant extracts showed disease-control efficacy of more than 90% against at least one of six plant diseases. None of the plant extracts was highly active against tomato gray mold. The methanol extracts of Chloranthus japonicus (roots) (CjR) and Paulownia coreana (stems) (PcS) displayed the highest antifungal activity; the CjR extract controlled the development of rice blast, rice sheath blight, and wheat leaf rust more than 90%, and tomato gray mold and tomato late blight more than 80%. The PcS extract displayed control values of more than 90 % against rice blast, wheat leaf rust, and barley powdery mildew and more than 80% against tomato gray mold. The extract of PcS also had a curative activity against rice sheath blight and that of CjR had a little curative activity against rice blast. On the other hand, the extract of Rumex acetocella roots reduced specifically the development of barley powdery mildew. Further studies on the characterization of antifungal substances in antifungal plant extracts are underway and their disease-control efficacy should be examined under greenhouse and field conditions.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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